盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿（Sesuvium portulacastrum）的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明： 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS＋2.0mg·L^–12, 4-D ＋ 0.5 mg·L^–16-BA ＋ 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS ＋ 1.0 mg·L^–1 2, 4-D ＋ 0.2 mg·L^–1 6-BA ＋ 3% sucrose;生根最适培养基为MS ＋ 3%sucrose ＋ 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

红菜苔子叶离体培养与植株再生

IhVitroCotyledonCultureandPlantRegenerationofBrassicacampestrisLIHan－Xia,YEZhi-Biao,LINGHut（DepartmentofIlorticulture,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070）1植物名称红菜苔(Brassicacampestris)2材料类别无菌苗子叶。3培养条件基本培养基为MS。（1）无菌苗培养基为1／2MS;（2）芽分化培养基是MS＋BA2mg／L（单位下同）4NAAI;（3）生极培养基是MS＋IAAo5;培养温度25C,每天光照14h,光照度1800IX。4生长与分化情况于超净台上将种子在含O．l％SDS的0．1％HgCI,溶液中表面灭菌10min,再以无…     

盐生植物海马齿耐盐的生理特性

以盐生植物海马齿为研究材料,分别用淡水、1/4海水、1/2海水、全海水浇灌15 d和30 d,研究盐生植物耐盐的生理特性和机理。海马齿植物在低于1/2的海水浇灌时,植物生长旺盛,主要表现为叶片增大和变厚,地上部分生物量增加;而全海水抑制了植物的生长。在盐胁迫下,海马齿植物中Na+的含量叶中最高,茎中含量次之,根中含量最低。长时间盐胁迫时,海马齿植物根、茎、叶中的相对含水量与淡水浇灌相比,变化不大,叶中略有增加;而脯氨酸含量显著增加,且可溶性糖的含量也比淡水浇灌的高。由此推测:海马齿植物主要以有机小分子作为渗透调节物质来维持细胞渗透压,在其耐盐中起着重要的作用。土壤中Na+的毒害,并没有减少土壤中可被植物利用的可交换K+,反而使其增加,说明海马齿植物根部对Na+的吸收能力和Na+/K+交换能力非常强。海马齿植物耐盐性强,还表现为能阻止盐胁迫对植物细胞原生质膜的氧化损伤,不破坏植物叶片内叶绿素的合成,能基本维持植物茎、叶中K+和根、茎中Mg2+的相对稳定。     

提高榨菜离体培养植株再生频率

采用榨菜“浙桐1号”品种为材料,以MS为基本培养基,通过对不同植物生长调节剂的组合和不同外植体等主要因素的筛选,大幅度提高了榨菜离体培养植株再生频率。结果表明,2mg／L6．BA 0．2mg／L2,4-D的组合较为适宜,其不定芽再生频率可达50％,且外植体以下胚轴为好：而CPPU和2,4-D的适宜组合为1．5mg／L 0．2mg／L,其不定芽再生频率高达66．67％,最适外植体为带柄子叶。同时,研究结果显示,添加0．25～1mg／L的GA,对榨菜已分化的不定芽的伸长有抑制作用;子叶柄和下胚轴外植体的分化具有极性现象。     

提高狗蔷薇离体培养植株再生频率

以狗蔷薇（Rosa canina Inermis）为材料,以MS为基本培养基,通过对不同植物生长调节剂的组合,大幅度提高了狗蔷薇离体培养植株再生频率。结果表明,2．0mg／L 6-BA＋0．3mg／L 2,4-D的组合较为适宜,其不定芽再生率为87％,增殖率为3．0;而CPPU和2,4-D的适宜组合为1．5mg／L＋0．3mg／L,其不定芽再生率高达93％,增殖率为5．0。同时,研究结果显示,以MS＋40g／L蔗糖＋6．0g／L琼脂粉＋3．5mg／L AgNO3＋1．5mg／L CPPU＋0．1mg／L 2,4-D＋0．05mg／L GA3作增殖培养基效果最好,不定芽诱导率为89％,增殖率为5．5;利于生根的培养基为1／4MS＋20g／L蔗糖＋3．5g／L琼脂＋0．3％活性碳＋0．1mg／L IBA＋0．1mg／L NAA,生根率为91％。     

提高狗蔷薇离体培养植株再生频率*

以狗蔷薇( Rosa canina Inermis) 为材料, 以MS 为基本培养基, 通过对不同植物生长调节剂的组合,
大幅度提高了狗蔷薇离体培养植株再生频率。结果表明, 210 mgPL 6-BA+ 01 3 mgPL 2, 4-D 的组合较为适宜,
其不定芽再生率为87%, 增殖率为310; 而CPPU 和2, 4-D 的适宜组合为115 mgPL+ 013 mgPL, 其不定芽再
生率高达93%, 增殖率为510。同时, 研究结果显示, 以MS+ 40 gPL 蔗糖+ 610 gPL 琼脂粉+ 31 5 mgPL
AgNO3 + 115 mgPL CPPU+ 01 1 mgPL 2, 4-D+ 0105 mgPL GA3 作增殖培养基效果最好, 不定芽诱导率为89%,
增殖率为51 5; 利于生根的培养基为1P4MS+ 20 gPL 蔗糖+ 315 gPL 琼脂+ 013%活性碳+ 011 mgPL IBA+ 011
mgPL NAA, 生根率为91%。     

仙客来的离体无性试管繁殖研究

利用引种仙客来的叶片、叶柄、球茎等为外植体进行组织培养与再生植株 ,筛选最适诱导和继代增殖培养基为MS +BA 2 (mg/l,下同 ) +KT 0 .2 +2 ,4 -D 0 .5。其中叶片的诱导率和繁殖系数较高 ,叶柄次之 ;生根较难 ;球茎因常内带菌而造成培养困难     

影响大白菜高效离体培养再生的因素

大白菜的4日龄子叶和6日龄下胚轴外植体在MS 4～6 mg*L-1 6-BA 0.5 mg*L-1 NAA 5～10 mg*L-1 AgNO3培养基上3～4周后分化出不定芽,带柄子叶和子叶圆片最高再生频率均可达到80%～90%,下胚轴再生频率为40%～55%,在1/2MS 0.2 mg*L-1 IBA培养基上100%生根,据此建立了大白菜离体培养再生系统.     

一种兼具研究与应用开发价值的盐生植物——海马齿

海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)是一种生长在热带和亚热带滨海地区的多年生兼性草本盐生植物。综述了海马齿在耐干旱、高盐及重金属离子机理等方面的研究进展,探讨了其潜在的开发价值及可能的用途。     

盐胁迫下海马齿叶片结构变化

用石蜡切片法制片、光学显微镜观察了海马齿植物营养器官--叶片的盐适应结构变化,以明确盐生植物对盐渍生境适应的叶片结构变化特征,为盐生植物的耐盐机理研究提供依据.结果表明:(1)海马齿植物叶片表现出许多适应干旱和盐渍环境的特点,其基本特征为:叶片肉质化,为典型的等面叶;栅栏组织发达,且含有大量叶绿体;叶表皮气孔微下陷,叶表皮细胞外壁的角质层较薄,表皮细胞大小不等,外切向壁外凸,参差不齐,有些表皮细胞特化为泡状细胞,其数量与盐胁迫的浓度呈正相关.(2)叶的海绵组织中含有大量的薄壁细胞,幼叶海绵组织的薄壁细胞在0.5%～2.5% NaCl胁迫下均变大,且数量也增加;而老叶海绵组织的薄壁细胞只有在低浓度(0.5% NaCl)的盐胁迫下变大,而在高浓度下其薄壁细胞反而变小或成不规则形状.(3)盐晶广泛分布在海马齿的叶肉组织细胞内,且其数量随着盐胁迫浓度增加而增加.     

NaCl胁迫下海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)植株内游离脯氨酸的合成积累途径

以海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)为材料,测定了在6个NaCl胁迫水平上(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mol· L-1)的植株内游离脯氨酸的含量及其δ-OAT、PSCS、POD、SOD等酶的活性.结果表明:在NaCl胁迫下,海马齿植株内游离脯氨酸积累量比CK显著地增多了14.5％～33.5％,δ-OAT和P5CS活性分别比对照(CK)增强3.1％～10.1％和26.7％ ～46.1％,因此,在NaCl胁迫下海马齿植株内游离脯氨酸合成积累的两个途径均被启动和发生合成积累作用,并表现出以Glu→Pro途径为主,Orn→Pro途径为辅;在5个NaCl胁迫水平上,海马齿植株内游离脯氨酸有显著的积累效应,在0.6 mol·L-1处理水平时达到积累量的高峰值.同时,δ-OAT、P5CS、POD、SOD等酶的活性呈现出与游离脯氨酸积累量有大致相同的变化趋势.     

Cloning of Salt Tolerance-Related cDNAs from the Mangrove Plant Sesuvium portulacastrum L.

In an attempt to isolate and identify the target genes relevant to salt tolerance in a mangrove plant （Sesuvium portulacastrum L.）, a subtracted cDNA library was constructed via suppressive subtractive hybridization （SSH）, in which the poly（A）＋RNA isolated from salt-tolerant S. portulacastrum leaves was used as a tester, whereas the driver was poly（A）＋RNA, derived from salt-sensitive S. portulacastrum leaves. Screening of this subtracted cDNA library revealed five clones, of which the expression levels in the salt-tolerant plant were markedly higher than those observed in the salt-sensitive plant, indicating that these candidate clones may be involved in salt-tolerance pathways. Among the clones isolated, P66, P175, and P233 are novel because no significant similarity was obtained upon alignment with the GenBank database. Clone P89 demonstrated high homology with NADPH of Arabidopsis thaliana, whereas clone P152 was highly homologous with the gene encoding late embryogenesis abundant （LEA） protein of A. thaliana. The full-length gene of clone P152, with a predicated 344 amino acid residues, was shown to bear LEA-2 domains, a signature motif for proteins that have been enriched under salty and drought conditions. It is thus implied that clone P152 would be a salt-tolerance gene of S. portulacastrum. In addition, we have also developed a strategy for the extraction of total RNA from mangrove plants.     

盐生植物海马齿盐胁迫全长cDNA文库的构建与分析

为了研究盐生植物耐盐基因表达调控,本实验以海水浇灌的海马齿植株为供试材料,构建了盐胁迫下的全长cDNA文库。构建方法如下:采用改良的CTAB法提取总RNA,SMART法反转录合成cDNA,LD-PCR方法合成双链cDNA。LD-PCR产物经蛋白酶K消化和SfiⅠ酶切后,经CHROMA SPIN+TE-1000分离柱子除去小片段DNA后,回收0.5kb以上的片段,按照适当的比例连接λTripIEX2载体。连接产物利用MaxPlaxTMLambda Packaging Extracts进行体外包装,得到海马齿初级cDNA文库。初始文库的独立克隆数为2.4×106pfu,初级文库滴度大于4.80×106pfu/mL,重组率为93.75%,插入片段为0.5～5kb,扩增文库的滴度为1.21×109pfu/mL,所得文库质量较高。本研究表明该cDNA文库适合于盐生植物海马齿相关基因的克隆和分析。     

盐生肉质化植物海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)中总RNA提取方法的优化

以海马齿为材料,分别用CrAB法、SDS法、Trizol方法以及改进的CTAB法提取其总RNA,并比较了各RNA的产率、纯度和完整性等.结果表明,改进的CrAB法对海马齿总RNA的提取有较好的效果.所得总RNA的28S、18S和5S条带清晰,A260/A280比值为2.0,A260/A230比值为2.08,RNA产量可达56μg·g-1(FW).经RT-PCR获得了特异条带,说明利用改良的CTAB法从海马齿中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

Cadmium effects on growth and mineral nutrition of two halophytes: Sesuvium portulacastrum and Mesembryanthemum crystallinum

Growth, cadmium accumulation and potassium and calcium status were studied in two halophytes from Aizoaceae family: Sesuvium portulacastrum and Mesembryanthemum crystallinum. After multiplication, the seedlings were cultivated on nutrient solution supplemented with NaCl (100mM) and CdCl2 (0, 50, 100, 200 and 300 microM). After 1 month of treatment, plants were harvested and the dry weight, as well as the Cd, K and Ca concentrations in tissues were determined. Results showed that S. portulacastrum, a perennial halophyte with slow growth, is significantly more tolerant to Cd than M. crystallinum, an annual plant. Cd severely inhibited Mesembryanthemum growth even at the lowest Cd concentration in culture medium (50 microM), and did not modify significantly that of Sesuvium. For both halophytes, Cd accumulation was significantly higher in the roots than in the shoots. However, Cd concentration reached 350-700 microg g(-1) DM in the shoots, values characteristic of Cd hyperaccumulator plants. The addition of Cd in the culture medium led to a disturbance of Ca and especially K nutrition, suggesting the possibility to improve plant growth and Cd phytoextraction of both halophytes by increasing nutrient availability in the culture medium.