细胞培养中的支原体污染问题(续)

6.放射性同位素自显影方法可用~(?)H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷或尿嘧啶核苷自显影实验检查支原体的污染。此法的简单原理是:无污染的正常细胞在S期(DNA合成期)可摄取大量的胸腺嘧啶脱氧核苷到细胞核中。而当细胞被污染后,培养液的胸腺嘧啶脱氧核苷被支原体的嘌呤嘧啶核苷磷酸化酶     

用同位素标记法来研究分泌蛋白的合成和运输的具体详细过程究竟是怎样的？

这项研究工作所涉及的基本实验技术称为电子显微镜放射自显影技术（electron microscopic autoradiography）简称电镜放射自显影技术。了解这一技术的基本原理,就比较容易理解所提出的上述问题。放射自显影技术是利用放射性同位素放出的电离射线使乳胶（含AgBr或AgC1）感光的作用,对细胞内生物大分子进行定性和定位研究的一种细胞化学技术。根据研究对象的需求,分为光镜（显微）放射自显影和电镜放射自显影技术。     

细胞内RNA的原位杂交

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。     

压碎法制片技术在植物细胞放射自显影中的应用

放射自显影技术是放射性同位素示踪研究中最常用的方法之一,由于灵敏度高,既能准确定位又能精确定量,对研究生物体内物质的动态具有独特的优点。在植物细胞放射自显影研究中,常用的石蜡切片法虽能制出很薄的连续切片,但实验周期长,材料经脱水与浸蜡之后,易发生收缩,一些醇溶性或脂溶性物质并易产生移位或流失,而影响实验结果。为此,我们进行了研究。     

微核形成与细胞周期关系的初步研究Ⅰ.人体全血辐射处理后不同放置和培养时间对微核率的影响

本报告应用γ-射线诱发微核、放射性自显影等技术分析细胞周期,研究淋巴细胞微核形成与细胞周期间的定量关系。主要结果如下:(1)经400rad照射的静脉血,在室温下放置1.5小时,或在37℃下放置5小时,此时淋巴细胞属G_0期。和照射前相比,两组微核率均显著增加(P<0.01)。(2)照射静脉血经pHA刺激培养23—24小时收获细胞,此时转化淋巴细胞应属G_1期,分别计数转化和未转化(G_0期)淋巴细胞微核,与照射前未培养淋巴细胞相比有显著增加(P<0.01)。(3)400rad照射静脉血培养72小时后,淋巴细胞微核较培养前增加14.5倍。根据放射性自显影等细胞周期分析结果表明,微核在细胞周期各阶段均可形成。     

鸡胚肝乳糖凝集素专一性的研究——SEM-ARG技术的应用

本文利用扫描电镜放射自显影(SEM-ARG)技术研究鸡胚肝凝集素的专一性。该凝集素经乳糖尿素液抽提和离心分离后,再用DE-52纤维素柱和蓝色葡聚糖柱进一步纯化。纯化后的鸡胚肝凝集素用 ¹²⁵Ⅰ标记。以标记的 ¹²⁵Ⅰ-凝集素为探针再标记来自不同组织的细胞。标记的细胞经过放射自显影,用扫描电镜对细胞表面凝集素受体的位点进行直接观察。实验结果表明鸡胚肝凝集素对细胞的凝集作用具有相对的专一性。     

应用液闪计数法测定CHO细胞周期时间

Howard 和Pele 首先提出细胞周期的概念。Ouastler和Sherman利用~3H-TdR标记有丝分裂百分比的方法(PLM或FLM)研究了细胞周期各时相,为细胞动力学的研究提供了重要手段。迄今为至,PLM 法仍是测定细胞动力学的重要手段。但此法有其局限性,如放射自显影曝光时间较长,计算标记有丝分裂细胞的工作量大,并受人为的因素影响。本文采用液闪计数法研究CHO细胞周期时相,方法简单、准确,快速。     

从中国仓鼠细胞株诱导产生小分离细胞

将收集到的中国仓鼠细胞株A_2H的有丝分裂中期细胞悬浮在Eagle基础培养基中,采用加或不加2mM的二硫苏糖醇(DTT)两种方法,用低温(4℃)处理4—10小时,然后移至37℃中培育1—3小时,即有大量小分离细胞形成。绝大多数小分离细胞的直径在5—6μ左右,约等于正常细胞的三分之一。同位素自显影表明,约有68％的小分离细胞含有DNA。台盼蓝的排斥试验证明，这些小分离细胞的存活率达87%。扫描电镜清楚地显示出小分离细胞是由一层绒毛状突起的细胞膜所包裹。本文还报道了小分离细胞的纯化方法。     

鸽峡核大细胞部与顶盖的神经元联系

在形态学上,鸟类峡核可分为大细胞部(nucleus isthmi pas magnocellulari,Imc)和小细胞部(nucleus isthmi pars parvocellularis,Ipc)两部分。放射自显影和HRP(辣根过氧化物酶)追踪指出,顶盖与Ipc之间存在着相互对应的区域投射,但与Imc有关的神经     

由G_o期过渡到S期时温度敏感突变株tsAF-8的Pre-rRNA基因的活化

用0.5％低血清培液使tsAF-8细胞进入G_o态后,再培养于含正常量(10％)血清的培液中,分别在允许温度(33.5℃)、非允许温度(39.5℃)、放线菌素D(0.03μg/ml)(33.5℃)或丁酸钠(5mmol/L)(33.5℃)的条件下,用~3HTdR放射自显影检测G_o期tsAF-8细胞进入S期的过程,并用银染核仁组织区(NOR)的方法观察pre-rRNA基因(rDNA)的活化程度。在允许温度时G_o期细胞进入S期,pre-rRNA基因被活化。在非允许温度或低浓度放线菌素D(33.5℃)条件下,G_o期细胞不进入S期,pre-rRNA基因也不活化。5mmol/L丁酸钠(33.5℃)条件下细胞不能进入S期,而pre-rRNA基因被活化,但活化程度较低。     

猪传染性水泡病病毒在去核细胞内的复制

本实验利用CB去核技术制备了IBRS-2细胞的胞质体,研究了SVDV在胞质体内的复制与发生。运用显微自显影,单个去核细胞定位包埋及其电镜自显影以及液体闪烁计数技术等综合方法,证实SVDV可在去核的细胞内复制病毒的RNA,而且可致细胞病变,并用细胞显微操作技术直接证实胞质体内可以产生有感染性的子代病毒,从而说明SVDV可利用胞质体作为活试管进行复制,无需细胞核直接参加调控。     

神经节苷脂GM_3对人单核样白血病J6-2细胞中磷脂代谢的影响

用50μmol/L GM_3处理J6-2细胞6天,经组化与细胞学检查,证实细胞沿单核巨噬细胞途径分化。以[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱冲激(Pulse)后,将洗净的细胞进行Folch分配。取下相进行薄层层析,再做放射自显影。结果表明:GM_3的处理能促进[~(32)P]Pi或[CH_3-~(14)C]胆碱向磷脂酰胆碱的参入,而抑制向其他磷脂组分的参入。用[CH_3-~(14)C]胆碱冲激的Folch分配上相含水溶性胆碱代谢物,经TLC,结果表明CM_3的处理使[CH_3-~(14)C]胆碱向CDP-胆碱的参入减少。本研究证实,GM_3能调节J6-2细胞的磷脂代谢,其调节机制值得研究。     

平阳霉素(争光霉素A_5)对艾氏腹水癌细胞核酸代谢及其作用机制之探讨

艾氏腹水癌小鼠腹腔内注入平阳霉素1/6半致死剂量,腹水癌细胞DNA合成受到抑制。随注入药物时间之延长,DNA合成呈直线下降。但在同一剂量和时间条件下,对腹水癌细胞RNA合成率没有影响。通过放射自显影和MPV II显微分光光度计,测定了S期细胞百分数和单个S期细胞中~3H-TdR放射自显影银粒,说明DNA合成率之抑制不是由于S期细胞百分数之降低,而是由于单个S期细胞中DNA合成强度之下降。进一步用MPV II显微分光光度计对同一S期细胞中放射自显影银粒和孚尔根萤光定量测定,发现平阳霉素能引起早S期细胞积累;同时早S期细胞DNA合成抑制也较为明显。说明早S期细胞对平阳霉素较为敏感。其机制可能与早S期细胞合成之DNA富含GC组分有关。这与博莱霉素优先和富含GC组分的多聚核苷酸结合的结果是一致的。     

平阳霉素(争光霉素A_5)对艾氏腹水癌细胞核酸代谢及其作用机制之探讨

艾氏腹水癌小鼠腹腔内注入平阳霉素1/6半致死剂量,腹水癌细胞DNA合成受到抑制。随注入药物时间之延长,DNA合成呈直线下降。但在同一剂量和时间条件下,对腹水癌细胞RNA合成率没有影响。通过放射自显影和MPV Ⅱ显微分光光度计,测定了S期细胞百分数和单个S期细胞中~3H-TdR放射自显影银粒,说明DNA合成率之抑制不是由于S期细胞百分数之降低,而是由于单个S期细胞中DNA合成强度之下降。进一步用MPV Ⅱ显微分光光度计对同一S期细胞中放射自显影银粒和孚尔根萤光定量测定,发现平阳霉素能引起早S期细胞积累;同时早S期细胞DNA合成抑制也较为明显。说明早S期细胞对平阳霉素较为敏感。其机制可能与早S期细胞合成之DNA富含GC组分有关。这与博莱霉素优先和富含GC组分的多聚核苷酸结合的结果是一致的。     

微核形成与细胞周期关系的初步研究——Ⅳ.化学诱变剂诱发人淋巴细胞间期各阶段的微核形成

本实验应用具有诱变作用的抗癌药:噻地哌、长春新碱,乙双吗啉等,体内或体外处理诱发人体外周血淋巴细胞微核,通过控制细胞培养时间,放射性自显影及中期细胞阻滞等方法,定量地分析了细胞间期各阶段的微核率(MNF)。本组实验结果表明,间期各阶段均可有不同程度的微核形成,其中最多的是G_1期,其次是G_2期和G_0期。S期细胞的MNF较G_1期有极显著的下降,这提示大部分G_1期的微核细胞不能进入S期,使细胞增殖中止,这可能是抗癌药物杀伤肿瘤细胞的机制之一。     

高鲜锐度显像在显微摄影中的应用

一般细胞或生物组织的显微摄影通常都使用D-76微粒显影液来显影加工。虽然这种显影液能获得较细的颗粒,但存在酸碱缓冲性小和对溴离子较敏感的缺点,因之往往新配药液在冲洗一、二卷后,就难再获得效果一致的底片。     

下橄榄—小脑系统

下橄榄小脑系统是六十年代中期Eccles等揭示小脑皮层神经元环路以来在小脑功能研究中引人注目的一个侧面。近年来,用电镜、放射自显影和辣根过氧化酶等技术对下橄榄核的微细结构、攀缘纤维(CF)的起源和分布做了系统的研究。在电生理学方面发现并重视了攀缘纤维传入的抑制作用,对下橄榄细胞和小脑浦肯野细胞兴奋时复合峰电位形成的机制有较深入的了解,发展了一些专门或主要应用于下橄榄小脑系统研究的新技术和实验方法。     

下橄榄—小脑系统

下橄榄小脑系统是六十年代中期Eccles等揭示小脑皮层神经元环路以来在小脑功能研究中引人注目的一个侧面。近年来,用电镜、放射自显影和辣根过氧化酶等技术对下橄榄核的微细结构、攀缘纤维(CF)的起源和分布做了系统的研究。在电生理学方面发现并重视了攀缘纤维传入的抑制作用,对下橄榄细胞和小脑浦肯野细胞兴奋时复合峰电位形成的机制有较深入的了解,发展了一些专门或主要应用于下橄榄小脑系统研究的新技术和实验方法。     

核的产物及核的繁殖

木支就下列三问题论述核在细胞中的作用。 1.核是否产生核糖核酸(RNA)?RNA是不是从核转移到细胞质中?运用同位素和示踪自显影术,我们知道了核中RNA的比活力比细胞质中的高,从而     

抗孕激素Ru486和孕酮在大鼠子宫、垂体、下丘脑等器官的放射自显影定位

2月龄的Wistar大鼠,经颈静脉注射~3H—Ru486(~3H—R)或~3H—孕酮(~3H—P)后,可见自显影银粒在子宫肌层细胞核内有明显的聚集,而腔上皮和腺上皮内银粒分布相对较少。在阴道、输卵管肌层细胞核内也有聚集。垂体前叶细胞的核、浆以及下丘脑、视上核、室旁核、弓状核等核团内神经元的胞核内都有相似的银粒聚集。所有动物的隔肌内均未见自显影银粒定位。用非标记Ru486,孕酮或地塞米松竞争的结果表明,Ru486在下匠脑、垂体、子宫等水平均和孕酮竞争特异性结合部位,很可能是孕酮受体结合部位。这提示Ru486在体情况下对上述各个水平的生理机能均可能产生影响,其抗早孕和诱导月经可能是通过多个环节而起作用的。