环化腺苷酸

Sutherland等人在研究肾上腺素及增血糖素与糖代谢的关系中,观察到肾上腺素及增血糖素能促使肝内磷酸化酶的活性增高,因而促进糖元降解为葡萄糖-1-磷酸。他们在进一步研究时发现激素对磷酸化酶的影响并非直接作用,而是要经过一个中间环节。激素的效应仅在完整细胞中表现出来,如果将细胞破碎后,     

大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶的研究 Ⅱ.核酸的結构与磷酸解作用

(1) 利用磷酸单酯酶切除商品酵母RNA末端磷酸,可以提高大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶对其磷酸解速度达5—7倍之多,說明大分子核酸和寡核苷酸一样,3′-磷酸末端是妨碍磷酸解的重要因素。(2) 商品酵母RNA,經过脫氨后,磷酸解速度有所提高;說明RNA二級結构的破坏,有利于磷酸解反应的进行。(3) 磷酸解脫氨RNA时,要求較高濃度的Mg~(++)其最适濃度由5×10~(-3)M提高到8×10~(-2)M。(4) 3′-单核甘酸对RNA的磷酸解无影响。     

酶法制备1-磷酸葡萄糖合成条件的响应曲面法优化

以葡萄糖为原料,三聚磷酸钠为磷酰化试剂,马铃薯磷酸化酶为催化剂,制备1-磷酸葡萄糖.利用Box-Behnken实验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,以产物含量为响应值考察温度、物料比(葡萄糖/三聚磷酸钠)、时间3个因素影响.采用氢核磁共振波谱仪对产品进行了分析.结果表明,马铃薯磷酸化酶制备葡萄糖磷酸酯的最佳工艺条件为:温度35℃,葡萄糖与三聚磷酸钠物料比为1.35∶1(mol/mol),时间19h.     

蔗糖磷酸化酶的研究进展

蔗糖磷酸化酶属于糖苷水解酶13家族,能够催化蔗糖的可逆磷酸解。利用其广泛的底物混杂性,蔗糖磷酸化酶可以将葡萄糖基转移至不同的受体合成熊果苷、甘油葡萄糖苷、低聚糖及多酚化合物的衍生物等产物,这些催化产物可广泛应用于食品、药品、化妆品等行业。随着酶催化技术和蛋白质工程的发展,蔗糖磷酸化酶受到了越来越多的关注,该酶的应用范围也得到了扩大。本文综述了近年来蔗糖磷酸化酶在酶的来源、结构、功能及应用领域等的研究进展,同时讨论了该酶的蛋白质工程改造方法与局限性,并展望了该酶可能的研究方向。     

腾冲嗜热杆菌热稳定海藻糖磷酸化酶的基因表达与酶的分子生物学性质研究

分离克隆了腾冲嗜热杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)海藻糖磷酸化酶(TreP)的编码基因(treP), 该酶可催化以葡萄糖和α-1-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成反应及其逆向的分解反应. 反向mRNA点杂交实验表明, 腾冲嗜热杆菌中treP基因在高盐胁迫条件下表达量增加, 而在海藻糖诱导条件下表达量降低. 将该基因导入不含TreP的大肠杆菌中进行诱导表达, SDS-PAGE表明, 异源表达的TreP分子量约为90 kD, 与预期值相同. 通过葡萄糖氧化酶法测定分解产物葡萄糖的产率表明: TreP催化海藻糖分解反应的最适温度是70℃, 最适pH值为7.0; 通过HPLC检测合成产物海藻糖的产率表明: TreP催化合成反应的最适温度为70℃, 最适pH值为6.0. 在最适反应条件下, 50 μg的TreP粗酶可催化25 mmol/L α-1-磷酸葡萄糖与葡萄糖在30 min合成11.6 mmol/L海藻糖; 而同量的酶在同样时间内仅能将250 mmol/L海藻糖分解生成1.5 mmol/L葡萄糖. 以上体内胁迫和诱导表达分析及体外酶学性质分析均证明该酶的主要功能是催化海藻糖的合成反应. 热稳定性实验表明, 该酶性质比较稳定, 在50℃下温育7 h还能保持77%以上的活性, 是一个有潜在工业用途的新的热稳定海藻糖合成酶.     

Tw近交系小鼠的遗传鉴定和罕见基因分析

目的通过等位基因酶的生化多态性可以发现小鼠DNA的序列多态性,为人类疾病基因鉴定和动物实验的研究提供丰富的动物基因库,为科研工作提供宝贵资源。方法应用国产生化标记检测试剂盒,采用遗传生化检测方法,对天津市卫生防病中心自主培育的近交系小鼠进行Akp-1(碱性磷酸酶-1)等二十五个生化位点标记基因检测。结果经检测发现TW(Tianjin wild)小鼠在Amy1(淀粉酶-1),Es2(酯酶-2),Es3(酯酶-3),Es10(酯酶-10),Gpd1(葡萄糖磷酸脱氢酶-1),Hbb(血红蛋白β链),Np1(核苷酸磷酸化酶-1),Pgm2(磷酸葡萄糖变位酶-2)共八个生化位点发现罕见基因。结论检测国内新品系的遗传生化基因位点,发现罕见基因型。     

不同生长期内马铃薯块茎中酶作用下的淀粉转变之研究

在这篇论文中,引用了在不同生长期内马铃薯块茎提取液水解作用与磷酸化作用以及合成酶与磷酸葡萄糖变位酶活性的研究材料。用马铃薯块茎製备提取液,在两个时期来研究该提取液:第一次是在七月,即马铃薯开花的时候,那时马铃薯具有小的块茎;第二次是在收穫之後,与测定磷酸化酶和磷酸葡萄糖变位酶的活性的同时,测定块茎中澱粉含量,而且在提取液中测定还原性物质的含量。试验是用三个马铃薯品种进行的,即“劳尔赫”、“普列斯库里斯基”和“十月儿童”。对块茎提取液磷酸解作用的研究表明:块茎提     

葡萄糖-1-磷酸对灵芝多糖合成的影响

在以葡萄糖为唯一碳源进行灵芝液态发酵时,通过添加不同浓度的代谢中间产物葡萄糖-1-磷酸,研究其对灵芝胞外多糖产量、单糖组成、合成途径相关酶的影响,从而确定影响灵芝多糖单糖组成的关键酶。结果显示,添加葡萄糖-1-磷酸对灵芝多糖产量和多糖的单糖组成并无明显影响。在检测的3种灵芝多糖合成关键酶中,葡萄糖-1-磷酸的添加抑制磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、磷酸葡萄糖异构酶(PGI)的酶活,对磷酸甘露糖异构酶(PMI)无明显影响。此外,通过相关性分析后发现,发酵过程中半乳糖和甘露糖比例的变化分别与PGM和PGI、PMI具有相关性。本文结果对实现灵芝多糖代谢的灵活调控提供有益的参考。     

乙酰短杆菌中核苷磷酸化酶的性质研究

目的：以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法：将乙酰短杆菌湿茵体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核苷磷酸化酶的活力及酶促反应的袁观米氏常数。结果：乙酰短杆菌中的核苷磷酸化酶经低温保藏可以保持较长时间的稳定性;茵体在60℃处理1小时即失去核苷磷酸化酶的活力,但是添加胸腺嘧啶有明显的保护作用;茵体中核苷磷酸化酶的合成能力明显大于磷酸解能力;对尿苷和5-甲基尿苷的表观米氏常数和最大反应速率分别为16．7、11．4mm01／L,0．0063、0．0041mmol／L．min。结论：含核苷磷酸化酶的乙酰短杆菌完整细胞作为酶源,在低温下可以长时间保藏,反应中的碱基对核苷磷酸化酶的抗热性有益,该菌种可以作为工业上核苷磷酸化酶的来源。     

每期10题

1.下面叙述的哪一种生理作用和氨基的分解过程有关( )。 A.尿素的合成 B.肝糖元的分解 C.乳酸发酵中糖的分解 D.DNA的复制 2.肾衰竭的病人要进行肾脏移植,若想成功,首先要克服的困难是( )。     

大豆叶片淀粉的降解及淀粉降解酶

在90μmol m~(-2)s~(-1)光强以下可见大豆叶片淀粉的降解,降解速率为0.8～3.8mg淀粉dm~(-2)h~(-1)。淀粉降解通过水解及磷酸解两条途径,α,β—淀粉酶的最适pH5～6,磷酸化酶pH7～8。α—淀粉酶活力随叶片的成长显著增强,β—淀粉酶则有所减弱。叶片淀粉积累或消耗时此三酶活力无显著变化。 黄化小麦叶片照光转绿过程中此三酶活力变化不大。黄化玉米叶片照光转绿过程中磷酸化酶活力降低,β—淀粉酶活力增强。     

逆境胁迫下甘油醛-3-磷酸脱氢酶功能多元化的研究进展

糖酵解是动植物以及微生物细胞中葡萄糖分解产生能量的共同代谢途径,而甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为糖酵解途径中的一种关键酶,被认为是只存在于细胞质中的管家基因产物。但近年来的研究表明GAPDH mRNA和蛋白质水平会随着各种环境因素的影响而发生变化,并具有不同的亚细胞定位以及多元化的生理功能。本文综述逆境胁迫下GAPDH在不同生物体细胞中的不同功能的相关作用机制。     

肝脏和胰岛素在糖代谢中的作用

《生理卫生》课本中提到“肝脏有贮藏养分的作用,例如能够把血中多余的葡萄糖贮藏起来。当血糖浓度减少时又可将糖元分解为葡萄糖,供人体能量需要”。“胰岛素能使血糖合成糖元,加速血糖分解”。由于这些话,有的教     

β-淀粉酶对磷酸化酶的“抑制作用”

磷酸化酶和β-淀粉酶是在淀粉合成和分解过程中起主要作用的酶,在植物体中往往同时存在,因此研究这两个酶相互之间的关系是很有意义的。Porter 曾报告不同来源的β-淀粉酶在溶液中对磷酸化酶有抑制作用,她认为此抑制作用的机制主要是β-淀粉酶直接影响磷酸化酶的活动中心。但是我们都知道,β-淀粉酶是分解淀粉的,而磷酸化酶的形成淀粉的作用需要先有淀粉作为引子(primer),当引子量低于一定浓     

发酵乳杆菌来源4,6-α-葡萄糖基转移酶的酶学表征及产物性质鉴定

4,6-α-葡萄糖基转移酶 (4,6-a-GTs) 能以直链淀粉为底物合成含a(1-6) 键的a-葡聚糖,在酶法合成膳食纤维中具有很大的应用潜力。根据4,6-a-GTs氨基酸序列中的保守区段设计引物,从发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum基因组中PCR扩增得到一条假定GTFB-like 4,6-a-GTs基因 (命名为gtf16),构建重组质粒pET15b-gtf16并在宿主大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3) 成功表达,纯化后对其进行酶学表征。结果表明,该酶最适pH为5.0,最适温度为40 ℃。通过薄层色谱、NMR光谱、水解酶水解等检测手段对Gtf16酶转化产物进行系统的表征,发现其产物具有以下特征：与已报道的来源于罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri 121菌株的4,6-α-葡萄糖基转移酶-GtfB与直链淀粉作用后的产物异麦芽寡糖结构类似;产物键型中a(1-6) 键占比可达75%,产物平均分子量为23 793 Da;产物被消化酶水解后得到的抗消化成分含量可达88.22%。     

生物化学家莱洛伊尔L.F.

著名生化学家莱洛伊尔L.F.(Leloir Luis F.)生于1906年,死于1987年12月4日。他的初期贡献之一且立即引人注目的,是发现了葡萄糖-1,6-二磷酸及葡萄糖-1,6-二磷酸作为磷酸葡萄糖变位酶辅助因子的作用。效仿于此,科里、萨瑟兰和帕斯特纳克一起,提出作为磷酸甘油酸变位酶的2,3双二磷酸甘油酸的类似作用的提议。在莱洛伊尔的重大发     

友菌素核苷转移酶amiE基因的克隆、表达和功能鉴定

【目的】克隆和表达二糖核苷类抗生素友菌素生物合成基因簇中的核苷转移酶基因amiE,并研究AmiE的体外催化功能。【方法】采用PCR技术将编码257个氨基酸的葡萄糖-1-磷酸核苷转移酶基因amiE克隆到表达载体pET28a上,构建质粒pCSG4001,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达;利用亲和层析分离纯化蛋白AmiE,以葡萄糖-1-磷酸和胸腺嘧啶三磷酸(TTP)或尿嘧啶三磷酸(UTP)为底物,利用高效液相检测AmiE的体外酶活;以甘露糖-1-磷酸、半乳糖胺-1-磷酸和半乳糖-1-磷酸和TTP作为底物,进一步研究AmiE对底物的选择性。【结果】N-末端融合组氨酸标签的AmiE蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,通过亲和层析纯化出的AmiE能够以TTP(或UTP)和葡萄糖-1-磷酸作为底物,催化形成胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖(TDP-glucose)或者尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-glucose),但对其他三种底物,无明显催化活性。【结论】大肠杆菌中表达纯化的核苷转移酶AmiE能够体外催化形成TDP-葡萄糖(或UDP-葡萄糖),确证了AmiE作为核苷转移酶的催化功能,同时表明AmiE对底物具有一定的选择性。     

糖尿病人为什么常伴有多尿、多饮、多食而体重减少的现象?

答:人体内缺乏胰岛素时,会引起体内糖代谢障碍。不仅使进入组织细胞的葡萄糖大为减少,而且会抑制血糖合成糖元,促进肝糖元分解和糖的异生(由蛋白质、脂肪等非糖类物质转变成糖类物质),使血糖浓度显著升高。当血糖浓度超过150—180毫克/100毫升时,多余的糖就从尿中排出,或为糖尿病。由于糖具有一定的渗透压,在排泄过程中必然要带出大量水分,引起渗透性利尿,从而出现多尿现象。渗透性利尿导致体内丢失大量水分,引起烦渴感觉,因而病人常需饮大量的水。人体内缺乏胰岛素,使葡萄糖的合成和分解过程受到抑制,妨碍了组织细胞对葡萄糖的     

磷酸戊糖代谢途径的新修正

磷酸戊糖途径,是糖有氧氧化的重要支路。它提供生物合成所需要的NADPH,为核酸代谢提供戊糖,并通过酵解的中间产物为生物提供能量。磷酸戊糖途径可划分为先后两个阶段,氧化为第一阶段,从葡萄糖开始通过脱氢和脱羧作用生成磷酸戊糖;非氧化为第二阶段,磷酸戊糖经过酶的转换和缩合作用(分子重排)又形成六碳糖和三碳糖(图1、图2)。     

丹皮多糖-2b对肾上腺素模型小鼠降血糖作用研究

目的　观察丹皮多糖-2b(PSM-2b)对肾上腺素模型小鼠血糖的影响。方法　采用300μg·kg-1肾上腺素腹腔注射复制小鼠高血糖模型。将小鼠随机分为三大组,各大组分别连续灌胃1周、2周或3周。每大组又分为六小组:对照组、模型组、阳性(降糖灵)组、PSM-2b大剂量(90mg·kg-1)组、中剂量(60mg·kg-1)组、小剂量(30mg·kg-1)组。按葡萄糖氧化酶法测血糖,按苯酚-硫酸法测肝糖元含量。结果　PSM-2b能够显著降低肾上腺素模型小鼠的高血糖,且其降血糖作用呈一定的量效关系。PSM-2b还能够促进血糖转化为糖元,显著提高模型小鼠肝糖元的含量。结论　PSM-2b可以通过抑制肾上腺素升血糖作用而降低血糖。