慢性乙型肝炎病毒感染者HBeAg血清学自然转换及其影响因素分析

目的了解慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者乙型肝炎e抗原(hepatitis Be antigen,HBe Ag)血清学自然转换及其影响因素。方法以寿光市2012年3个强化干预镇街道农村居民乙型病毒性肝炎(简称乙肝)专项调查确诊的HBe Ag阳性感染者的血清学检测结果为基线,与2015年随访的血清学检测结果对比分析。用ELISA检测乙肝血清标志物,用实时荧光定量PCR检测HBV DNA载量,采用速率法检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)。结果 HBe Ag阳性者340例,随访3年,HBe Ag转阴142例,年转阴率13.92%;抗-HBe转换92例,年转换率9.02%。HBe Ag转阴/转换率与HBV DNA载量负相关(r=-0.227,P0.001;r=-0.193,P0.001);HBe Ag转阴/转换率与年龄有关,6~20岁组转阴/转换率低,随年龄增长HBe Ag转阴/转换率增高,各年龄组差异均有统计学意义(χ2=22.74,P0.01;χ2=30.34,P0.01);性别不是HBe Ag转换率的主要影响因素(P0.05)。血清学转换后,HBV DNA载量、ALT水平均较转换前有明显的下降,但仍有一定比例的感染者检出高拷贝的HBV DNA载量。结论 HBV感染过程中存在着HBe Ag血清学自然转换,年龄是HBV DNA载量的主要影响因素,HBe Ag与HBV DNA载量的变化并不完全一致。     

HBV感染者外周血TLR4mRNA表达与疾病进展关系研究

构建pUCm-TLR4质粒作为定量模板,采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测 140 例HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4mRNA的含量,并结合HBV感染者临床情况进行分析.HBV感染者PBMC中TLR4mRNA的表达范围是1.1×105～10.5×107 copy/μg RNA,显著高于健康对照组(4.5×105～1.25×106 copy/μg RNA),其中慢性乙肝组TLR4mRNA的表达明显高于慢性重型乙肝组(P＜0.05);HBV病毒载量的对数值与TLR4mRNA的含量存在负相关(r=-0.316,P＜0.01).结果表明,HBV感染者PBMC中TLR4mRNA的表达与疾病进展明显相关.     

乙肝免疫标志物与乙肝病毒核酸含量与肝功能的关系研究

目的:研究乙肝免疫标记物(HBV-M)与乙肝病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)载量与肝功能的关系。方法:检测104例乙肝患者HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab、HBs Ab、HBe Ab5种HBV-M;用PCR法检测HBV-DNA含量;同时检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、胆碱酯酶(CHE)等肝功能指标,对三者关系采用Spearman相关性分析。结果:HBs Ag、HBc Ab、HBe Ag阳性组HBV-DNA阳性率及载量均大于其余组(P0.05);HBe Ag含量、ALT浓度与HBV-DNA载量均呈正相关(r=0.48,P0.05)、(r=0.36,P0.05);AST、CHE与HBV-DNA含量无明显相关性,但在无病毒载量与有病毒载量组之间AST比较有统计学意义(P0.05)。结论:HBV-M、HBV-DNA与肝功能之间有一定的相关性,但HBe Ag阴转不代表病毒复制停止,HBV-DNA也不能完全反应肝损害程度,临床应加大重视。     

前S1抗原检测在献血人群的HBV感染筛查中的应用

目的:通过比较献血人群中谷丙转氨酶、乙肝表面抗原和前S1抗原检测与HBV-DNA检测结果的一致性,探讨前S1抗原检测在献血人群中筛查乙肝病毒感染者的应用价值。方法:1080份献血样本中,采用ELISA法检测前S1抗原,PCR法检测HBV-DNA,分析前S1抗原检测与HBV-DNA检测的一致性。结果:(1)1000例合格的献血人群中,前S1抗原的阳性率为0.3%,HBV-DNA阳性率为0.1%,两者呈中度一致性(Kappa值=0.499),且有统计学意义(P0.05)。(2)1080例样本中,ALT、HBs Ag、前S1抗原的阳性率分别为5.83%、1.76%、1.67%,HBV-DNA阳性率为0.93%,ALT检测法与HBV-DNA检测无一致性(Kappa值=-0.0162);HBs Ag检测与HBV-DNA检测呈高度一致性(Kappa值=0.6160),前S1抗原检测与HBV-DNA检测呈高度一致性(Kappa值=0.7108),二者均有统计学意义(P0.05)。(3)ALT和HBs Ag两项联合检测及ALT、HBs Ag和前S1抗原三项联合检测的阳性率分别为7.41%、7.69%,HBV-DNA阳性率为0.93%。两项联合检测法与HBV-DNA检验结果一致(Kappa值=0.1866),三项联合检测法与HBV-DNA检验结果一致(Kappa值=0.2019),均有统计学意义(P0.05)。结论:前S1抗原检测与HBV-DNA检测有较高一致性,能够减少献血人群中HBV感染的漏检;将ALT、HBs Ag和前S1抗原进行联合检测能够提高HBV感染筛查率。     

基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA临床应用评价

目的评价基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用。方法选用磁珠法定量检测试剂和煮沸法定量检测试剂,对一系列临床患者血清标本进行检测,比较两种试剂检出率的差异;通过浓度为1×108的样本的梯度稀释结果考察两者的灵敏度和线性范围。结果 68例临床样本中,磁珠法试剂检测的阳性率为69.12%,煮沸法试剂检测的阳性率为32.35%(P0.05);两种试剂对103IU/m L阳性样本检测结果:y=0.913x-0.261,r=0.919;磁珠法线性范围3.9×(101~108),灵敏度39 IU/m L,煮沸法线性范围2.4×(102~107),灵敏度240 IU/m L。结论磁珠法核酸提取试剂线性范围宽,灵敏度高,临床检出率明显高于煮沸法,对于高浓度和低浓度样本都能准确的定值,适合于乙肝治疗后监测与体检筛查。     

丙型肝炎病毒不同标志物检测结果的相关性分析

目的分析丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)抗原、抗体及核酸标志物实验室检测结果之间的关联性,评价适合血源筛查与早期临床确诊联合检测HCV感染的实验室诊断技术。方法用HCV RNA定量试剂、HCV核心抗原试剂及HCV抗体试剂分别检测304份血浆样本中HCV RNA载量、HCV Ag和抗-HCV指标,并对HCV RNA阳性样本进行基因分型。结果在304份血浆样本中,检出HCV RNA阳性样本87份,其HCV RNA载量≥500 IU/m L、500~30 IU/m L之间和<30 IU/m L时,血清学标志物HCV Ag浓度≥3 fmol/L及抗-HCV信号值/判断值≥1的阳性率分别为92.0%(23/25):96.0%(24/25)、58.8%(10/17):82.3%(14/17)及11.1%(5/45):75.6%(34/45),HCV RNA载量低于基因分型试剂盒LOD要求为500 IU/m L时,基因分型检测率为24.2%(15/62)。HCV RNA阴性样本217份中,HCV Ag浓度≥3 fmol/L和抗-HCV信号值/判断值≥1的样本阳性率分别为3.2%(7/217)和32.7%(71/217)。血清学指标在不同HCV RNA载量的阳性率差异具有统计学意义(χ2=197.4,P<0.01),HCV RNA载量与HCV Ag和抗-HCV水平成正相关。结论在中国人群中存在低HCV RNA水平携带者,HCV Ag和基因分型检测能力需要进一步提高。     

乙型肝炎病毒B,C基因型引起的慢性乙型肝炎患者特异性、非特异性细胞免疫比较

对138例CHB患者进行HBV基因分型,检测非特异性CTL,HBV特异性CTL,肝功能,HBVDNA,HBVM(HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc).结果显示,C基因型感染者,非特异性CTL((19.91±6.01)%)高于B基因型感染者((16.12±3.12)%),t=3.05,P<0.01,HBVDNA水平((6.25±0.81)log10拷贝/mL)高于B基因型感染者((5.02±0.61)log10拷贝/mL),t=6.03,P<0.01,HBeAg阳性46例(74.19%),高于B基因型感染者(39例,占52%),χ2=7.09,P<0.01,丙氨酸氨基转移酶(ATL)、血清总胆红素(TBIL)水平(分别为(507.15±312.17)IU/L和(46.10±40.18)μmol/L)高于B基因型感染者(分别为(290.05±215.12)IU/L和(29.12±17.12)μmol/L),t=3.76,2.29,P<0.01,P<0.05.C基因型感染者的HBV特异性CTL((0.21±0.05)%),低于B基因型感染者((0.39±0.12)%),t=5.61,P<0....     

基于 LUX 引物的 HBV 实时 PCR检测方法的建立

实时PCR技术因其快速、准确、灵敏度和重复性高、可减少交叉污染等特点而广泛应用于分子生物学和医学研究领域。本研究建立了一种基于LUX （Light Upon eXtension）引物的HBV病毒载量检测的实时定量PCR检测方法。通过检测系列稀释的HBV DNA（5-5×108拷贝/反应）来验证LUX实时分析的性能和灵敏度。结果表明该检测方法在Ct值和log10 HBV DNA浓度之间存在很好的线形关系,并且具有很高的灵敏度,检测低限可达每毫升血清中50拷贝的HBV。对91份阳性血清样品的检测和熔解曲线分析表明该方法具有很高的特异性。新建立的LUX实时检测方法为检测治疗效果、研究HBV病毒载量和疾病发展之间的关系提供了一种理想的工具。     

13 039例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平流行病学分析

目的 了解本地区近四年乙型肝炎患者HBV DNA阳性率与病毒载量分布特点。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测2012年至2015年间13 039例HBsAg阳性患者HBV DNA载量,并进一步分析24例HBeAg阳性、31例HBeAg阴性初诊乙肝患者四年间接受正规治疗后HBV DNA变化趋势。结果 本地区近4年间血清HBV DNA阳性率依次为48.6%、46.18%、38.69%、37.66%,呈逐年下降趋势,差异具有统计学意义（P<0.01）;各年度病毒载量均值的对数值分别为（5.48±1.56）,（5.27±1.72）,（5.29±1.68）,（5.35±1.85）拷贝/mL。2013年、2014年、2015年分别与2012年相比,差异均有统计学意义（P<0.01、P<0.01、P<0.05）,而低病毒载量（即病毒拷贝数的对数值小于5拷贝/mL）患者比例2012年明显大于其它年份,2012年分别与2013年、2014年、2015年相比,差异具有统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.05）;HBeAg阳性/阴性乙肝患者接受正规治疗后,其HBV DNA载量均呈逐年下降趋势,其中第一年下降显著（P<0.01）。结论 近4年本地区血清HBV DNA阳性率呈逐年下降趋势,且低病毒载量比例明显增加。     

抗结核药物易导致乙肝伴肺结核患者肝功能损伤

为了分析抗结核药物对乙肝伴肺结核患者肝功能的影响,本研究选取了2015年2月至2017年2月在我院治疗的乙肝病毒标记物阳性伴肺结核患者87例(观察组),同时选取乙肝病毒标记物阴性伴肺结核患者90例作为对照组,均给予2HREZ/4HR抗结核等治疗。通过观察两组治疗后肝损害发生以及肝功指标变化,本研究发现观察组治疗后丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBil)分别为(240.06±30.44)U/L、(180.04±32.24)U/L和(51.14±6.50)mol/L,明显高于对照组(p0.05);观察组肝功能损害发生率为66.67%,明显高于对照组(p0.05);观察组中,仅HBs Ag阳性者肝功能损害发生率为26.32%,明显低于HBs Ag+HBc Ab、HBs Ag+Hbc Ab+HBe Ab和HBs Ag+Hbc Ab+Hbe Ag患者(p0.05);HBs Ag+Hbc Ab阳性者肝功能损害发生率为61.90%,明显低于HBs Ag+Hbc Ab+Hbe Ag患者(p0.05)。本研究表明,抗结核药物易导致乙肝伴肺结核患者肝功能损伤,且不同乙肝感染类型患者肝损害发生有所差异,在抗结核治疗中应注意对患者肝功能的保护。本研究为乙肝伴肺结核患者的临床药物治疗提供了一定的帮助。