关于改革石蜡切片工艺的试验

众所周知,在石蜡切片的制作过程中,历来是用苯类(尤其是二甲苯)作为透明剂和石蜡的有机溶剂。组织块经酒精脱水后,必须再用二甲苯作为中间媒剂将酒精取代出来,然后才能进行透蜡。否则,虽然水分除尽,但组织内部积蓄酒精,石蜡仍难透入。同样,切片染色前和染色后,也需用二甲苯脱蜡和透明。因此,在整个制片过程中,不但要多次用到二甲苯,手续繁琐,而且组织块在二甲苯中浸渍时间较难掌握,久浸会使材料松脆,影响切片质量;时间不足又会影响透蜡效果。另外,苯类是有毒药品,且有致癌作用,对人体极为有害,国外组织学实验室     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

在蛙胚切片中应用正丁醇透明和苏木精整染的方法介绍

在教学上,常用蛙卵做脊椎动物发生的观察材料。由于蛙胚切片染色方法繁琐,卵黄易破碎,往往得不到满意的切片,因此,我采用正丁醇脱水,取得较满意的效果。这种方法的优点有二:(1)能与水、酒精及石蜡互溶,故脱水之后可不经过二甲苯透明而直接进行石蜡浸透包埋。(2)脱水时很少引起组织收缩和变脆。采用苏木精-伊红整染,其特点是颜色鲜艳,无过染现象。 1.取材于3—5月到郊外池塘或稻田采集材料(蟾蜍或青蛙卵),一般在上午八时左右采集,此时的蛙胚处于囊胚期,以后各期可在双筒解剖镜下进行鉴别,选择所需的发育时期的胚胎,分别进行固定。 2.固定用Tellyesniczky氏液(重铬酸钾0.5克、冰     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

18℃恒温下,石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间探索

目的:18℃恒温下,探索石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间,为组织切片技术提供可靠的理论依据,以使作出高质量的石蜡切片.方法:将固定好的肝、脾、心、肾组织按组织类型随机各分为六个实验组(n＝6),每组5块组织,制定六组脱水时间段(min):50、60、75、90、105、120,脱水采用的乙醇.每类组织自实验一至六组在浓度70％、80％、95％I、95％ II各级乙醇中的脱水时间,分别为所制定的六组脱水时间段,另外每组在100％Ⅰ和100％ Ⅱ的乙醇中脱水时间各为30 min,透明时间在二甲苯中肝、脾均为65 min;心、肾均为85 min.观察每类组织的各实验组在不同的时间段进行的脱水透明实验、将所得出的透明结果进行比对.实验制作重复五次,实验程序在18℃电热恒温箱中进行.结果:18℃恒温下,组织的最佳脱水时间在上行梯度各级浓度的乙醇中,肝、脾75 min;心、肾90 min,透明时间在二甲苯中肝、脾65 min;心、肾85 min.结论:在本实验的探索实践中体会到,好的脱水透明效果取决于组织块的大小、实验温度、脱水透明时间等,该研究得出的结果:”18℃恒温下,石蜡切片制作过程的脱水透明最佳时间”,有其有效性、可重复性、可行性,在石蜡切片技术领域可以推行应用.     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

细鳞泥鳅味蕾的形态初步研究

一、材料与方法 本研究所用材料为细鳞泥鳅(Misgurnus mizolepis Günther.)土名为肉泥鳅。 将捕来的细鳞泥鳅先放入水族箱中生活1—2天,然后破坏脑脊髓(杀死),放入盛有生理盐水的直径为12厘米的大培养皿中,剪下口须、唇、舌、口腔顶壁和底壁、咽等部位的材料,再分别放入带标签儿的已盛好波恩式固定液的指管中固定,经8—12小时后,用50％酒精冲洗,待黄色变浅后放入70％酒精中保存。然后做石蜡切片。切片的厚度为7—8微米,用窦来飞-苏木精染色,伊红复染,使胞核呈蓝色,胞质     

正庚烷代替二甲苯在拟南芥花药石蜡切片中的应用

二甲苯是应用最广的一种透明剂,常用于石蜡切片中的脱蜡和透明,但由于其对人体危害大,广大科研工作者一直在探寻更加安全的二甲苯代替物。以不同时期的拟南芥花药为试材,脱蜡和透明均由正庚烷代替二甲苯完成,其余步骤与常规石蜡切片相同。结果显示,正庚烷透明力强而迅速,既能与乙醇、封藏树胶混合,又能溶解石蜡,可作为合适的透明剂和脱蜡剂;组织经正庚烷处理后物理性质良好,浸蜡充分,切片时软硬适中,容易连续切片,而且厚薄均匀,摊片时能在42℃水中自然展开,平整而无皱褶;经甲苯胺蓝染色,细胞着色好,核质分明,结构清晰,组织形态保持完好,与二甲苯作透明剂的切片效果无明显区别。因此,正庚烷可以作为一种新的、相对安全有效的二甲苯替代物,应用于植物组织切片中。     

石蜡切片法中染色技术的改良

石蜡切片是观察动植物组织最直接有效的方法之一。本实验对水稻品种9311的叶片进行切片并用1%的番红—乙醇染液和1%的苯胺蓝—乙醇染液进行染色,结果显示此改良方法得到的组织比传统石蜡切片更完整,染色的效果比传统石蜡切片更清晰,并且利用此方法对水稻叶片进行制片,可以大量缩短制片后期复水及脱水的时间,提高工作效率。     

小肠腺三色染色法

我们采用三色染色的方法对小肠肠腺细胞进行染色,杯状细胞、潘氏细胞、胞质和肠腺基膜呈现三种不同的颜色。细胞形态清晰,对比鲜艳,收到了理想效果。材料和方法1·材料人小肠为手术切除新鲜标本。10%甲醛固定24-48h,常规脱水,石蜡包埋。2·方法石蜡切片厚4-6μm,切片脱蜡,蒸馏水洗2m in,复合染液染3-5m in,70%乙醇分色,蒸馏水洗1m in,阿利新蓝染5m in,蒸馏水轻洗;0·2%光绿复染胞质、肠腺基膜20s;70%盐酸乙醇分色;梯度乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。3·染液配制(1)复合染液:1%伊红(1g伊红,70%乙醇100m l)40m l,2%偶氮桃红(2g偶氮桃红甲…     

一种冰冻切片漂片法免疫反应后再用石蜡切片的方法

本文采用组织冰冻切片５０μｍ进行双重标记的免疫组织化学漂片染色后,将其贴在塑料包埋盒内,脱水,经石蜡包埋切为１－３μｍ的薄片贴于载玻片上,干燥后脱水透明封片,最后进行切片观察,免疫阳性产物被准确定位于所观察的细胞或纤维上,得到满意的结果。为免疫组织化学形态学研究工作提供了新的手段。     

多线染色体的简易永久制片方法

双翅目昆虫多线染色体的永久制片,一般是制得果蝇或摇蚊多线染色体的临时压片,用酒精或冰冻揭片后,再经一系列梯度酒精脱水和二甲苯透明,最后进行封片。这种方法所带来的缺点是:手续较繁,药     

微波快速石蜡切片法观察谷子幼嫩叶片组织技术的优化

C4植物发育的研究是近年植物学研究的一个热点,对于探明C4高光效机理及培育C4水稻至关重要。而C4幼嫩叶片的细胞形态学观察是研究C4发育的基本手段之一。谷子是研究C4光合发育的模式植物之一,且作为禾本科植物,谷子幼嫩叶片硅质含量高,组织硅质化,固定液透过表皮进入组织困难。同时幼嫩叶片细胞含水量高,如利用常规方法短时间内脱水剂不容易将细胞组织液彻底替换,这就给谷子幼叶发育的组织学观察带来一定的难度。微波是一种高频电磁波,可以使试剂液体与组织细胞间渗透和交换效率显著提高。本试验以谷子幼嫩叶片为材料,对以往的微波快速石蜡切片法进行优化,将微波快速石蜡切片法与梯度酒精脱水法相结合,并使用叔丁醇代替二甲苯作为脱水剂和透明剂,改变脱水时间,摸索出一套制备完整的谷子幼嫩叶片组织切片的快捷、有效的方法。     

植物石蜡制片中透明和脱蜡技术的改良

石蜡切片是植物科学研究领域中一项重要的实验技术,为组织学的发展做出了卓越贡献。制片过程中采用不同试剂和处理程序对切片质量有较大的影响。该文针对常规石蜡切片方法在操作步骤上存在的繁琐及试剂安全性等问题,摸索出改进方法。实验结果表明,采用histolene(C1OH16)、环保透明剂van-clear、正丁醇(n-butanol)和松节油(oil of turpentine)代替二甲苯(xylene),可避免二甲苯的毒性危害;同时精简了传统石蜡切片的操作程序,缩短了实验周期并提高了制片质量。     

植物石蜡制片中透明和脱蜡技术的改良

石蜡切片是植物科学研究领域中一项重要的实验技术, 为组织学的发展做出了卓越贡献。制片过程中采用不同试剂和处理程序对切片质量有较大的影响。该文针对常规石蜡切片方法在操作步骤上存在的繁琐及试剂安全性等问题, 摸索出改进方法。实验结果表明, 采用histolene(C_1O H₁₆)、环保透明剂van-clear、正丁醇(n-butanol)和松节油(oil of turpentine)代替 二甲苯(xylene), 可避免二甲苯的毒性危害; 同时精简了传统石蜡切片的操作程序, 缩短了实验周期并提高了制片质量。     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法染色步骤：ＦＡＡ固定液固定植物材料,乙醇一正丁醇系列脱水,植物材料呈透明体状态被包埋,切片厚度１０微米。用蛋白或明胶粘片剂粘贴蜡带,切片放在４０～４５℃烫板上烘干。不脱蜡直接进行染色,过程如下：（１）...     

用石蜡切片法制作内耳切片

用含盐酸的Ｂｏｕｉｎ氏液固定、脱钙软化，延长高浓度酒精的脱水时间，恰当掌握透明时间，注意耳蜗及半规管的包埋方向等方法制作内耳石蜡切片，获得了该器官主要组织结构较理想的切片。