c－Fos在培养的心肌细胞肥大过程中表达的免疫组织化学研究

实验选用ＳＤ乳鼠,取心尖作心肌细胞培养。实验组加血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）,对照组加等量生理盐水,加液后于２小时、１天、３天和第７天终止培养。利用ｃ－Ｆｏｓ的免疫组织化学技术检测Ｆｏｓ蛋白在两组中的表达强度。结果表明：①加液后２小时,加ＡｕｇⅡ组和加生理盐水组心肌细胞均呈阳性表达。②加液后１天、３天,实验组弱阳性表达,对照组未见表达。③加液持续作用７天后,加ＡｕｇⅡ组心肌细胞肥大已形成,可见胞体很大的心肌细胞呈强阳性表达,而加生理盐水组无表达、结果提示：ｃ－Ｆｏｓ基因可能参与心肌肥大的病理过程。     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo …

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮（ＮＯ）对血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）和内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的心肌细胞肥大和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定心肌细胞总蛋白含量（作为心肌细胞肥大的指标）;用基因特异性引物和ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ一步法进行逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测大鼠心肌细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达（以ＧＡＰＤＨ为内标）。结果显示,ＡⅡ和ＥＴ－１分别作     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞c-fos表达和蛋白质合成的作用

本实验在培养新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ对心肌细胞ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达和蛋白质合成的影响。结果显示,血管紧张素Ⅱ能诱导ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达,增加蛋白质含量,并呈量－效关系,还能加速＾３Ｈ－亮氨酸的掺入速度。上述这些作用可血管紧张素Ⅱ受体拮抗ｓａｒａｌａｓｉｎ所阻断,提示这些作用是受体介导的。     

MKP—1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用

本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶－１（ＭＫＰ－１）角度,研究丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标,以凝胶内ＭＢＰ原位磷酸化测定ＭＡＰＫ活性,以免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔｔｉｎｇ）分别测定ＭＫＰ－１及磷酸化ｐ４４ＭＡＰＫ、ｐ４２ＭＡＰＫ蛋白表达。结果发     

急性压力超负荷后心肌cAMP与肾素血管紧张素系统活化的关系

为阐明急性压力超负荷后心肌细胞内ｃＡＭＰ浓度升高和心肌肾素血管紧张素系统活化之间是否存在内在因果联系,用腹主动脉缩窄的方法建立急性压力超负荷大鼠模型。发现在术后１ｈ心肌组织中血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）ｍＲＮＡ及蛋白表达均显著增加,ＡＣＥ活性及血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量也明显升高,并在高水平。同时,心肌组织ｃＡＭＰ含量于术后０．５ｈ明显增加,术后５ｄ时达峰值,术后３０ｄ降至正常。在心肌细胞培养的基     

p53和c-myc异常表达与胃癌细胞多药耐药性关系的研究

应用ＳＡＢＣ免疫组织化学方法研究６７例胃标本中ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ的表达与多药耐药性（ＭＤＲ）的关系。结果显示本组胃癌中ｐ５３阳性３２例,阳性率４７．８％;ｃ－ｍｙｃ阳性３７例,阳性率５５．２％;Ｐ－ｇｐ阳性３９例,阳性率５８．２％。ｐ５３的异常表达与ｍｄｒ－１基因表达呈显著正相关（ｒ＝０．６３,Ｐ＜０．０５）,而ｃ－ｍｙｃ和ｍｄｒ－１的表达无明显相关。提示ｐ５３异常表达可增加ｍｄｒ－１基因的表达,从而使胃癌细胞获得ＭＤＲ表型     

P53，Rb和c－myc基因在人脑原发性肿瘤中的转录表达

采用ＲＮＡ斑点杂交分析,对２１测人脑原发性胶质瘤和１１例人脑膜瘤中ｐ５３,Ｒｂ和ｃ－ｍｙｃ基因转录水平的表达进行研究,发现４８．４％的肿瘤中ｐ５３基因表达减弱,２１．９％的肿瘤中Ｒｂ基因表达减弱;７１．９％的肿瘤中ｃ－ｍｙｃ基因表达增强,在ｐ５３基因表达减弱的１５例病例中有１３例（８０％）ｃ－ｍｙｃ基因表达增强,结果表明,ｐ５３基因表达减弱和ｃ－ｍｙｃ基因表达增强与人脑原发性肿瘤的发生有关。     

人肝细胞癌中N－ras、c－myc癌基因的表达──原位分子杂交和免疫组织化学研究

为了明确Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ癌基因在人肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达及其形态学分布,我们对３８例石蜡包埋的ＨＣＣ（其中３３例带有癌周肝组织）标本进行了原位核酸杂交和免疫组化研究。结果表明,ＨＣＣ及癌周肝组织中Ｎ－ｒａｓ表达阳性率分别为４２％和３９％;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ阳性表达率分别为４７％和３６％;ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性率分别为５３％和３９％。ＨＣＣ与癌周肝之间Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平无显著差别;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及蛋白阳性强度也无显著差别,其形态学分布基本一致,主要集中于癌细胞和癌周肝中的部分高度增生结节;Ｎ－ｒａｓ表达增强主要见于癌细胞、癌周肝中的高度增生结节、小细胞性不典型增生及少部分肝小多角细胞。它们与ＨＢｘＡｇ表达之间无明确的对应关系。上述结果显示,ＨＣＣ中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ表达都显著增强,它们可能是人ＨＣＣ发生中较晚期的事件,而Ｎ－ｒａｓ表达增强早于ｃ－ｍｙｃ癌基因活化。     

血管紧张素Ⅱ诱导左心室原癌基因c－fos和c－myc的表达

本实验用Ｌａｎｙｅｎｄｏｒｆｆ心脏灌流装置,探讨血管紧张素Ⅱ对左心室原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的作用。观察到血管紧张素Ⅱ能诱导左心室ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的表达,ｃ－ｆｏｓ表达早于ｃ－ｍｙｃ表达,并呈量－效关系。这种作用可被血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂ｓａｒａｌａｓｉｎ所阻断。这些结果提示血管紧张素Ⅱ诱导的ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的表达是受体介导的。ＴＴＸ完全阻断血管紧张素Ⅱ诱导的ｃ－ｆｏｓ表达。ＴＴＸ对ｃ－ｍｙｃ的表达无明显影响。     

野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞蛋白质和DNA合成的影响

本文利用体外细胞培养技术,观察了血管紧张素Ⅱ对Ｗｉｓｔａｒ乳鼠的心肌细胞和心肌组织中非心肌细胞的促生长作用。结果表明：随ＡｎｇⅡ浓度的升高,心肌细胞直径、总蛋白含量及＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率均呈剂量依赖性增加,而各组间＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及心肌细胞数目则无明显变化。相反,ＡｎｇⅡ在引起心肌组织中非心肌细胞（主要是成纤维细胞）的＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率增加的同时,也引起其＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及细胞数目的增加     

血管紧张素Ⅱ诱导左心室原癌基因c—fos和c—myc的表达

本实验用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏灌流装置,探讨血管紧张素Ⅱ对左心室原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的作用。观察到血管紧张素Ⅱ能诱导左心室ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的表达,ｃ－ｆｏｓ表达早于ｃ－ｍｙｃ表达,并呈量－效关系。这种作用可被血管紧张素Ⅱ受体抗剂ｓａｒａｌａｓｉｎ所阻断。这些结果提示血管紧张素Ⅱ诱导的ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的表达是受体介导的。ＴＴＳ完全阻断血管紧张素Ⅱ诱导的ｃ－ｆｏｓ表达。     

一氧化氮在防止心肌肥厚反应中的作用及其机制

本工作从整体和细胞水平探讨一氧化氮（ＮＯ）在防止心肌肥厚反应中的作用及其机制。压力超负荷心肌肥厚大鼠左心室肌ＮＯ含量减少。内源性ＮＯ可能通过非ｃＧＭＰ依赖机制减轻压力超负荷引起的心肌肥厚。在培养的新生大鼠心肌细胞中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）、内皮素－１（ＥＴ－１）和去甲肾上腺素（ＮＥ）通过各自的受体和偶连的Ｇ蛋白,一方面引起心肌细胞肥大;另一方面抑制一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性和ＮＯ生成。心肌细胞和非心肌     

开搏通对游泳大鼠心肌肥大的影响

为了明确开搏通对运动性心肌肥大的作用。本实验采用游泳训练引起的大鼠心肌肥大模型,应用放射免疫及生化等方法对心肌肥大及心脏肾素－血管紧张素系统（Ｒ－Ａ－Ｓ）的变化进行了初步研究。观察到游泳五周时,大鼠心重／体重比值（Ｈ／Ｂｗｔ）显著升高,同时心肌血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）及心肌血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）也明显升高。而服用开搏通的游泳大鼠心肌ＡｎｇⅡ,ＡＣＥ较单纯游泳组低,但心重／体重比值却升高。上述结果提示开搏通能抑制运动所致心肌ＡｎｇⅡ升高,但不能防止运动引起的心肌肥大。     

一氧化氮在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

在培养新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮（ＮＯ）在血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞以大中的作用。结果显示,血管紧张素Ⅱ可使心肌细胞蛋白质含量显著增加,心肌细胞一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性和培养液ＮＯ浓度明显降低。血管紧张素Ⅱ可明显降低心肌细胞ｅＮＯＳｍＲＮＡ水平。Ｓａｒａｌｓｉｎ和百日咳毒素（ＰＴＸ）可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的蛋白质含量增加、心肌细胞ＮＯＳ活性减弱和培养液ＮＯ浓度降低。硝普钠提高心肌细胞培养     

酶母K.cicerisporus基因组中有启动子功能的DNA片段的克隆

利用以３′－氨基糖苷磷酸转移酶基因（ＡＰＨＩ）为报道基因的一套启动子探针质粒ｐＳＫ－ｋａｎ４０１、ｐＳＫ－ｋａｎ１１０５、ｐＳＫ－ｋａｎ１２３８,从酵母Ｋｌｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓ基因组中克隆到８个有较强启动功能的ＤＮＡ片段,分析出３′端ＤＮＡ序列,并在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏ８ｍｙｃｅｓｅ ｌａｃｔｉｓ中通过检测报告基因与３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＡＰＤＨ）的ｍＲＮＡ表达量的比     

大鼠运动性肥大心脏心肌血管内皮生长因子及其基因表达的研究

目的和方法：血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）是新近确定的一种特异作用于血管内皮细胞的活性肽。最近发现正常心肌细胞可表达ＶＥＧＦ,高血压肥大心脏心肌ＶＥＧＦ及基因表达增强,但对运动性心肌肥大时的变化尚不清楚。本实验采用免疫组化和分子杂交方法,对游泳运动１０周大鼠稳定期肥大心脏心肌ＶＥＧＦ及其基因表达进行研究。结果：ＷｉｓｔａｒＫｙｏｔｏ（ＷＫＹ）大鼠、自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ,ＳＨＲ）和运动大鼠心肌细胞浆内均有特异性ＶＥＧＦ染色颗粒,但运动大鼠心肌细胞胞浆内染色颗粒增加最明显。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分子杂交结果表明三组大鼠心肌均有ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达,其中ＳＨＲ表达最强,运动大鼠比ＷＫＹ大鼠增强,但低于ＳＨＲ。结论：目前对这一结果的生理意义还不清楚,推测可能与心肌肥大时细胞间质血管增生有关。     

内皮细胞E—选择蛋白的表达及p53基因的影响

为探讨血管内皮细胞Ｅ－选择蛋白的表达及野生型ｐ５３基因对其表达的影响,采用流式细胞术及ＲＴ－ＰＣＲ法分别测定其Ｅ－选择蛋白及其ｍＲＮＡ水平。结果表明：静息状态的内皮细胞表面检测不到Ｅ－选择蛋白的表达,尽管此时细胞内存在Ｅ－选择蛋白的ｍＲＮＡ。肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）可浓度依赖性地诱导内皮细胞表达Ｅ－选择蛋白,内皮细胞表面Ｅ－选择蛋白表达的增加伴随着细胞内Ｅ－选择蛋白ｍＲＮＡ水平的升高。ＴＮＦα刺     

粉防己碱抑制血管平滑肌细胞增殖及对HSP70和p53表达的影响

目的：观察粉防己碱（Ｔｅｔ）对ＶＳＭＣ增殖的作用及对热应激蛋白７０ｋｄ（ＨＳＰ７０）及其ｍＲＮＡ和抑癌基因ｐ５３ｍＲＮＡ的影响。方法：用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型。采用氚－胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］ＴｄＲ）掺入法流式细胞术,Ｗｅｓｔｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法。结果：Ｔｅｔ能逆转内皮素所致的［３Ｈ］ＴｄＲ掺入量增多（Ｐ＜０．０１）,阻止血管平滑肌细胞由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期）,并能逆转内皮素引起的ＨＳＰ７０及ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,ｐ５３抑癌基因ｍＲＮＡ表达减弱（Ｐ＜０．０５）。结论：Ｔｅｔ能抑制血管平滑肌细胞增殖,与ＨＳＰ７０及ｐ５３的调控有关     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机