D—氨基酸在人体的来龙去脉：人体中D—氨基酸,D—氨基酸氧化酶,D…

本文分析近年,特别是近两年有关人体、食物中Ｄ－氨基酸、Ｄ－氨基酸氧化酶、Ｄ－天冬氨酸氧化酶研究进展,强调：１．必须研究食品中Ｄ－氨基酸水平;２．Ｄ－氨基酸氧化酶、Ｄ．天冬氨酸氧化酶作为药物治疗因Ｄ－氨基酸过量所致疾病。     

氨基酸生产和海洋生物的氨基酸资源开发

氨基酸在医药、食品、饲料等领域有着极为重要和广泛的用途,世界上氨基酸总需求量以５～１０％递增,市场竞争十分激烈。生物资源提取、化学合成、生物合成和综合法是生产氨基酸的４种技术,目前的发展趋势为生物合成和综合法,特别是将现代生物工程技术应用于氨基酸生产。另外,氨基酸生产领域另一个新的倾向是海洋生物氨基酸资源的开发和应用,尤其是海洋生物所产生的特殊氨基酸、肽及其衍生物的开发,同时,综合利用海产品加工后的废弃物来生产氨基酸也受到重视。     

三角酵母D—氨基酸氧化酶基因的克隆,测序及表达

利用跨越内含子的ＰＣＲ技术,从三角酵母（Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）变种ＦＡ１１０中扩增得到Ｄ氨基酸氧化酶基因（ｄａａｏ）,并通过ＴＡ克隆的方法将其克隆至ｐＧＥＭＴ载体。序列测定结果表明,所得ｄａａｏ基因的５′端内含子已被删除,基因总长度为１０７１ｂｐ,它与Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ的Ｄ氨基酸氧化酶同源性达９８３％,与Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ和Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｒａｃｉｌｉｓ的同源性分别是３８９％和３０８％。为提高表达水平,又将此基因转移至高表达载体ｐＥＴ２８ｂ上,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达。经ＩＰＴＧ诱导,目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的４６％,分子量约为３８ｋＤ。Ｄ氨基酸氧化酶的活力可达８０２ｕ／Ｌ。     

发酵法生产β—胡萝卜菌丝体中氨基酸含量的分析

采用日立８３５－５０型氨基酸分析仪,测定了发酵法生产的β－胡萝卜素菌丝体及提取β－胡萝卜素后剩余的菌渣中氨基酸含量,结果表明：在氨基酸总含量中,必需氨基酸含量较高;在β－胡萝卜菌丝体、菌渣中、赖氨酸含量较高,谷氨酸含量最高。     

用生物反应器生产L-氨基酸

现已有几种L-氨基酸是用生物反应器中的酶或全细胞生产的。最早采用这种技术的例子之一是日本L-天冬氨酸的生产。最近放大了由肉桂酸和氨生产L-苯丙氨酸的生物反应器法,产物效价达60克/升以上,原料转化率约为90％。     

新型组织工程支架材料—α—羟基酸与α—氨基酸共聚物的研究进展

本文综述了新型组织工程聚合物支架材料－α－羟基酸与α－氨基酸共聚物的合成途径及最新进展,并预测了这种新型材料的研究前景。     

运用氨基酸分析法和DOE法优化抗PD-1单克隆抗体生产用培养基

本研究采用氨基酸分析法结合DOE设计法优化并获得高表达抗PD-1单克隆抗体生产用基础和补料培养基。通过对市售多种基础和补料培养基进行筛选,获得细胞生长状况较优的基础培养基和抗体表达较高的补料培养基,利用氨基酸分析法检测较优基础培养基和补料培养基中氨基酸消耗情况,确定影响细胞生长和抗体表达的关键氨基酸种类,利用DOE分析软件设计分别在较优基础和补料培养基中添加不同浓度的氨基酸种类及浓度,根据细胞生长及抗体表达,优化得到抗PD-1单克隆抗体的基础和补料培养基组合。最终优化后基础培养基配方为:Hycell CHO培养基中添加1.04 mmol/L L-天冬酰胺和0.76 mmol/L L-谷氨酰胺。最终优化后补料培养基配方为:OPM CHOCD Feed1补料培养基中添加38.7 mmol/L L-组氨酸,75.0 mmol/L L-酪氨酸,64.0 mmol/L L-丝氨酸,49.2 mmol/L L-谷氨酰胺和18.7 mmol/L L-半胱氨酸。经过3 L反应器培养验证,优化后的培养基比未优化时,最大活细胞密度(PVCD)提高了62.7%,抗PD-1单克隆抗体表达量提高了71.5%,且活性无明显差异。     

用N~(15)示踪方法研究氨基酸的肥效作用

以Ｎ１５标记的氨基酸为试验材料,证明外源氨基酸分子可以被稻苗直接吸收,并进一步证明氨基酸施肥后稻苗植株健壮,干重增加,是氨基酸分子进入植物体内的结果,这与我们以往所作的氨基酸植物肥效试验结果完全吻合。