菠菜乙醇酸氧化酶同工酶的亚基组成

我们首次报告 ,菠菜有ＧＯⅠ (ｐＩ≈ 7.4 )、ＧＯⅡ(ｐＩ≈ 9.4 )和ＧＯⅢ (ｐＩ≈ 8.3 ) 3种乙醇酸氧化酶(ＧＯ)同工酶 ;ＧＯⅠ只含 4 0± 2ｋＤ一种亚基 ,而ＧＯⅡ和ＧＯⅢ的亚基组成未被研究 ;3种同工酶之间均有免疫同源性[1-4 ] .水稻也存在 3种ＧＯ同工酶 ,其中ＧＯⅡ (ｐＩ >8.3 )能被乙醇酸所诱导 用柱层析法纯化可获得经ＳＤＳ ＰＡＧＥ后为 4 3± 2ｋＤ单带的水稻ＧＯⅠ[5～ 7] .以上初步解释了前人报告ＧＯ电荷不均一的原因[5] .最近从菠菜分离得到含ＧＯⅡ的蛋白和含ＧＯⅢ的蛋白 ,其ＳＤＳ ＰＡＧＥ分别为 67± 2ｋＤ和 4 0±…     

菠菜中的乙醇酸氧化酶是一个同工酶

乙醇酸氧化酶（ＥＣ．１．１．３．１５．ＧＯ）是光呼吸途径的关键酶,降低其活性可提高Ｃ３植物如水稻的产量,在目前中国乃至世界人口不断增加和可耕种土地日益减少的情况下,对ＧＯ的研究具有重要的理论意义和实际应用价值．在光呼吸途径被提出后的几十年间,人们对如...     

菠菜乙醇酸氧化酶同工酶GO Ⅰ的纯化和特性

从菠菜绿叶中获得SDS-PAGE为40000±2000M     

菠菜叶片乙醇酸氧化酶的氧化甘油酸活性

首先从菠菜叶片中纯化了乙醇酸氧化酶（GO）。通过鉴定反应中氧的消耗以及反应产物H2O2的生成,证实菠菜GO具有氧化光呼吸途径中间代谢物甘油酸的活性。该氧化活性依赖于辅因子FMN和FAD,而不依赖核黄素和光黄素;其最适反应pH值为8．0,Km（甘油酸）值为7．14mmol／L,kcat值为1．04s^-1,活化能为17．29kJ／mol;草酸和丙酮酸对该氧化活性有明显的抑制作用,其中前者为典型的竞争性抑制。进一步通过两底物竞争作图表明：菠菜叶片GO氧化甘油酸反应和氧化乙醇酸反应为同一活性中心所催化。     

菜心叶片中乙醇酸氧化酶的多种组分

乙醇酸氧化酶（EC．1．1．3．1,GO）是光呼吸中的关键酶,过去对其电泳行为和等电点的报告互不一致。Grodzinski和Col－man（1972）将菠菜、烟草等植物部分纯化的GO酶液在pH8．3的聚丙烯酰胺凝胶中电泳,活性染色后出现两条活性带,两者对FMN的依赖性有一定差异。Kerr和Groves（1975）对豌豆叶片部分纯化的GO酶液进行等电聚焦电泳,表明其pI值大于9．6.Behrends等（1982）将绿色黄瓜子叶的酶液经聚焦层析,发现GO活性分布在pH8．7附近。但Nishimura等（1983）发现在pH8．9的凝胶中南瓜子叶GO不迁移,而在pH4．5的凝胶中则出现一…     

菠菜乙醇酸氧化酶基因的克隆及表达

采用RT-PCR技术从菠菜总RNA中分离扩增了乙醇酸氧化酶（GO）基因的cDNA序列,首先克隆到质粒pMD18T,进行了测序。然后将乙醇酸氧化酶的cDNA分别亚克隆至质粒pThioHisC、 pTIGTrx、pBV220和pET-2b(+),分别转化大肠杆菌DH5α和BL21（DE3）,并对重组乙醇酸氧化酶在大肠杆菌中的表达进行了研究。SDSPAGE和酶活分析表明,菠菜乙醇酸氧化酶在E.coli BL21 (DE3) （pTIGTrxGO）和E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）里得到了高水平的表达,其中E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）的乙醇酸氧化酶活性较高。     

菜心中高等电点高活性的乙醇酸氧化酶同工酶的纯化和特性

乙醇酸氧化酶 (EC 1 1 3 15 ,GO)被认为只含4 0kD一种碱性亚基 ,是因为从多种植物中获得了具GO活性的蛋白 ,SDS PAGE后呈约 4 0kD单带[1] .菠菜GOcDNA编码约 370个氨基酸 ,即 4 0kD多肽 ,其碱 酸性氨基酸的比例高达 0 96 ,富含碱性氨基酸[2 ] .已克隆的GOcDNA在E .coli中表达     

菠菜中不同等电点的乙醇酸氧化酶全酶分子量的测定

乙醇酸氧化酶（EC1．1．3．15,简称GO）被认为是一个由相同亚基和黄素腺瞟吟单核着酸（FMN）组成的寡聚酶“－‘’,它在不同的生理状态下具有不同的聚合态’‘,’］。所以,GO全酶Mr差异很大,甚至有时不同或同一植物有多种并存：如豌豆为100000”’;菠菜为270000、140000和70000［”‘j;黄瓜为180000和700000［‘j;南瓜为280000～320000［sj;／J’麦、大麦、菠菜、豌豆、烟草等C3植物为160000～180000;而C4植物玉米、甘蔗为290000～310000‘’‘。但GO由相同亚基所组成的观点却难于解释其等电点（PI）也存在较大的差异：如…     

植物的乙醇酸氧化酶

乙醇酸氧化酶存在于植物细胞过氧物酶体中,是一种黄素蛋白,以FMN为辅基,含8个亚基。催化乙醇酸氧化为乙醛酸和乙醛酸氧化为草酸。受光活化。硫化钠和氰化物促进其活性:巯基抑制剂、α-羟基磺酸类、α-羟基丁炔酸抑制其活性。多种代谢物对其活性有调节作用。为光呼吸的关键酶之一,其活性随植物发育、矿质营养及感病而发生变化。     

乙醇酸氧化酶必需精氨酸残基的化学修饰

丁二酮能使GAO迅速失活,其失活速度受介质pH和硼酸浓度的显著影响;其修饰反应具可逆性,当透析除去修饰剂和硼酸时,活性得到恢复。失活进程表现为假一级动力学。而计算表明,酶的每一活性中心单位与一分子丁二酮结合便可引起酶的失活。底物和竞争性抑制剂均能有效地保护酶免于失活。氨基酸分析表明,酶的失活是因为丁二酮修饰了精氨酸残基。丁二酮修饰GAO后使酶的K_m增大,而V_m没有变化。     

植物乙醇酸氧化酶分离纯化方法的改进

通过缩短DEAE-Cellulose柱长度,加快流速并采用pH8.8的80mmol.L-1Tris-HCl为洗脱液,可在9小时内快速地从菠菜、菜心和豆角绿叶中纯化得到乙醇酸氧化酶。该酶具高活性(54.6～197.0U.mg-1)及高等电点(pI>10.0)。产率为4.1%～71.5%,纯化倍数为21.6～122.68。经SDS-PAGE检测均有40kD带,表明3种植物乙醇酸氧化酶的亚基大小无区别。     

组氨酸残基在乙醇酸氧化酶活性中的作用

DEPC能显著抑制GAO的活性。其失活速度表现为假一级动力学特性,并和抑制剂浓度成线性正比关系。底物乙醇酸可保护GAO免受DEPC抑制,羟胺能使被抑制的酶重新复活。光谱测定表明,被抑制的酶只有组氨酸残基被修饰,而酪氨酸残基未被修饰,修饰前后酶的氨基含量均无变化。反应动力学表明,在35℃下,GAO中有一个pK为6.5的解离基团和催化活性有关,其解离⊿H为31610 J/mol。因此组氨酸残基为GAO催化活性的一个必需基团。     

光和底物对乙醇酸氧化酶的基因表达的诱导

从菠菜中提纯了乙醇酸氧化酶并制备其抗体,经免疫双扩散、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实水稻和豌豆黄化苗中不存在乙醇酸氧化酶。在黑暗中,底物可促进该酶基因的表达,而在黄化苗光照初期,推测光可能是不经过底物促进该酶基因的表达。     

Flavonol glycosides in leaves of Spinacia oleracea

Besides spinatoside (3,6-dimethoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavone 4′-O-β-D-glucopyranuronide), three new flavonol glycosides have now been isolated from the polar fractions of the methanolic extract of Spinacia oleracea. They have been identified as patuletin 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1 → 6)-[β-D-apiofuranosyl-(1 → 2)]-β-D-glucopyranoside, patuletin 3-O-β-gentiobioside and spinacetin 3-O-β-gentiobioside, respectively.