黄芪多糖对免疫抑制模型小鼠Treg细胞及Th17细胞亚群的影响

本研究旨在探讨黄芪多糖对免疫抑制模型小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)和CD4+Th17细胞亚群功能的影响。通过小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制动物模型,应用黄芪多糖对免疫抑制小鼠进行治疗,采用流式细胞仪分析脾脏中CD4+T细胞、CD4+CD25+Treg细胞的比例,ELISA检测血清IL-17的水平。结果表明:与模型对照组比较,黄芪多糖高、中剂量明显降低小鼠脾脏CD4+T细胞数的比例(P0.05),同时黄芪多糖上调小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞数的比例(P0.05),降低免疫抑制小鼠血清IL-17的水平,尤其1.0 g/(kg·d)剂量组的IL-17水平下降较为明显(P0.01)。提示黄芪多糖具有提高免疫抑制小鼠CD4+CD25+Treg细胞数的比例、降低CD4+T细胞的数量及抑制IL-17分泌活性的作用。     

雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。     

苦豆子总碱对溃疡性结肠炎小鼠结肠及肝组织中FXR、TGR5、CYP7A1蛋白表达的影响

基于法尼醇X受体和G蛋白偶联胆汁酸受体5(farnesoid X receptor/G protein-coupled bile acid receptor 5,FXR/TGR5)通路探讨苦豆子总碱对小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)模型的治疗作用及其作用机制。将60只健康雄性BALB/c小鼠分空白对照组(Con)、葡聚糖硫酸钠模型组(DSS)、柳氮磺胺嘧啶阳性对照组(SASP)和苦豆子总碱治疗组(TASA)。给予BALB/c小鼠3.5%DSS饮水使其连续自由饮用7天以建立小鼠急性UC模型,造模的同时每天灌胃苦豆子总碱(75 mg/kg)进行治疗,并以柳氮磺胺嘧啶(450 mg/kg)为阳性对照药物。试验期间对各组小鼠临床症状进行疾病活动指数(disease activity index, DAI)评分。第8天观察结肠HE染色病理切片,糖原PAS染色以及阿利新蓝染色观察结肠组织杯状细胞。酶联免疫吸附法(ELISA)检测结肠组织匀浆上清液IL-10、IL-23、IL-1β及IL-17的表达。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠和肝组织FXR、TGR5、CYP7A1的表达。结果显示,经苦豆子总碱治疗后,小鼠疾病活动指数、结肠组织病理学损伤及结肠长度明显改善(P0.01),结肠组织杯状细胞数量显著增加(P0.01),细胞因子IL-10显著升高(P0.01);IL-23、IL-17、IL-1β显著降低(P0.01),血清胆汁酸含量显著升高(P0.01),结肠和肝脏组织FXR、TGR5、CYP7A1均不同程度上调。结果表明苦豆子总碱对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用,其主要通过抑制相关炎症因子来抑制结肠炎症的发展,以及上调FXR/TGR5信号通路的相关蛋白的表达发挥其治疗作用。     

丹参对非酒精性脂肪肝Th17细胞及相关细胞因子的影响*

目的:研究丹参对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠Th17细胞及相关细胞因子的影响,为临床上丹参治疗NAFLD提供实验依据。方法:SPF级别SD大鼠32只,随机分为模型组、空白对照组、葛根对照组、丹参组,每组8只。模型组给予高脂饲料喂养4周以建立NAFLD模型;丹参治疗组及葛根对照组大鼠给予6.25g·kg^-1·d^-1的浓缩液每日1次灌胃;除了空白对照组外,其余各组大鼠均给予高脂饲料喂饲4周。实验完全结束(第4周),各组大鼠禁食12～14 h,禁水2 h后,采血,收集肝脏组织,检测各组大鼠血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)水平及肝功能(AST、ALT)、肝脏指数,观察肝组织病理学改变。流式细胞仪检测外周血Th17、Treg细胞含量。通过ELISA法检测血清IL-6、IL-17、TNF-α水平;RT-PCR法检测肝脏组织RORγt基因表达。结果:连续4周喂养高脂饮食后,模型组大鼠肝脏发生脂肪变性,有大量炎症细胞浸润。与模型组相比,丹参治疗组、葛根对照组大鼠TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平及肝脏指数明显低于模型组(P＜0.05),HDL-C水平明显高于模型组(P＜0.05)成功复制NAFLD大鼠模型。丹参治疗组大鼠外周血Th17细胞含量、IL-6、IL-17水平、大鼠RORγt基因表达量显著低于模型组及葛根对照组(P＜0.05);TNF-α水平低于模型组及葛根对照组;Treg细胞含量高于模型组(P＜0.05)及葛根对照组(P＞ 0.05);Treg/ Th17显著高于模型组及葛根对照组 (P＜0.05)。结论:丹参通过降低血清中IL-6、IL-17、TNF-α水平,抑制RORγt基因表达,降低外周血Th17细胞含量,升高Treg细胞含量,调整Th17/Treg平衡,从而抑制NAFLD发生发展。     

白介素17对脂多糖诱导人支气管上皮细胞炎症损伤的影响

目的:探讨白介素17A(interleukin-17A, IL-17A)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人支气管上皮细胞(16-HBE)炎症损伤的影响及其可能机制。方法:体外培养16-HBE细胞系,予LPS、IL-17A进行干预,分为空白对照组、LPS组、IL-17A组、IL-17A+LPS组。采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay, Elisa)测定细胞培养液上清中IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-8等炎症因子的水平,蛋白印迹法(Western Blot, WB)检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPKs)信号通路相关蛋白:细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P38蛋白激酶(P38)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达及其相应磷酸化蛋白(P-ERK、P-P38、P-JNK)的表达。体外培养16-HBE细胞系,予LPS、IL-17A以及ERK1/2抑制剂(U0126)、p38抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125),分为空白对照组、LPS+IL-17A组、IL-17A+LPS+UO126组、IL-17A+LPS+SB203580组、IL-17A+LPS+SP600125组。采用酶联免疫吸附法测定细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-8等炎症因子水平。结果:与空白对照组比较,LPS、IL-17A组,细胞上清中IL-6、IL-8的表达明显升高(P0.01),IL-4的表达降低(空白组vs LPS组P0.01,空白组vs IL-17A组P0.05),细胞内磷酸化ERK、P38、JNK蛋白的表达明显增加(空白组vs LPS组P0.05,空白组vs IL-17A组P0.01)。IL-17A+LPS组细胞上清中IL-6、IL-8、IL-4水平及细胞内P-ERK、P-P38、P-JNK的表达较LPS、IL-17A组更高(P0.05)。添加ERK、P38和JNK抑制剂后,与LPS+IL-17A组对比,IL-17A+LPS+U0126组、IL-17A+LPS+SB203580组和IL-17A+LPS+SP600125组细胞上清中IL-6、IL-8、IL-4水平下降(P0.05)。结论:IL-17A可能通过上调IL-6、IL-8的表达加重LPS诱导的16-HBE细胞炎症损伤,MAPKs可能是这一过程中的重要信号转导通路。     

唑来膦酸联合IL-2体外诱导胃癌患者外周血γδT细胞的研究

目的:探讨唑来膦酸联合白细胞介素-2(IL-2)诱导胃癌患者外周血γδT细胞的作用。方法:收集胃癌患者和健康捐献者各30例,分别采集外周静脉血并分离出单核细胞(PBMC),采用流式细胞仪(FCM)检测唑来膦酸联合IL-2诱导前后γδT细胞的数量及其CD69分子的表达情况。结果:胃癌组的γδT细胞数量和百分比均明显低于健康对照组(P0.05);唑来膦酸联合IL-2诱导PBMC后,胃癌实验组和健康对照组中的γδT细胞的数量和百分比均较诱导前明显升高(P0.05)。结论:唑来膦酸联合IL-2体外诱导PBMC可显著扩增γδT细胞,以加强杀伤肿瘤细胞的目的。     

卡介苗干预对哮喘小鼠肺组织IL-17A表达的影响及可能机制研究

目的:观察卡介苗干预对哮喘小鼠肺组织IL-17A的表达、气道炎症的影响,并探讨可能机制.方法:按随机数字表法,24只昆明小鼠分为正常对照(A组),模型组(B组),卡介苗(BCG)干预组(C组).C组小鼠每周一次皮内注射BCG 0.025 mg,连续3次.首次皮内注射4周后,第1、8、15天每只小鼠分别给予鸡卵清蛋白(OVA)与氢氧化铝混合腹腔注射,第22天给予1％ OVA溶液雾化吸入激发.激发后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数及分类计数.肺组织HE染色行支气管粘膜下炎症评分.酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测肺组织匀浆中的IL-17A和IFN-γ水平.结果:与正常对照组比较,BCG干预小鼠BALF中白细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数均高于显著增高,低于模型组小鼠.BCG处理小鼠支气管粘膜下炎性细胞浸润程度较模型组小鼠明显降低(P＜0.01),比A组明显(P＜0.01).与对照组相比,模型组和BCG组小鼠肺组织匀浆中的IFN-γ显著相抵,在模型组小鼠更明显,IL-17A浓度增高,在模型组小鼠更明显(P＜0.05).结论:BCG干预可抑制气道炎症,可能通过上调Th1型免疫反应增加IFN-γ浓度、减少IL-17A在哮喘小鼠肺组织中表达,减少中性粒细胞的募集活化.     

清血消脂片对代谢性炎症小鼠的干预作用及炎症机制研究

目的:研究清血消脂片对代谢性炎症小鼠血脂和血清炎症因子IL-6、MIP-1a以及NF-κB和PPARγm RNA表达的影响。方法:60只雄性C57小鼠,随机分为正常组、模型组、立普妥组、清血消脂片组(n=15)。采用高脂饮食联合脂多糖注射造成小鼠代谢性炎症模型。造模5周后,按成人临床等效剂量换算成小鼠剂量灌胃给药,每天两次,连续灌胃5周。处死后采血和取肝脏,检测各组小鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,并采用流式细胞术检测血清炎症因子IL-6和MIP-1a水平。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定肝脏NF-κB和PPARγm RNA的表达。结果:与模型组相比,清血消脂片组小鼠血清TC和LDL-C水平明显降低(P0.01),血清炎症因子IL-6和MIP-1a水平明显降低(P0.01),清血消脂片组小鼠肝脏组织中NF-κB m RNA的表达显著降低(P0.05),PPARγm RNA的表达显著提高(P0.05)。结论:清血消脂片可降低代谢性炎症小鼠血脂和血清炎症因子IL-6和MIP-1a水平,并可通过调控核转录因子NF-κB和PPARγ受体,抑制小鼠体内代谢性炎症,从而可能对早期动脉粥样硬化起到干预作用。     

miR-146a过表达缓解高脂饮食模型小鼠的炎症及胰岛素抵抗

该研究探讨了外源miR-146a对高脂饮食诱导的小鼠体内炎症及胰岛素抵抗的影响。使用45%高脂饲料连续喂养小鼠18周,第5周开始尾静脉注射腺病毒载体(30μL),每隔3周注射1次,共注射5次;第17周、18周分别对小鼠模型进行葡萄糖耐量和胰岛素耐量检测;第19周处死小鼠后,取血清、肝脏和附睾脂肪组织。利用酶联免疫法检测血清TNF-α和IL-6含量,并分别用Real-time PCR和免疫组化法检测肝脏和附睾脂肪组织中miR-146a和CD68表达,同时用Western blot观察了胰岛素作用前后肝脏中Akt磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,尾静脉注射miR-146a腺病毒表达载体,可显著提高肝脏和附睾脂肪组织中miR-146a的表达水平(P0.05),降低CD68表达量(P0.01,P0.001),同时显著降低血清中TNF-α和IL-6含量(P0.05,P0.01),胰岛素作用之后肝脏p-AktSer473磷酸化水平明显升高(P0.05),葡萄糖耐量和胰岛素耐量试验结果提示,小鼠糖耐量和胰岛素敏感性均有所提高(P0.01,P0.05)。研究结果表明,通过尾静脉注射miR-146a腺病毒表达载体,可提高小鼠体内miR-146a表达量,从而缓解慢性炎症,减轻胰岛素抵抗状态。     

细胞免疫功能及辅助型T细胞因子在口腔扁平苔藓中的作用

目的探讨细胞免疫功能及辅助型T细胞(Th)细胞因子在口腔扁平苔藓(OLP)中的作用。方法以35例糜烂型(糜烂组)及29例网纹型OLP(网纹组)患者为对象,选取同期20例健康人为对照组,流式细胞术检测外周血中T细胞、B细胞、NK细胞和调节性T细胞亚群表达百分率。ELISA法检测外周血中TNF-α和INF-γ(Th1型细胞因子),IL-4和IL-10(Th2型细胞因子),IL-17、IL-23(Th17型细胞因子)含量;分离外周血单个核细胞,qRT-PCR检测上述因子mRNA的表达。结果与健康组相比,OLP患者CD3~+、CD4~+T细胞亚群比例(F=3.211和3.565,P0.05)及CD4~+/CD8~+降低(F=3.430,P0.05),CD4~+Foxp3~+调节性T细胞亚群比例(F=3.370,P0.05)及外周血中TNF-α、INF-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-23含量增高(F=0.923、0.820、1.043、1.132、0.745和0.802,P0.05)。与网纹组相比,糜烂组CD8~+T细胞亚群比例较低(t=2.450,P0.05);IL-4、IL-10蛋白(t=22.780和25.112,P0.05)及mRNA较低(t=3.781和6.710,P0.05),IL-17、IL-23蛋白(t=15.765和19.307,P0.05)及mRNA较高(t=4.022和8.569,P0.05)。结论口腔扁平苔藓患者存在细胞免疫紊乱及Th细胞因子异常,其中CD8~+及Th17型细胞与糜烂型OLP发病有关,Th2型细胞与网纹型OLP发病有关。     

脂蛋白受体激动剂调节COPD小鼠炎症反应机制研究

目的:探究脂蛋白受体激动剂BML-111调节COPD小鼠炎症反应的机制。方法:构建COPD小鼠模型,通过HE染色检测小鼠肺组织和血管周围炎性细胞侵润程度;通过ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;通过Western blot检测小鼠肺组织中NLRP3、Cleaved-IL-1β、Cleaved-caspase-1和Nrf-2的表达。结果:番红染色结果显示,与对照组相比,COPD模型组显示出严重的炎症反应,炎症细胞侵润程度增加,肺泡囊和间隙增大,支气管壁增厚。与模型组相比,低BML、高BML和Dex组的肺组织和血管周围的炎性细胞浸润程度明显降低(P0.05)。ELISA检测结果显示,COPD模型组中TGF-β、TNF-α、IL-10和IL-1β的表达均明显高于对照组(P0.05);在高BML组中,TGF-β、TNF-α、IL-10和IL-1β的表达明显低于COPD模型组中的表达(P0.05)。与COPD模型组相比,Dex组的TNF-α、IL-10和IL-1β的表达显著下调(P0.05),TGF-β的表达无显著差异(P0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组相比,COPD模型组中NLRP3、cleaved-IL-1β和cleaved-caspase-1的表达显著上调(P0.05);与COPD模型组相比,低剂量BML组、高剂量BML组和Dex组中NLRP3、cleaved-IL-1β和cleaved-caspase-1的表达显著下调(P0.05)。活性检测结果显示,与对照组相比,COPD模型组的SOD活性显著降低(P0.05),MDA活性显著增强(P0.05)。BML-111处理后,与模型组相比,10 mg/kg的BML-111和2 mg/kg的Dex显著提高SOD活性,并显著降低MDA活性(P0.05)。与对照组相比,COPD模型组的Nrf-2的表达显著下调;而低剂量BML组,高剂量BML组和Dex组中Nrf-2的表达明显高于COPD模型组(P0.05)。结论:BML-111对COPD小鼠的抗炎作用可能是通过调节NLRP3炎症小体激活和ROS的产生来介导。     

双歧杆菌对中国对虾原肌球蛋白致敏小鼠的免疫调控作用

【目的】比较研究婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis 13.085)对中国对虾原肌球蛋白致敏BALB/c小鼠预防与治疗过敏反应的差异,探究其对致敏小鼠Treg/Th17细胞平衡及相关细胞因子的影响。【方法】采用硫酸铵盐析及等电点沉淀法纯化中国对虾原肌球蛋白(TM),将中国对虾TM和弗氏佐剂混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验小鼠随机分为正常对照组、治疗对照组、双歧杆菌治疗组、预防对照组和双歧杆菌预防组。观察分析小鼠过敏症状(腹泻、肺组织HE染色比较、称重法测定小鼠体重和脾脏脏器系数变化),采用ELISA测定小鼠血清中特异性IgE、IgG2a和组胺的含量,采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚群(Treg、Th17)数量,采用荧光定量PCR测定脾脏中Treg型和Th17型细胞因子和转录因子的表达量。【结果】纯化得到中国对虾原肌球蛋白纯度为84.93%,得率为60.88%。体内试验表明,双歧杆菌治疗组和预防组相比于对照组,腹泻和过敏症状均有明显的缓解;不同时期的双歧杆菌干预均对过敏小鼠肺组织症状有明显的改善作用,且可降低过敏小鼠的脾脏脏器系数。第56天实验周期结束后发现,相比预防对照组和治疗对照组,双歧杆菌预防组和治疗组小鼠血清中特异性IgE和组胺含量显著降低(P0.05),脾脏Treg/Th17比值显著升高(P0.05),Th17型细胞因子IL-17A mRNA表达水平显著降低(P0.01);双歧杆菌治疗组相对于治疗对照组,Treg型细胞因子CD25mRNA表达水平显著升高(P0.01)。此外,双歧杆菌治疗组血清特异性IgE及IL-17A mRNA转录水平显著低于双歧杆菌预防组(P0.05),而Treg/Th17比值及CD25 mRNA转录水平显著高于预防组(P0.05)。【结论】双歧杆菌13.085能有效缓解小鼠过敏症状,且治疗免疫调控效果优于预防效果,其作用可能通过平衡Treg/Th17细胞亚群数量,促进Treg型细胞因子表达而抑制Th17型细胞因子分泌,从而阻断炎性抗体及组胺释放。     

IL-8受体拮抗剂G31P拮抗小鼠旋毛虫感染的实验研究

目的通过检测感染旋毛虫的小鼠膈肌中IL-8受体CXCR1/2的表达以及肌肉组织纤维化程度,探讨G31P对旋毛虫囊包形成的影响以及防治效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分成三组:阳性模型对照组(n=12,皮下注射生理盐水),G31P治疗组(n=12,皮下注射G31P)和阴性正常对照组(n=6,皮下注射生理盐水)。阳性模型对照组与G31P治疗组小鼠应用口饲法感染旋毛虫囊包,(100±5)个/只,于感染后第10天皮下注射G31P(500μg/kg),1次/2d,连续14d,阳性对照组和阴性对照组分别皮下注射等量生理盐水。感染24d后无菌解剖小鼠,收取膈肌组织,用于HE染色和免疫组化分析。结果与阳性模型对照组相比,G31P治疗组旋毛虫囊包数量明显减少(P0.01),而且囊包大多形成不完整、纤维化程度轻。炎症因子受体CXCR1和CXCR2的表达均显著低于模型组(P0.01)。结论 G31P具有下调膈肌组织中炎症因子IL-8受体CXCR1和CXCR2表达的作用,从而拮抗旋毛虫囊包纤维化的形成,并对旋毛虫幼虫虫体结构的完整性产生一定的影响。     

黄芪提取液治疗呼吸道合胞病毒感染小鼠的作用机制研究

目的:分析黄芪提取液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠的作用机制。方法:将30只SD小鼠随机分为对照组、模型组和黄芪组各10只。模型组和黄芪组均滴鼻滴度为10-3.5 TCID50/mL的RSV病毒液,制备小鼠RSV模型,对照组滴鼻等量生理盐水。黄芪组腹腔注射黄芪注射液18 g/kg,每日1次,连用9 d;对照组和模型组小鼠腹腔注射等体积的蒸馏水。治疗后,检测小鼠血清白细胞介素(IL)-2、IL-23、IL-17、IL-6、干扰素(IFN)-γ、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平,Western blot检测Toll样受体(TLR)7蛋白表达水平,HE染色观察肺组织形态。结果:与对照组相比,模型组小鼠IL-23、IL-17、IL-6、NO、MDA和TLR7水平显著升高(P0.05),IL-2、SOD和IFN-γ水平显著下降(P0.05);与模型组相比,黄芪组小鼠的IL-23、IL-17、IL-6、NO、MDA和TLR7水平显著下降(P0.05),IL-2、SOD和IFN-γ水平显著升高(P0.05)。结论:黄芪提取液可以有效调节辅助性T细胞释放细胞因子,保护呼吸道合胞病毒感染引起的免疫系统功能紊乱。     

特异性免疫治疗对屋尘螨致敏哮喘小鼠NKT细胞的影响

目的:研究特异性免疫治疗(SIT)对哮喘小鼠自然杀伤T(NKT)细胞的影响。方法:24只BALB/C小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、哮喘免疫治疗(SIT)组(C组),各8只。通过屋尘螨提取液(HDM)诱导建立哮喘小鼠模型并进行SIT治疗。检测各组小鼠的气道反应性、支气管肺泡灌洗液(BAlF)细胞计数及分类、ELISA检测IL-4、IFN-γ以及应用流式细胞仪检测NKT细胞数目,通过RT-PCR方法检测T-bet和GATA-3mRNA表达水平;HE染色观察小鼠肺组织的改变。结果:与B组相比,C组气道反应性明显下降(P0.01);BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数显著减少(P0.01);血清IL-4分泌显著降低(P0.01),IFN-γ显著升高(P0.01);NKT细胞数及其成熟型比例明显升高(P0.05);T-betmRNA表达水平明显升高(P0.01),且与NKT细胞数及其成熟型比例呈正相关性,GATA-3mRNA表达水平明显降低(P0.05),且与NKT细胞数及其成熟型比例呈负相关性。B组肺部管腔周围炎性细胞聚集,组织上皮损伤,组织水肿,而C组肺部变应性炎症明显减轻。C组其他各项指标接近A组。结论:哮喘的发生可能与NKT细胞失调相关,通过改变NKT细胞数目及其成熟型比例来调节GATA-3/T-bet的表达可能是SIT治疗哮喘的作用机制之一。     

表达人TCRα转基因小鼠1型糖尿病模型的建立及其免疫机制的初步研究

目的建立T细胞介导的1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)动物模型,为进一步研究该病发病免疫机理奠定基础。方法将雌雄各10只系统表达人T细胞受体α基因(T cell receptor,TCRα)小鼠随机分为模型组和对照组,其中模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)每次100 mg/(kg·bw),间隔1 d后再注射一次,对照组注射等量的生理盐水;注射后每周测定一次血糖和体重,当出现重度糖尿病临床表现时处死,其余小鼠注射后8周处死,观察胰腺组织病理学改变,并进行外周血淋巴细胞亚群,以及血清胰岛素和细胞因子的测定。结果模型组小鼠发病率为10/10,对照组为0/10;模型组外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平较对照组均有显著降低(P<0.01),B细胞表型CD19+水平与对照组差异无显著性(P>0.05);注射STZ后约8周,模型组血清胰岛素、IFN-γ、TNF-β较对照组差异有显著性(P<0.01),IL-2高于对照组但差异无显著性(P>0.05)。结论在系统表达人TCRα基因小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后2～8周可建立稳定1型糖尿病的小鼠模型。     

牛磺酸对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型中IL-6影响

目的:观察牛磺酸对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型血清中IL-6的影响。方法:将30只雄性SPF级C57B/L小鼠随机分为空白对照组,模型组和牛磺酸组,每组各10只。空白对照组给予100%花生油1 m L/Kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20%CCl4的花生油1 m L/Kg腹腔注射,每周2次,共10周;牛磺酸组给予含20%CCl4的花生油1 m L/Kg腹腔注射,每周2次,共10周,并从第3周起给予牛磺酸500 mg/Kg/d灌胃至第10周。在第10周通过摘除眼球取血,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、IL-6的含量;检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;计算肝脏指数;观察小鼠肝脏的HE染色病理组织学改变。结果:模型组与空白对照组相比小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT、AST和IL-6水平显著升高(P0.05),肝脏组织中SOD和MDA水平显著升高(P0.05),肝脏指数增加(P0.05),病理检查显示肝细胞坏死并出现脂肪空泡、纤维组织增生和炎细胞浸润;牛磺酸组与模型组相比小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT、AST和IL-6的水平显著降低(P0.05),肝脏组织中SOD显著升高(P0.05),MDA水平显著降低(P0.05),肝脏指数降低(P0.05),病理检查显示肝脏组织中无炎性浸润、脂肪空泡和无纤维组织沉积。结论:牛磺酸可以降低肝纤维化小鼠血清中IL-6的含量,减轻CCl4诱导小鼠肝纤维化程度。     

猪白细胞介素-2和融合抗菌肽重组酵母菌构建及其对小鼠免疫和生长的协同效应

为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P 0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P 0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P 0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P 0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P 0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。     

双歧杆菌完整肽聚糖对食物过敏小鼠调节性T细胞影响的研究

目的以食物过敏小鼠为动物模型,通过灌喂双歧杆菌完整肽聚糖(Whole Peptidoglycan,WPG),观察其对调节性T细胞的作用。方法 4～6周龄SPF级无鸡蛋喂养BALB/c雌鼠随机分为3组,每组8只。取其中2组建立食物过敏模型,分别为OVA致敏阳性对照组、OVA激发后灌喂双歧杆菌WPG治疗组和生理盐水对照组。采用ELISA法检测各组血清中OVA特异性IgE、IL-10和TGF-β1水平;流式细胞术分析脾脏单个核细胞悬液中CD4+CD25+调节性T细胞的数量变化。结果 OVA组IL-10、TGF-β1水平显著高于对照组(P分别0.05和0.01);WPG组血清IL-10和TGF-β1水平显著低于OVA组(P0.05)。OVA组脾CD4+CD25+T淋巴细胞的百分比低于对照组(P0.05),WPG组与OVA组相比有升高趋势,差异有统计学意义(P0.05);OVA组脾Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的百分比显著低于对照组(P0.01),WPG组与OVA组相比有升高趋势,差异有统计学意义(P0.01)。结论双歧杆菌WPG可以增加食物过敏小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量,刺激细胞因子IL-10和TGF-β分泌。     

鲫鱼汤对阿霉素肾病大鼠Th17细胞相关炎性因子表达的影响

目的研究鲫鱼汤对阿霉素肾病大鼠IL-17、IL-23、IL-1β和CXCR2等表达的影响,探讨其治疗作用和机制。方法成年Wistar雄性大鼠40只,随机分为鲫鱼汤组、厄贝沙坦组、肾病组、空白对照组,除空白对照组,其他三组给予尾静脉注射6.2 mg/kg体重阿霉素建立肾病模型,空白组注射等容量生理盐水。模型成功后,给予鲫鱼汤灌胃干预9周,每周检测12 h尿蛋白定量,检测终末血生化指标变化,光镜下观察大鼠肾脏病理改变,免疫组化检测IL-17、IL-23、IL-1β和CXCR2在肾脏的表达,ELISA法检测IL-17、IL-23和IL-1β在血液中的含量。结果鲫鱼汤组大鼠血白蛋白水平高于肾病组(P=0.03)低于空白组(P=0.01);鲫鱼汤组大鼠肾组织IL-17、IL-23、CX-CR2较肾病组表达减少(P=0.01,P=0.01,P=0.02),较空白组表达增多(P=0.04,P=0.007,P=0.05)。结论 Th17细胞相关炎性因子增多是阿霉素肾病大鼠的发病机制之一,鲫鱼汤可通过升高血白蛋白,降低IL-17、IL-23、CXCR2表达而发挥肾脏保护作用。