考马斯亮蓝—银染色法——一种更灵敏的凝胶蛋白质染色法

我们曾报道一种重复性好而灵敏的电泳凝胶蛋白质染色法。其后发现银染色法虽然灵敏,但有一定的选择性,某些蛋白不易被银染色着色。若将考马斯亮蓝染色与银染色相结合,则可弥补彼此弱点,而且可提高灵敏度,是一种较为理想的凝胶蛋白质染色法。一、材料与方法(一)试剂丙烯酰胺、双丙烯酰胺、SDS 为国产品,均重结晶后使用;考马斯亮蓝 G—250及戊二醛(Fluka 产品);硝酸银 GR 级(西安化学试剂厂产品);Ampholine(LKB 产品);尿素     

改良革兰染色法在显示石蜡切片真菌中的应用

目的建立真菌的病理切片改良革兰染色法。方法选取确诊真菌感染的组织蜡块,切若干空白片,通过苏木素-伊红染色（HE）、高碘酸-无色品红染色（PAS）、六胺银染色（GMS）、改良革兰染色后,比较改良革兰染色法的染色效果。结果改良革兰染色法的染色效果好,该法具有易操作、染色效果稳定等优点。结论改良革兰染色法能够清晰地显示出组织切片中的真菌,并且染色效果稳定,在检测组织中的真菌时可发挥重要的辅助诊断价值,具有广泛的应用前景。     

凝胶中痕量蛋白质和核酸的银染色法

高灵敏度的蛋白质银染色法最初是由Switzer和Merril于1979年建立的,其后Oakley、入江伸吉等人加以改良和简化,使检测的灵敏度提高到ng水平,可与放射自显影媲美。后来Somerville和Wang将该法扩大应用于聚丙烯酰胺凝胶中DNA和RNA的染色,山崎健一等又将该法推广到琼脂糖凝胶中DNA和RNA的染色。银染色法的突出优点是灵敏度高,用于蛋白质染色,比考马斯亮蓝染色感敏约50—100倍;用于RNA染色,比亚甲蓝染色敏感100—1000倍;用于DNA染色,比溴化乙锭染色敏感10—20倍。现将该法的要点和笔者的经验介绍如下。     

蛋白电泳的高灵敏度银染法

随着蛋白质凝胶电泳和等电聚焦电泳分离技术的发展,在考马斯兰呈带染色技术的基础上,近年来又出现了超灵敏度的银染色法。Switzer等人将银染色法和考马斯兰染色对比,前者比后灵敏100倍,与同位素放射自显影相媲美;同时银染法还具有自显影所不具备的优点,简便快速,可监测出迅速变化的细胞体系中瞬时出现的各种蛋白质组分。但Switzer法重现性较差,     

银染色法——检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质和核酸的一种快速方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分析蛋白质和核酸样品的有力工具,在分子生物学及有关学科的基础和应用研究中都获得了越来越广泛的应用。1979年以来,Switzer及其他作者陆续报道了检测PAGE中蛋白质和核酸区带的新方法——银染色法,使检测的灵     

蛋白质工程与生化制药

蛋白质类生化药物,如L-天门冬酰胺酶、激肽释放酶、尿激酶、细胞色素C、胰岛素等,在临床应用上具有针对性强、毒副作用小、疗效好、容易为人体吸收和代谢等特点;但它们往往稳定性差易变性,而失去生物活性。异体蛋白具有抗原性而引起过敏反应等不足,因此人们一直希望能得到比天然蛋白质性能更为优良的蛋白质类生化药物,以便更好地为人类健康服务。 获得更为良好的蛋白质有以下四种方法:1.随机的基因突变、诱变种的筛选来获得新的蛋白质。但是,这种方法受到许多限制,特别是当要求改变蛋白质分子中某一特定的残基或区域是难以控制的;2.用化学修饰方法改良蛋白质的某些性能,这种方法已经取得了不少可喜的成果,但这种方法还是有很大局限性的,往往不易按人们的意愿来     

适用于生菜叶片蛋白质双向电泳方法的建立及初步应用

以生菜(Lactuca sativa)叶片为研究材料,参考拟南芥和水稻的双向电泳方法,分析了等点聚焦时间和染色方法等影响双向电泳的关键因素,建立适合生菜叶片总蛋白质分离的双向电泳方法:采用三氯乙酸-丙酮沉淀法进行总蛋白质提取,用24cm固相pH梯度等电聚焦8000V×8h结合12%的SDS-PAGE进行双向电泳分离,银染法和考马斯亮蓝染色法染色都获得了较好的结果.应用Image-Master-Elite软件对考马斯亮蓝染色法染色的图谱进行分析表明:每张凝胶上都检测到超过1000个的蛋白质,不同凝胶之间蛋白质的匹配律达到98%,具有较高的分辨率和重复性.初步分析了生菜叶片蛋白质的等电点、分子量的分布情况,发现生菜叶片蛋白质的等电点以5.0～5.5之间最多而分子量主要集中在20～60kD之间.     

湛江隐藻(Cryptomonas zhanjiangis Hu et Li)核形体的细胞化学研究

隐藻类的核形体,是存在于其质体周腔内的一个特殊细胞器。除DNA和RNA外,核形体是否含有碱性蛋白,有无核仁或核仁结构成份,以及其功能如何,国内外迄今未见报道。我们用4-6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)荧光染色法、Uranyl acetate-EDTA-Lead染色法、碳酸氨银染色法(AS)和特异性显示核仁纤维区酸性蛋白的Ag-NOR银染法,分别在光镜和电镜下对湛江隐藻(Cryptomonas zhanjianagis Hu et Li)进行了核形体细胞化学的研究。除证实核形体中DNA、RNA和极少量碱性蛋白存在外,还首次证实了核形体中类似于核仁纤维区的酸性蛋白的存在。我们认为,隐藻的核形体,作为一个恒定的细胞结构和退化的细胞核残迹,在漫长的演化过程中可能较多地保留了核仁部分而较少地保留了其核质部分。其功能可能与隐藻色素复合体中某些蛋白质的合成有关。     

用微波技术改进的PAM染色

ＰＡＭ染色法是一种显示肾小球基底膜的六胺银染色与Ｍａｓｓｏｎ三色法结合起来应用的复合染色法,它可在同一切片上显示多种组织成分,是肾穿活检中必不可少的方法。但它步骤多,耗时长,严重影响制片速度,为此,我们用微波技术对ＰＡＭ染色法进行改进（简称为ＭＷ－Ｐ...     

用于检测病毒多肽的一种灵敏快速的染色法

本文报道了铬银染色法用于PAGE分析Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-I)结构多肽的方法,并与常规法考马斯亮蓝R250染色进行了比较。前者检出45条多肽带,后者仅能检出28条。这个结果表明,铬银染色法具有灵敏、快速的特点。     

一种经济、简便的双向电泳方法

双向电泳是蛋白质分析的一门较为精确的技术.对电泳方法进行改良并采用普通垂直薄板等电聚焦技术,不仅大大降低了蛋白质双向电泳的成本,而且操作过程简单,是一种用于初步分析蛋白质的较好方法.在中华卵索线虫(Ovomermis sinensis)雌雄成虫可溶性差异蛋白的分析中获得了较满意的结果.这一改良方法的建立,可望促进双向电泳的广泛应用.     

用改进的Blenden银染色法检查钩端螺旋体

近年来,在钩端螺旋体流行病学调查中,均采用改良镀银染色法,但此法在染色过程中须控制温度(最适为60℃),无特殊恒温设备,不易掌握。为寻求一种简便方法,我站于1982年,在钩体病监测中,按常法取鼠双肾培养后,再取鼠肾作压印片,沿用刘聿太改进的鞭毛染色法中的Blenden银染色法,检查钩端螺旋体(简称钩体),现将结果报告如下。     

小分子肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法

在蛋白质的生化分析和基因表达产物的分离纯化中 ,经常要把某种或某些蛋白质成分分离开来。聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)是分离蛋白质的常用生化方法 ,样品的蛋白质分子热变性解聚后与 SDS结合形成带负电的蛋白质 - SDS复合物 ,复合物在电泳中的迁移率取决于蛋白质的分子大小 ,使用均匀浓度的 SDS-PAGE来分析分子量在 15～ 2 0 0 k D的蛋白质时 ,电泳迁移率与分子量的对数成线性关系。但常规定 Tris-甘氨酸 -盐酸系统中电泳分离分子量小于 10 k D的多肽效果差。作者在分离小分子肽的实验中改进了一套较简便的分离小分子肽的 T…     

改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝染色方法研究

旨在建立简便、经济、灵敏以及质谱兼容的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色法,在胶体考染(Blue Silver)配方(0.12%的考马斯亮蓝G-250,10%的磷酸,10%的硫酸铵,和20%的甲醇)的基础上,通过优化凝胶固定时间与染色液中各物质用量,得到改良的染色液配方(0.1%的考马斯亮蓝G-250或R-250,5%的磷酸,5%的硫酸铵,10%的甲醇)及简便的操作步骤。试验对比结果显示,改良方法一与胶体考染相比仍保持了较高的染色灵敏度以及较好的质谱兼容性,且有机试剂使用量更少,染色深度与蛋白质量的线性关系也更好。     

鸡胸腺APUD细胞的存在

为了确定鸟类免疫器官内有无内分泌细胞的存在,该文应用Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色法,ＭａｓｓｏｎＦａｎｔａｎａ亲银染色法,铅苏木精法和５－ＨＴ免疫组织化学方法,对鸟胸腺,腔上囊和脾脏进行了观察。结果表明：鸡和虎斑颈槽蛇相同,仅胸腺含有少量嗜银,亲银,铅染和（或）５－免疫反应阳性的细胞,具有一定的内分泌功能,腔上囊虽与胸腺同为中枢免疫器官,但没有此类细胞,这说明二者在内分泌调节等方面且一定差异。     

提高网状纤维染色质量的技术探讨

网状纤维染色在病理工作中是一种最常用的特殊染色方法,它可以用来显示病变组织网状支架的破坏情况,对于判断病变的性质、程度及其发展与转归具有重要意义.尤其在肿瘤病理诊断中,对于鉴别来源于上皮组织和间叶组织的恶性肿瘤具有重要价值.网状纤维染色方法很多,但常用的方法是Gordon-Sweet氏法.该法是一种嗜银染色法,易受多种因素的影响,在染色过程中若操作不当,极易造成染色效果不佳.本文对此法进行了改良,并对其染色机理进行了探讨,同时对染色过程中易出现的问题,分析其原因,提出了具体解决办法,使染色质量明显提高.     

蛋白质定量方法的进展

本文在简要比较常用蛋白质定量方法的基础上,结合自己的工作,选择性地叙述了Lowry法、考马斯亮蓝G-250染料测定蛋白质的改进法。还介绍了银染色定量法和4-甲酸喹啉测定蛋白质含量的新方法。     

改进的鞭毛染色方法

细菌的鞭毛染色较困难。我们从目前已报道的几十种方法中,选出应用较多的Leifson氏法、Blenden氏法、Rhodes氏法和山口氏法进行了比较,认为在银染色法中,Blenden氏法     

肥大细胞用甲苯胺蓝染色之体会

肥大细胞是存在于多种组织内的一类细胞 ,并因所在组织器官的不同而具有不同的功能。肥大细胞是抗感染免疫的第一线细胞 ,在疾病过程中具有重要作用 ,因此 ,研究肥大细胞的生物学性质具有重要的理论意义和广泛的应用价值。常用的肥大细胞染色方法有甲苯胺蓝染色法、阿尔辛蓝—番红染色法等。肥大细胞具有复杂的异质性 ,因此上述方法不仅难以全面反映其生物学特性 ,而且有时也难客观地反映其在组织中的分布。我们用改良的甲苯胺蓝染色法对食管、肠、子宫、乳腺等器官中的肥大细胞进行染色时得到了一点体会 ,供参考。甲苯胺蓝改良染色法 :根据…     

羧肽酶Y标记蛋白质羧基端方法的优化及应用（英文）

蛋白质水解是一种重要的翻译后修饰,它在许多生化过程(如细胞凋亡和肿瘤细胞转移等)中起着极其重要的作用。鉴定蛋白质水解位点可以进一步加深我们对这些生化过程的认识。尽管蛋白质氨基端标记方法和蛋白质组学在复杂生物体系中鉴定获得了许多蛋白质的水解位点,但这种方法存在固有的缺陷。羧基端标记方法是另一种可行的鉴定蛋白质水解位点的方法。本文优化了蛋白质羧基端生物酶标记方法,提高了亲和标记效率,从而可以更好地利用正向分离方法对蛋白质羧基端多肽进行分离并用质谱鉴定。我们用优化后的羧基端标记方法来标记大肠杆菌Escherichia coli复杂蛋白样品后鉴定到了120多个蛋白质羧基端多肽和内切多肽。在其所鉴定的蛋白质水解位点中,我们发现了许多已知和未知的位点,这些新的水解位点有可能在正常生化过程的调控中发挥着重要的作用。该研究提供了一个可以与蛋白质氨基端组学互为补充、可在复杂体系中鉴定蛋白质水解的方法。