谷氨酸促进大鼠海马神经元的内钙升高

谷氨酸能影响大鼠海马神经元胞内钙信号的变化,进而影响海马神经元神经冲动的发放和学习记忆过程。运用荧光测钙技术实时监测了大鼠海马神经元内钙信号的动态变化,同时分析了谷氨酸对其胞内钙信号的影响。试验表明：谷氨酸能够显著提高胞内游离钙离子的浓度;细胞外钙离子的存在、谷氨酸刺激时间及刺激频率的增加都能引起胞内钙信号不同程度的升高;但谷氨酸的过度刺激会引起钙离子浓度的超负荷,从而导致神经元结构和功能的损坏。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响

目的：观察银杏内酯B（ginkgolide B,GB）在不同给药模式下对谷氨酸所致海马神经元损伤的影响。方法：采用Co2超临界萃取的方法制备GB,建立新生Wistar大鼠原代培养的海马神经元谷氨酸毒性模型,采用台盼蓝染色、程序性细胞死亡检测技术及乳酸脱氢酶测定的方法,观察预处理与急救两种给药模型下不同剂量GB的神经保护作用,并与MK-801急性给药相比较。结果：GB在两种给药模式下均能不同程度地提高细胞存活率,降低凋亡率,减少LDH漏出量,且在一定范围内保护作用呈剂量依赖的方式。其中预处理的效果明显优于急救给药处理。但均弱于MK-801组。结论：GB对谷氨酸细胞毒性损伤有保护作用,预防性用药效果更佳。GB可能不仅仅通过拮抗血小板活化因子（PAF）受体等下游事件实现其神经保护作用。如果我们重视其预处理给药的显著效果。将其用于高危人群的预防干预可能有更大价值。     

谷氨酸对原代培养海马神经元的兴奋特性

目的:探索谷氨酸对培养大鼠海马神经元的兴奋特性.方法:分离及培养1日龄SD大鼠海马神经元,第9～15 d用膜片钳检测不同浓度谷氨酸对神经元兴奋特性,包括细胞膜电位、去极化/动作电位的影响.结果:谷氨酸降低海马神经元静息膜电位,诱发去极化/动作电位,高浓度谷氨酸处理组神经元的静息膜电位比低浓度组降低显著;100μmol/L谷氨酸长时间处理组的神经细胞膜电位显著低于短时间处理组.结论:谷氨酸对海马神经元兴奋性有浓度和时间依赖性.     

5—羟色胺抑制谷氨酸对海马神经元的毒性作用

为探讨5-羟色胺（5-HT）对过量谷氨酸（glutamate,Glu)神经毒性的影响。观察了5-HT存在时,过量Glu对海马细胞存活率、海马脑片CA1区群锋电位（population spike,PS)及神经细胞膜Ga^2 电流的影响。结果发现：5-HT可明显提高过量Glu作用下海马神经细胞的存活率,减缓Glu对海马脑片CA1区PS的降低作用;在细胞膜上,5-HT可明显减弱Glu诱导的Ca^2 内向电流,推测,一定浓度的5-HT具有抑制过量Glu神经毒性的作用。在细胞膜上5-HT可明显减弱Glu诱导的Ca^2 内向电流,推测,一定浓度的5-HT具有抑制过量Glu神经毒性的作用,其机制可能在于5-HT与细胞膜上特定的受体结合,抑制了Glu诱导的Ca^2 内流。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸对海马神经元的损伤并抑制胞内钙升高

对原代培养７～９ｄ的海马神经元给予谷氨酸处理,２４ｈ后,神经元的存活率降低。预先给予垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ）能显著减少谷氨酸引起的海马神经元死亡。谷氨酸呈剂量依赖性增加海马神经元细胞内钙离子含量,ＰＡＣＡＰ能抑制谷氨酸引起的海马神经元细胞内钙离子浓度的升高,特异性ＰＡＣＡＰ Ⅰ型受体拮抗剂ＰＡＣＡＰ ６－３８能完全阻断ＰＡＣＡＰ减轻谷氨酸所致海马神经元损伤及降低谷氨酸所致神经元细胞内钙     

褪黑素对大鼠海马神经元谷氨酸所致毒性的拮抗作用

在大鼠海马脑片上电刺激Ｓｃｈａｆｆｅｒ 侧支纤维, 胞外记录ＣＡ１ 区锥体细胞层诱发群体锋电位（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｐｉｋｅ,ＰＳ） , 观察灌流谷氨酸（Ｇｌｕ） 和褪黑素（ＭＥＬ） 对ＰＳ的影响。结果显示：５－０ ｍｍｏｌ／Ｌ浓度的Ｇｌｕ 可使ＰＳ值下降至对照值的４－１ ％ ; ＭＥＬ（０－４ 、０－５ 和０－６ μｍｏｌ／Ｌ） 与５－０ ｍｍｏｌ／ＬＧｌｕ 混合给药,ＰＳ值分别变化为对照值的１４－７ ％ 、１０５－２％ 、２４－３ ％ ; ＭＥＬ（０－５ μｍｏｌ／Ｌ） 、Ｇｌｕ （５－０ ｍｍｏｌ／Ｌ） , 与赛庚啶（ＣＤＰ,０－５ μｍｏｌ／Ｌ） 混合给药,ＰＳ值下降至０ 。上述结果提示,５－０ ｍｍｏｌ／Ｌ浓度的Ｇｌｕ 有神经毒性作用, 但可为ＭＥＬ拮抗, 这可能由５ＨＴ受体所介导。     

灯盏花素含药血清对谷氨酸致原代海马神经元损伤的影响

目的:从细胞水平研究注射用灯盏花素对谷氨酸致大鼠原代海马神经元损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用中药血清药理学方法,制备含药血清;原代培养大鼠乳鼠大脑海马神经元并经鉴定后,以谷氨酸复制损伤模型,以5%含药血清干预,在透射电镜下及经碘化丙啶和Hoechst33342双染后荧光显微镜下观察海马凋亡神经元的形态学变化,并进行检测:MTT法测定细胞存活率,生化法检测LDH漏出率、丙二醛(MDA)含量、细胞释放的NO量、细胞内tNOS活性和iNOS活性。结果:灯盏花素高、低剂量组均能明显增加海马神经元存活率,而LDH漏出率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮释放、总一氧化氮合酶活性和诱导型一氧化氮合酶活性(p<0.05,p<0.01)明显降低。结论:灯盏花素对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元损伤具有保护作用,其作用机制可能与其能改善能量代谢、稳定细胞膜、抗脂质过氧化、降低一氧化氮合酶的活性、减少一氧化氮释放有关。     

镁离子对谷氨酸诱发的海马神经元损伤的保护作用

目的 :探讨镁离子 (Mg2 )在 0 .1mmol/L谷氨酸诱发的海马神经元损伤中的作用。方法 :将神经元从新生SD大鼠海马中分离后培养 6～ 9d ,即随机分成三组 :A .单纯培养基 ;B .培养基 谷氨酸 ;C .培养基 Mg2 ,30min后再加入谷氨酸。结果 :①B组海马神经元存活率与A组相比显著地呈剂量依赖性降低。②与B组对照 ,C组加用低浓度的Mg2 可提高海马神经元的存活率。结论 :低浓度的Mg2 能保护谷氨酸诱发损伤的海马神经元     

琥珀酸对大鼠海马CAI区神经元电压依赖性钙电流的影响

目的:观察不同浓度的琥珀酸对大鼠海马CAI区神经元电压依赖性钙通道(voltage-dependent calcium channels,VDCC)流的作用,初步探讨琥珀酸对神经元保护的电生理学基础.方法:采用传统全细胞膜片钳技术和制霉菌素(nystatin)穿孔膜片钳技术观察琥珀酸对海马CAI区神经元VDCC电流的影响.结果:不同浓度的琉角酸(10-6、10-5、10-4、10-3、10-2和10-1mol·L-1)在海马CAI区对低电压激活(low-voltage activated,LVA)钙通道电流未见任何影响,而对高电压激活(high-voltage activated,HVA)钙通道电流的抑制呈浓度依赖性.对照组HVA钙电流为580.051±7.32pA,分别给予10-6、10-5、10-4、10-3、10-2和10-1 mol·L-1的琥珀酸后HVA钙电流依次为563.74±16.65,517.99±15.24,444.66±13.26,405.32±19.11,269.03±9.96和86.41±3.25pA,同对照组相比差异有统计学意义(n=8,P<0.01).结论:琥珀酸能浓度依赖性地抑制HVA钙电流,而对LVA钙电流无影响.由此推测琥珀酸可能通过抑制HVA钙电流减少Ca2+内流而影响海马CAI区神经元的兴奋性,从而抑制癫痫的形成,其脑保护作用可能与此有关.     

褐黑素对大鼠海马神经元谷氨酸所致毒性的拮抗作用

在大鼠海马脑片上电刺激Ｓｃｈａｆｆｅｒ侧支纤维,胞外记录ＣＡ１区锥体细胞层诱发群体锋电位,观察灌流谷氨酸和褪黑素对ＰＳ的影响。结果显示：５．０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度的Ｇｌｕ可使ＰＳ值下降至对照值的４．１％;ＭＥ（０．４、０．５和０．６μｍｏｌ／Ｌ）一５．０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度的Ｇｌｕ可使ＰＳ值下降至对照值的１４．７％、１０５．２％、２４．３％;ＭＥＬ、Ｇｌｕ,与赛庚啶混合给药,ＰＳ值下降至０。上述结果提示。     

琥珀酸对大鼠海马CA1区神经元电压依赖性钙电流的影响

目的：观察不同浓度的琥珀酸对大鼠海马CA1区神经元电压依赖性钙通道（voltage—dependent calcium channels,VDCC）电流的作用,初步探讨琥珀酸对神经元保护的电生理学基础。方法：采用传统全细胞膜片钳技术和制霉菌素（nystatin）穿孔膜片钳技术观察琥珀酸对海马CA1区神经元VDCC电流的影响。结果：不同浓度的琥珀酸（10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2和10^-1mol·L^-1）在海马CA1区对低电压激活（low—voltage activated,LVA）钙通道电流未见任何影响,而对高电压激活（high—voltage activated,HVA）钙通道电流的抑制呈浓度依赖性。对照组HVA钙电流为580．05±17．32pA,分别给予10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2和10^-1mol·L^-1。的琥珀酸后,HVA钙电流依次为563．74±16．65,517．99±15．24,444．66±13．26,405．32±19．11,269．03±9．96和86．41±3．25pA,同对照组相比差异有统计学意义（n=8,P〈0．01）。结论：琥珀酸能浓度依赖性地抑制HVA钙电流,而对LVA钙电流无影响。由此推测琥珀酸可能通过抑制HVA钙电流减少Ca^2＋内流而影响海马CA1区神经元的兴奋性,从而抑制癫痫的形成,其脑保护作用可能与此有关。     

谷氨酸对大鼠海马CA1区神经元的短暂性外向K+电流的影响

为了在离子通道水平探讨谷氨酸对急性分离海马ＣＡ１区神经元的短暂外向Ｋ＋电流的影响。用７～１０ｄ大鼠,以链霉蛋白酶Ｅ酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元;利用全细胞膜片箝技术,观察了谷氨酸对海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果观察到谷氨酸对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用,且呈明显浓度依赖性、时间依赖性和部分电压依赖性。上述结果表明,谷氨酸对Ｋ＋通道的影响在中枢神经系统中具有重要作用。     

脑益康药物血清对谷氨酸诱导海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨脑益康药物血清对谷氨酸(Glu)诱导的海马神经元损伤的保护作用。方法:大鼠海马神经元培养后,采用形态学观察、MTT法及DAPI染色法检测脑益康药物血清对Glu损伤细胞活力的影响,采用RT-PCR和免疫组化方法检测脑益康药物血清对Glu损伤细胞PTEN表达的影响。结果:脑益康药物血清可明显提高Glu损伤的海马神经元的细胞活力,减少PTEN的表达。结论:脑益康药物血清对Glu诱导的海马神经元损伤有保护作用,其机制可能与减少PTEN表达,抑制神经元凋亡有关。     

地塞米松对大白鼠海马兴奋性神经元和抑制性神经元的影响

为了探讨糖皮质激素对海马兴奋性神经元和抑制性神经元的作用,本实验将地塞米松注入大白鼠侧脑室,２ｈ 后经Ｎｉｓｓｌ染色法、免疫组织化学方法和细胞计数法观察了海马谷氨酸免疫反应性（ＧｌｕＩＲ）神经元和γ氨基丁酸免疫反应性（ＧＡＢＡＩＲ）神经元的变化。结果显示：（１）ＣＡ１、ＣＡ３ 和ＳＧ区的ＧｌｕＩＲ神经元明显增多,特别是ＣＡ１ 区。经细胞计数统计分析表明,与对照组相比ＣＡ１ 有极显著性差异（Ｐ＜ ０００１）,ＣＡ３区有显著性差异（００１＜ Ｐ＜ ００５）,ＳＧ处无明显差异（Ｐ＞ ００５）。（２）与对照组相比,ＧＡＢＡＩＲ神经元无明显变化。结果表明,糖皮质激素有增加海马谷氨酸能神经元的作用。尽管γ氨基丁酸能神经元无明显变化,并不表明糖皮质激素对其无影响     

马桑内酯对培养的海马神经元γ-氨基丁酸和谷氨酸的影响——免疫细胞化学研究

用免疫细胞化学方法,观察研究了马桑内酯(CL)对培养的海马神经元内γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)神经元的影响.结果表明:CL作用后,GABA免疫反应阳性神经元数目减少,反应强度减弱;Glu免疫反应阳性神经元数目变化不明显,但反应增强.推测:CL可能引起海马神经元兴奋性增高是使动物模型致痫的基础,其机理可能与阻断GABA的合成途径有关.     

谷氨酰胺对大鼠海马脑片谷氨酸递质释放的影响

在以前的工作中我们观察到 ,饲料中补充谷氨酰胺 (Ｇｌｎ)可使大鼠脑组织中Ｇｌｎ和谷氨酸 (Ｇｌｕ)含量升高 ,并引起一系列代谢和功能的改变。当脑组织处于丰富的Ｇｌｎ环境中时 ,Ｇｌｕ等兴奋性氨基酸的释放是否会受到影响呢 ?由于条件所限 ,在整体无法观察这一过程 ,但离体脑片为我们提供了一个较为理想的研究方法。本实验通过对离体海马脑片进行孵育 ,观察Ｇｌｎ对Ｇｌｕ递质释放的影响 ,从而进一步探讨Ｇｌｎ的中枢作用机制。1　材料与方法(1)人工脑脊液 (ＡＣＳＦ)的配制　所用标准ＡＣＳＦ的配方为 (ｍｍｏｌ/Ｌ) :ＮａＣｌ 12 4,Ｋ…     

一氧化氮对谷氨酸诱发的大鼠海马脑片CA1区神经元活动的抑制

用细胞外记录单位放电技术,在大鼠海马脑片上观察了Ｌ－精氨酸（Ｌ－ａｒｇ）、Ｎ－硝基Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）及ＳＩＮ－１对谷氨酸（ｇｌｕｔａｍａｔｅ,Ｇｌｕ）诱导的ＣＡ１区神经元放电的影响。旨在了解Ｌ－精氨酸：ＮＯ通路在谷氨酸诱发的海马放电中的作用及其可能的机制。结果如下：（１）用ＧｌＵ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）灌流海马脑片１ｍｉｎ,１２个放电单位放电频率明显增加,表现为癫痫样放电;（２）海马脑片２ｍｉ     

罗格列酮对海马神经元树突发育的影响

罗格列酮(rosiglitazone,Rosig.)是噻唑烷二酮类(thiazolidinediones,TZDs)过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)的激动剂,近年来,临床研究发现其具有神经保护作用,但对其作用机制目前仍没有完全研究清楚．利用活细胞成像的方法,观察罗格列酮对大鼠海马神经元树突丝和树突树发育的影响及其机制．结果显示,罗格列酮浓度依赖的增高神经元树突丝密度,对树突丝长度、运动速度并没有影响．此外,罗格列酮也不影响树突树的总分支、总长度以及各级分支的数目和长度．PPARγ 特异性拮抗剂GW9662完全阻断了罗格列酮介导的树突丝密度增高．结果表明罗格列酮可能通过PPARγ途径影响神经元的早期发育,这可能是罗格列酮发挥神经保护作用的潜在机制．     

接种密度对大鼠海马神经元产出量的影响

目的:观察不同接种密度对海马神经元细胞数量、形态和神经网络连接的影响,以获得成熟的海马神经元。方法:利用机械分离和胰酶消化的方法获得海马神经元,将所得神经元细胞接种于1×104/cm2、2×104/cm2、4×104/cm2、8×104/cm2,16×104/cm2等5个不同的密度组中,在倒置显微镜镜下观察神经元细胞生长状态,培养5~7 d时行微管相关蛋白2免疫荧光染色鉴定。结果:海马神经元细胞培养7 d后,倒置显微镜下可见在4×104/cm2、8×104/cm2的接种密度下成熟神经元的数量相较其他组差异明显,并且神经元形态典型,建立了丰富的网络连接。结论:适宜的接种密度能提高神经元的成熟数量,为神经元网络的形成和进一步的实验奠定了基础。