一种改进的甲醛—琼脂糖凝胶电泳

构建ｃＤＮＡ文库,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ－ＰＣＲ等分子生物学研究,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛－琼脂糖凝胶电泳。然而,传统的甲醛－琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂［１］,本文提出一种改进的甲醛－琼脂糖凝胶电泳,不仅简化了操作,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｃＤＮＡ甲醛－琼脂糖凝胶电泳为例,对这一方法进行介绍。１ 材料与方法１．１ 总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离：取向日葵花蕾１ｇ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ［２］。利用磁珠法分离ｍＲ－…     

大鼠胆碱酯酶mRNA在卵母细胞中的表达

ＡＧＰＣ法是一种快速、简便、有效的ＲＮＡ提取方法。参照该法自新生大鼠脑组织中提取出总ＲＮＡ,进一步通过ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－纤维素亲和层析分离获得ｐｏｌｙ（Ａ）￣＋ＲＮＡ。当ｐｏｌｙ（Ａ）￣＋ＲＮＡ或总ＲＮＡ经显微注射法进入非洲爪蟾卵母细胞后,其翻译系统能够利用外源ｍＲＮＡ合成具有催化活性的胆碱酯酶。表达的胆碱酯酶大部分分泌到卵母细胞培养液中。在一定范围内,ｍＲＮＡ的注射量与胆碱酯酶的表达量成正比。所合成的胆碱酯酶活性可被毒扁豆碱和Ｓ－（２－二异丙基氨乙基）甲基硫赶膦酸乙酯（ＶＸ）抑制。     

香蕉不同组织中总RNA的有效分离

从植物组织中提取总ＲＮＡ是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提。如进行Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交分析,纯化ｍＲＮＡ以用于体外翻译或建立ｃＤＮＡ文库,ＲＴ－ＰＣＲ及差示分析等分子生物学实验,都需要高质量的总ＲＮＡ。因此,从植物组织中提取高质量的总ＲＮＡ是顺利进行上述研究的关键所在。目前常用于植物材料ＲＮＡ提取的方法有脱法［１～４］苯酚法［５,６］和ＣＴＡＢ［７,８］法等。这些方法对于提取某些植物的总ＲＮＡ是有效的,但对另外一些植物来说,却并不一定是好的方法。因为不同植物组织的细胞内外成分复杂多变,在使…     

提取航天诱变向日葵种子总RNA的一种有效方法

目的:从航天诱变向日葵种子中提取高质量的总RNA.方法:采用改进的SDS法,提取缓冲液与氯仿同时作用液氮研磨材料后,用酸酚-氯仿抽提一次,经LiCl过夜沉淀、DNase I处理、1/2体积的无水乙醇沉淀多糖,最后加入1/10体积的醋酸钠和2倍体积的无水乙醇沉淀总RNA,用琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度法测定产量与纯度,用...     

雀麦花叶病毒缺陷型RNA_（3b）的研究

采用ＰＥＧ沉淀和差速离心的方法提纯雀麦花叶病毒的Ｇ和Ｔ分离物。利用蛋白酶Ｋ和两相酚法制备雀麦花叶病毒的总ＲＮＡｓ。将Ｇ和Ｔ分离物ＲＮＡｓ进行琼脂糖凝胶电泳,结果发现Ｂｒ－ＭＶ－Ｇ除含有正常的ＲＮＡ组分外,还出现了另一新的ＲＮＡ＿（３ｂ）组分,其分子量为０．５０×１０￣６。ＲＮＡ＿（３ｂ）只出现在大麦寄主中,而在昆诺基上缺失。ＲＮＡ＿（３ｂ）仅依靠于其来源的Ｇ分离物的ＲＮＡｓ进行复制。以ＲＮＡ＿（３ｂ）为模板合成￣（３２）Ｐ－ｃＤＮＡ探针,和ＢｒＭＶ－Ｇ分离物的ＲＮＡｓ进行分子杂交试验表明：ＲＮＡ＿（３ｂ）属ＲＮＡ＿３的缺陷型组分,它依赖于ＢｒＭＶ－Ｇ－ＲＮＡ＿３的帮助才能在大麦寄主中复制。ＲＮＡ＿（３ｂ）的出现和缺失对ＢｒＭＶ的症状表现没有影响。     

改良提取水稻胚乳和拟南芥花柱中DNA和RNA的SDS法

在冷酚法的基础上,经多次实践改进,得出一种简单、快速的SDS法,可以从富含多糖的水稻胚乳和富含多酚的拟南芥花柱中同时提取总DNA和总RNA,所得DNA和RNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性,并可进一步满足PCR和RT-PCR的实验需要。     

RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨

目的:优化RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳条件。方法:对实验器材进行彻底的RNase灭活处理;在原有电泳过程的基础上,增加预电泳、缓冲液液面的处理和制胶过程中未加入溴化乙锭等优化过程。结果:优化后的电泳不仅能验证总RNA的完整性,而且能鉴定RNA的分子大小。结论:优化的RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳法操作简单、省时、快速,RNA条带清晰、定位准确、无弥散及非特异条带。     

RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨

目的：优化RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳条件。方法：对实验器材进行彻底的RNase灭活处理;在原有电泳过程的基础上,增加预电泳、缓冲液液面的处理和制胶过程中未加入溴化乙锭等优化过程。结果：优化后的电泳不仅能验证总RNA的完整性,而且能鉴定RNA的分子大小。结论：优化的RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳法操作简单、省时、快速,RNA条带清晰、定位准确、无弥散及非特异条带。     

白腐真菌总RNA提取方法的研究

为寻求一种简便有效的白腐真菌总RNA的提取方法,在实验中分别采用Trizol试剂盒法、CTAB-LiCl法、硅藻土-STE法进行操作,琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱检测提取的RNA。通过对提取的总RNA实验操作过程、浓度、纯度以及完整性等方面的比较与分析,得出硅藻土-STE法是白腐真菌总RNA提取的理想方法。     

dsRNA介导的RNA干扰

在多种生物中 ,外源或内源性的双链ＲＮＡ(ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄＲＮＡ ,ｄｓＲＮＡ)导入细胞中 ,与ｄｓＲＮＡ同源的ｍＲＮＡ则受到降解 ,因而其相应的基因受到抑制。这种转录后基因沉默 (ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ,ＰＴＧＳ)机制首先在线虫 (Ｃ .ｅｌｅｇａｎｓ)中得以证实。由于这是一种在ＲＮＡ水平的基因表达抑制 ,故也称为ＲＮＡ干扰 (ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒ ｅｎｃｅ) ,简称ＲＮＡｉ[1] 。随后发现 ,在各种生物 ,如果蝇[2 ] 、拟南芥菜[3 ] 、及小鼠[4] 等均存在ｄｓＲＮＡ介导…     

富含多糖和次生代谢产物的白桦成熟叶中总RNA的提取

分别采用CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法和缓冲液冰浴-CTAB法从转基因白桦成熟叶中提取总RNA,并对琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析进行比较。结果表明,缓冲液冰浴-CTAB法提取的总RNA纯度高、完整性好且得率高.应用此法提取的总RNA能够满足RT-PCR和Northern杂交分析要求。     

一种大量提取家蝇幼虫基因组DNA的新方法

介绍1种大量提取家蝇幼虫基因组DNA的新方法,该法由提取植物DNA的CTAB法改进而成．利用该法可在数小时内得到高质量的家蝇幼虫基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分析表明．该法所得DNA的完整性和纯度均可满足分子生物学水平的一般要求。     

浙贝母根际土壤总DNA提取和纯化方法的比较

本研究通过对6种土壤总DNA提取方法(CTAB-SDS-冻融法、玻璃珠-SDS-酚氯仿抽提法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-SDS法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-溶菌酶法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-冻融法和UltraClean试剂盒法)和4种纯化方法(改进琼脂糖凝胶电泳法、2%聚乙烯吡咯烷酮-琼脂糖凝胶电泳法、PVPP层析柱法和低熔点琼脂糖电泳法)的比较,证明利用20 mmol/L EDTA(pH 7.5)预处理土壤后,利用CTAB-SDS-冻融法提取土壤总DNA并经改进琼脂糖凝胶电泳法纯化获得的浙贝母根际土壤总DNA的得率和纯度相对较高,达44.00 μg/g±2.65 μg/g土壤,可用于后续基于16S rDNA分析基础上的土壤微生物分子生态学的分析工作.     

荧光Real-time PCR鉴定鸡胸骨总RNA质量

为了更准确地鉴定提取鸡骨总RNA的质量,试验分别用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳和荧光Real-time PCR检测评价3种不同的方法提取成年鸡胸骨总RNA的质量。结果显示,荧光Real-time PCR可更好地鉴定提取的骨总RNA的质量。用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳能粗略检测RNA的纯度和完整性,但不能反映提取过程中是否引起基因不均一的减少,所检测的纯度也不能精确反映RNA的反转录效率。     

一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速ｍＲＮＡ差异显示技术。其特点是不用 位素标记操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的ｃＤＮＡ带,便于ＤＮＡ回收和进一步重组克隆。用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子。     

一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速ｍＲＮＡ差异显示技术．其特点是不用同位素标记,操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的ｃＤＮＡ带,便于ＤＮＡ回收和进一步重组克隆．用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子．     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.     

研究基因转录的RT-PCR技术

ＤＮＡ模板序列的转录调控是基因表达多级调节过程的关键 ,细胞周期中基因转录水平的改变应激细胞发育、分化及正常生理功能的多种信号转导。疾病或其它因素也应激转录水平变化 ,从而改变各种ｍＲＮＡｓ的稳定性。因此基因的ｍＲ ＮＡ水平分析 ,在基因调控研究领域是必不可少的。ｍＲＮＡ的常规分析方法是Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｓ、ＲＮＡｄｏｔ/ｓｌｏｔｂｌｏｔ、核酸酶保护法(ｎｕｃｌｅａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ)和原位杂交 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)。而ＰＣＲ技术的应用开创了ｍＲＮＡ分析新方法[1 -3] :ＲＮ…     

鸢尾属药用植物总DNA提取方法的比较研究

以鸢尾属（Iris L．）药用植物鸢尾Iris tectorum Maxim．叶片为材料,分别采用CTAB法、高盐低pH法、SDS法和试剂盒法四种方法提取植物总DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、ISSR和RAPD四种方法对所提取的DNA样品进行检测。结果表明,用SDS—I法提取的植物总DNA纯度、浓度和完整性都很高,从经济角度考虑优于用试剂盒提取,从提取效果考虑不亚于用CTAB法和高盐低pH法提取,是比较适合鸢尾属植物总DNA提取的方法。     

酿酒酵母中的RNA解旋酶

ＲＮＡ解旋酶是一类能解开双链ＲＮＡ的酶 ,存在于所有生物体中 ,其家族成员在进化上具有保守序列。ＲＮＡ解旋酶属于分子伴侣 ,对于确保ＲＮＡ分子的正确折叠以及保持和修饰其特定的二级、三级结构必不可少。在核转录、前体ｍＲＮＡ剪接、核糖体生物发生、核质转运、翻译、ＲＮＡ降解以及结构基因表达等过程中ＲＮＡ解旋酶都发挥了一定的作用。1 .解旋酶的结构ＲＮＡ解旋酶大部分属于蛋白质超家族Ⅱ (ＳＦⅡ ) ,包含七个保守序列 (图 1 ) [1] 。除核心区域外 ,多数ＲＮＡ解旋酶具有不同的Ｎ末端和Ｃ末端部分 ,可能与底物专一性有关。目前 ,…