人胚肝去组蛋白染色质抗原、甲胎蛋白及白蛋白在人肝癌和癌周组织中的定位关系

人胚肝去组蛋白染色质抗原(DHCAg)具有癌胚特异性,本文用免疫酶标法在肝癌连续切片上比较了DHCAg、甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)彼此间的定位分布,得到的初步结果如下: 1.在肝癌标本中DHCAg和AFP无论在肝癌细胞、癌周细胞或幸存肝细胞中的分布有某种关系。提示DHCAg和AFP基因表达之间可能存在着某种联系。2.在DHCAg阳性的幸存肝细胞和癌周细胞中AFP和ALB通常同时表达,表明这二种细胞很可能是癌前期细胞。3.在DHCAg阳性的肝癌细胞中AFP阳性情况下ALB的合成明显下降,这就提示DHCAg和癌变后的某些特征相关。     

人胚肝去组蛋白染色质抗原、甲胎蛋白及白蛋白在人肝癌和癌周组织中的定位关系

人胚肝去组蛋白染色质抗原(DHCAg)具有癌胚特异性,本文用免疫酶标法在肝癌连续切片上比较了DHCAg、甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)彼此间的定位分布,得到的初步结果如下:1.在肝癌标本中DHCAg 和AFP 无论在肝癌细胞、癌周细胞或幸存肝细胞中的分布有某种关系。提示DHCAg 和AFP 基因表达之间可能存在着某种联系。2.在DHCAg 阳性的幸存肝细胞和癌周细胞中AFP 和ALB 通常同时表达,表明这二种细胞很可能是癌前期细胞。3.在DHCAg 阳性的肝癌细胞中AFP 阳性情况下ALB 的合成明显下降,这就提示DHCAg 和癌变后的某些特征相关。     

细胞间相互作用影响iPSc来源肝细胞的成熟

获得功能性的肝细胞可用于研究肝细胞再生机理,并可为细胞移植和药物筛选提供生物材料。该研究采用四步法诱导多能干细胞分化成肝细胞,比较传代和不传代分化细胞的形态和肝细胞特异标志的差异表达。结果发现,利用诱导多能干细胞分化可获得白蛋白(albumin,ALB)阳性的成熟肝细胞,不传代法获得的细胞更接近于肝细胞形态,两组均获得甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)和ALB阳性表达的细胞;GATA6(GATA binding protein 6)和HNF4A(hepatocyte nuclear factor 4 alpha)表达水平没有显著性差异,但不传代法分化细胞的AFP和ALB表达量高于传代法,存在显著性差异。结果提示,细胞因子与细胞间、多细胞间相互作用等因素影响多能干细胞的分化,细胞间相互作用有利于肝细胞定向诱导分化过程中肝细胞的成熟。     

茵陈四苓颗粒对肝衰竭环境下骨髓间充质干细胞分化及IDO蛋白表达的影响

目的:研究肝衰竭体外模型环境下茵陈四苓颗粒对骨髓间充质干细胞的肝向分化及IDO蛋白表达的影响。方法:通过建立肝衰竭血清、中药干预血清、健康血清分别与骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养体系,检测BMSCs中CK18免疫荧光表达,Western-blot法检测甲胎蛋白(AFP)、肝组织白蛋白(ALB)、吲哚胺2,3—双加氧酶(IDO)蛋白表达。结果:1、CK18免疫荧光结果显示肝衰竭组及中药干预组染色均为弱阳性,但后者染色更强,而健康组无阳性染色;2、AFP、ALB在健康组、肝衰竭组、中药干预组均有表达,且各组间ALB比较均有差异(P0.05),三组AFP表达水平逐渐增高,各组间差异有统计学意义。IDO蛋白在健康组无表达,肝衰竭组表达低于中药干预组,且两组间差异具有统计学意义。结论:茵陈四苓颗粒能增强BMSCs在肝衰竭环境下的肝向分化趋势及免疫调节活性。     

全反式维甲酸促进骨形态发生蛋白9诱导肝祖细胞成熟分化的作用研究

该文研究了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)促进骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导肝祖细胞14-19(hepatic progenitor cell 14-19,HP14-19)成熟分化的作用。重组腺病毒Ad-BMP9和ATRA单独及联合作用诱导肝祖细胞HP14-19成熟分化,荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc表达情况,Real-time PCR检测肝脏相关基因DLK、AFP、ALB和TAT的mRNA水平,Western blot及免疫荧光检测AFP、ALB、CK18和UGT1A蛋白质水平,PAS染色和ICG摄取实验检测成熟分化后的功能。Ad-BMP9组和ATRA组的ALB-Gluc活性较对照组增高,而AdBMP9+ATRA组ALB-Gluc活性又显著高于Ad-BMP9组和ATRA组。Ad-BMP9+ATRA组的ALB和TAT mRNA水平以及ALB、CK18和UGT1A蛋白质水平均高于Ad-BMP9组和ATRA组,但肝干细胞标志DLK、AFP的表达均降低(P0.05)。Ad-BMP9+ATRA组的ICG摄取及PAS染色阳性细胞数显著高于Ad-BMP9组和ATRA组。ATRA和Ad-BMP9均诱导肝祖细胞HP14-19成熟分化,联合作用强于单独作用。     

模拟微重力条件下对WB-F344肝干细胞表征分子表达的影响

研究大鼠WB-F344肝干细胞在旋转式细胞培养系统（RCCS）中培养进行细胞大规模扩增并保持干细胞的特性的可能性,为干细胞治疗疾病及肝组织工程提供理想的细胞来源。以WB-F344肝干细胞在RCCS中培养,以平面单层培养为对照,在培养后不同时间分别进行形态观察、流式细胞仪测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝干细胞特异性基因甲胎蛋白（AFP）和白蛋白（ALB）的表达, 免疫荧光染色检测 AFP、ALB蛋白的表达。结果表明,RCCS培养的WB-F344细胞粘附在Cytodex-3微载体上状态生长良好,细胞增殖较平面培养有明显增加;RT-PCR和免疫荧光染色检测结果一致：模拟微重力培养组AFP的mRNA表达强度及AFP阳性细胞均显著高于平面培养组,而ALB mRNA表达强度和ALB阳性细胞均低于对照组。说明模拟微重力 培养条件下,能较好的维持肝干细胞特性,进一步证明我们建立的这种培养体系是成功的,是一种理想的肝干细胞培养模式。     

小鼠甲胎蛋白基因的扩增及其mRNA相对含量的测定

甲胎蛋白(AFP)是一个癌胚性蛋白,已被广泛用于肝癌早期诊断。近几年的研究发现,血清中AFP水平的升高,主要是由于肝细胞中AFP的信使核糖核酸(mRNA_(AFP))的量增加,即是由于AFP基因转录水平升高,而不是mRNA_(AFP)翻译活性升高所致。在肝癌发病机理和肝癌治疗研究中,人们逐渐将注意力集中在AFP基因调控的研究上,试图从整体或离体试验中,找出影响AFP基因表达的有关因子或药物,并已取得了一定进展。在转录水平上研究AFP基因调控,首先要解决mRNA_(AFP)的定量测定技术,应用互补于mRNA_(AFP)的单链DNA(cDNA)作探针,通过液相杂交进行测定是目前应用最普遍,也是最准确的方法。     

AFP阴性与阳性肝细胞癌免疫组化和免疫电镜的比较性研究

目的比较性研究AFP阴性与阳性原发性肝细胞癌超微结构特征及AFP和Tn (Thomsen-Friedenreich-related antigen)蛋白表达及意义.方法 43例原发性肝细胞癌组织和5例正常肝组织分为三组:对照组(正常肝组织,5例);AFP阳性肝细胞癌组 (血清AFP>10ng/ml,22例);AFP阴性肝细胞癌组(血清AFP<10ng/ml,21例).应用透射电镜、免疫组织化学和细胞图象分析技术对AFP阴性与阳性肝癌细胞超微结构及AFP和Tn蛋白表达进行观察,并进行AFP和Tn蛋白免疫电镜标记.结果 1. 免疫组织化学结果显示:在AFP阴性肝细胞癌组癌细胞中(1)Tn蛋白表达强度(0.1498±0.0371)明显高于AFP阳性肝细胞癌组(0.0685±0.0156)(P<0.01);(2)AFP蛋白表达强度(0.1269±0.0347) 低于AFP阳性肝细胞癌组(0.1852±0.0234)(P<0.01).2.透射电镜观察:在AFP阴性组肝癌细胞中,癌细胞最突出的形态特征是胞质内细胞器大多十分简单,唯游离多聚核糖核蛋白体十分丰富.而在AFP阳性组肝癌细胞中,癌细胞胞质内细胞器相对较多,特别是粗面内质网尤为丰富.此外,线粒体及高尔基器也较明显.3.免疫电镜标记显示:AFP蛋白阳性标记主要位于粗面内质网,Tn蛋白阳性标记多位于游离多聚核糖核蛋白体,粗面内质网仅见有散在阳性分布.结论 (1)AFP和Tn蛋白在AFP阴性与阳性肝细胞癌组织中具有差异性分布特征,Tn蛋白有望成为AFP阴性肝细胞癌诊断辅助指标之一.(2)透射电镜和免疫电镜观察表明:AFP和Tn蛋白在肝癌细胞中的合成部位明显不同.     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

牛血清蛋白对胰蛋白酶消化叶绿体膜的修补作用

1.牛血清蛋白对被胰蛋白酶消化过的叶绿体光还原 DCIP 的活性有恢复作用。洗涤对经牛血清蛋白修补的胰蛋白酶消化叶绿体的 DCIP 光还原没有影响。说明胰蛋白酶消化后,DCIP 还原位置的蛋白质受损,牛血清蛋白有修补作用。2.CCCP 对胰蛋白酶诱导产生的抑制特性变化可以被牛血清蛋白所逆转。3.牛血清蛋白对胰蛋白酶诱导的叶绿体基粒片层松散现象有部分恢复作用。4.牛血清蛋白对胰蛋白酶诱导的叶绿体光谱在500—640毫微米处吸收下降没有恢复作用。本文提出两个假设:(1)叶绿体膜上的蛋白质存在有微区域性的差异;(2)在类囊体膜上存在有由蛋白质构成的“门”和“通道”的组织。     

通过鱼抗冻蛋白培育抗霜冻植物

加拿大植物生物技术研究所(PBI)科学家A.J.Cutler等人正在研究把操纵比目鱼抗冻蛋白(AFP)合成的基因转移到植物中,以保护植物免遭早春和晚秋霜冻的可能性。AFP及其相关蛋白是比目鱼在冬天产生的。它在鱼的血液中通过与冰晶结合或抑制冰晶生长而起着抗霜冻的作用。PBI研究小组判定,AFP能在植物中起作用。他们将canola和其它植物不同部位的叶浸渍于AFP溶液中,利用真空过滤诱导化合物渗透到叶组织中。结果     

复方861对大鼠肝脏卵圆细胞分化的影响

目的探讨复方861对大鼠肝脏卵圆细胞分化的影响,了解其在肝纤维化治疗过程中促进肝细胞再生的可能机制。方法不同浓度(1.95,3.90,7.81,15.62,31.25,62.50,125,250,500,1000μg/mL)的复方861在无血清培养条件下作用于WB-F344细胞24 h,MTT法分析法检测细胞生长情况。500μg/mL复方861在无血清条件下作用WB-F344细胞72 h后,通过RT-PCR观察CK-19、AFP、ALB、αmRNA表达的变化。以同期未作处理的WB-F344作为空白对照组。结果 WB-F344细胞经过不同复方861作用后,除1000μg/mL外,各组细胞生长均未受到抑制,500μg/mL时细胞生存活性最佳。无血清条件下作用72 h后,半定量RT-PCR发现861组AFP mRNA的表达显著增加,CK-19 mRNA的表达显著减少,同时发现861组有ALB mRNA的表达。结论复方861可能诱导WB-F344细胞主要向肝细胞方向分化。     

乙型肝炎患者血清蛋白电泳谱变化规律的研究

研究乙型肝炎病毒患者血清蛋白的变化特点,探讨其与疾病进程的关系。从临床收集正常体检者血清和乙型肝炎病毒不同感染阶段的患者血清,按疾病类型进行分组。选用血清蛋白电泳技术检测白蛋白(ALB)、α1球蛋白、α2球蛋白,γ球蛋白百分含量及A/G。与正常对照组相比,重度慢性肝炎组、肝炎肝硬化组和原发性肝癌组中ALB、α1球蛋白、α2球蛋白明显降低,而γ球蛋白明显升高;重度慢性肝炎、肝炎肝硬化、原发性肝癌三组中A/G比值依次明显降低。急性乙型肝炎组和轻度慢性肝炎组的蛋白电泳各项指标均无明显变化。前白蛋白含量在急性乙型肝炎、轻度慢性肝炎、重度慢性肝炎、肝炎肝硬化和原发性肝癌组均明显降低。结果提示,蛋白电泳图谱随着乙型肝炎病毒感染的不同阶段会发生相应变化。A/G能够反应乙型肝炎病毒感染的中晚期进展,对乙型肝炎的诊断,治疗以及病情转归具有重要意义。     

ATBF1异构体的选择性表达及其抑癌作用的分子机制

ATBF1(AT motif binding factor 1)基因是一个新发现的抑癌基因,其表达产物是目前发现的分子量最大的转录调节因子,它能和甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）基因增强子AT富聚区结合,调节AFP的转录.ATBF1基因表达过程中,由于转录本mRNA的选择性剪接,可产生ATBF1-A和ATBF1-B两种异构体,这两种异构体对AFP表达的调节具有相互对抗作用.ATBF1-A是ATBF1基因的主要表达形式,其能抑制癌细胞生长,而ATBF1-B则能促进癌细胞增殖.本文分析ATBF1异构体如何调控AFP表达及其作用的多样性,阐述ATBF1表达下调对肿瘤细胞生长和侵袭产生的影响;探讨ATBF1异构体抑癌作用的可能机制和选择性应用ATBF1异构体治疗肿瘤的科学意义.     

小鼠ALB启动子/增强子驱动HSV-tk 对肝脏细胞的杀伤效应

利用小鼠白蛋白(ALB)启动子／增强子及单纯疱疹病毒胸苷嘧啶激酶(HSV-tk)DNA构建了载体pLLTK,以研究该载体对肝脏细胞的特异性杀伤效应。首先,为了比较载体的肝脏细胞特异转录活性,以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因构建了载体pLE(仅含小鼠ALB启动子)、pLLE(含小鼠ALB启动子和上游增强子)和pLEL(含小鼠ALB启动子和下游增强子),分别转染到人肝细胞株Hep—G2与小鼠乳腺上皮细胞株HC-11,荧光显微镜与流式细胞术分析GFP的表达。然后将载体pLLTK转染到Hep-G2研究对细胞的杀伤效应。结果发现：小鼠ALB启动子／增强子能驱动GFP肝脏特异表达;HSV-tk在Hep-G2表达使细胞具有更昔洛韦(GCV)敏感性,在GCV作用7d后,MTT分析细胞的生存率,pLLTK转染细胞表现明显的细胞死亡(53％),而阴性对照组pcDNA3．1转染细胞没有明显变化(仅2％细胞死亡)。以上结果表明所有的载体具有肝脏细胞特异性,为利用该载体产生肝脏损伤的转基因小鼠提供了细胞水平的实验依据。     

大西洋鲑鱼Ⅳ型抗冻蛋白的表达与纯化

[目的]构建Ⅳ型抗冻蛋白(AFPⅣ)大肠杆菌表达系统,纯化诱导表达的可溶性AFPⅣ,并进行质谱鉴定。[方法]构建pET22b-His6-AFPⅣ重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并优化IPTG诱导条件,通过亲和层析进行分离纯化,收集样品并冻干保存,对Ⅳ型抗冻蛋白样品进行质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定。[结果]构建了pET22b-His6-AFPⅣ重组质粒,IPTG诱导表达产生可溶性AFPⅣ,且最佳诱导浓度为0.2 mmol/L,诱导时间4h,纯化后AFPⅣ浓度为136μg/ml。[结论]成功构建了AFPⅣ原核表达系统,优化了IPTG诱导条件,重组AFPⅣ得到纯化,并获得冻干样品5 mg,经质谱鉴定确认为AFPⅣ。     

早期肠内与肠外强化营养支持在特大面积危重烧伤救治中的效果

目的 探讨早期肠内、肠外强化营养支持在特大面积危重烧伤救治中的疗效.方法 对2017年10月～2020年3月我院烧伤科收治的50例特大面积危重烧伤患者按随机数字表法分为对照组和观察组,每组25例.对照组实施肠外营养支持,观察组联合早期肠内强化营养支持.观察比较两组治疗前后的体重、营养生化指标[血清蛋白(ALB)、血红蛋...     

胚胎肝细胞用于肝组织工程的体外培养研究

目的:观察三维受控组装系统下,胚胎肝细胞在三维立体结构的体外生长状态,探讨胚胎肝细胞在肝组织工程中应用的可行性。方法:用清华大学机械工程系研制的"三维受控组装系统",将第15 d小鼠胚胎肝细胞作为肝组织工程的种子细胞,与以明胶为主的复合材料混合,构建成复杂三维立体结构,观察其体外生长发育状态。对体外培养1周及4周的三维类肝组织标本进行苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学方法检测甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(ALB)的表达,并对体外培养4周的三维类肝组织用PAS显色法检测肝糖原表达。结果:HE染色结果显示体外培养的胚胎肝细胞在三维支架材料中,可形成含有类血管和肝组织样结构;体外培养1周的类肝组织AFP表达呈阳性,体外培养4周的三维类肝组织ALB表达呈阳性,PAS显色亦呈阳性。结论:在三维受控组装系统的构建下,呈立体状生长的胚胎肝细胞,可逐渐形成肝组织样结构,并显示一定的肝脏功能。     

DAB致大鼠肝癌过程中免疫组化及免疫电镜研究

本文采用二甲氨基偶氮苯(DAB)诱发的大鼠肝癌模型,运用组织病理学、血清学、免疫组化及免疫电镜技术相结合的方法,对诱癌过程中各个不同时期肝脏的组织病理学变化及肝癌阳性标志物AFP的表达进行了动态观察。结果显示:早在血清AFP浓度上升和由卵圆细胞转变而来的小肝细胞表达AFP之前,肝小叶中就出现了散在的AFP阳性肝细胞,我们认为这种AFP阳性肝细胞可作为肝细胞癌前病变的早期征象之一。在AFP阳性的肝细胞内,AFP主要定位于核周间隙、粗面内质网和高尔基复合体。     

五种啮齿类动物核型和血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

本文对5种啮齿类动物(岩松鼠、花鼠、五趾跳鼠、棕背(鼠平)和岢岚绒鼠)的核型及其血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了分析。通过分析结果,探讨了它们的核型及血清蛋白在其分类中的意义。