HLA分型方法进展

传统的HLA分型方法主要是血清学和细胞学方法,分型准确性较差,且不能进行亚型分析。随着PCR技术及基因芯片技术等分子生物学技术的出现、发展,HLA基因分型得到了迅速的发展,各具特点的HLA分型技术不断出现,使HLA的分型更加准确、精细、简便、实用,为临床推广应用打下了基础。     

HLA—DR抗原与多肽的结合

ＨＬＡ┐ＤＲ抗原与多肽的结合姜良勇王福庆（上海第二医科大学生化教研室,上海２０００２５）关键词人类白细胞抗原系统ＨＬＡ抗原肽人类白细胞抗原系统（ＨＬＡ）是迄今所知人类最复杂、多态性程度最高的遗传系统。ＨＬＡ中某些等位基因与疾病的相关性已为人们所熟知,...     

胰岛素依赖型糖尿病HLAⅡ类抗原DNA多态性研究

 用Southern DNA分析法,对正常人和胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)病人外周血白细胞DNA进行限制性片段长度多态性(RFLP)研究。HLA抗原与IDDM相关,我们用HLA-DQβcDNA探针和EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ内切酶,测得EcoR Ⅰ 2.2kb片段与正常人DR2抗原相关联(r=0.78,P=1×10~(-6),与IDDM DR2抗原无关联;此片段在DR2的正常组和IDDM组中的频率有显著差异(P=0.02)。EcoR Ⅰ 3.0kb和BamH Ⅰ 3.3kb片段在IDDM组中的频率均降低,与正常组比较其频率有显著差异(P=3.2×10~(-3)和P=1.8×10~(-3),这二片段的差异还未见报道。DNA的RFLP研究提示,IDDM病人中可能是由于基因片段的缺失或是基因结构的改变,导致经酶切后与探针杂交的结果与正常者有差异。     

mPEG修饰HLA抗原的方法学研究

为了研究mPEG有效修饰HLA抗原,阻断HLA抗原与其相应抗体间特异性免疫反应的方法．在22℃,pH7．4的PBS介质中,采用浓度梯度法修饰淋巴细胞表面HLA抗原．结果显示经mPEG处理后的淋巴细胞表面HLA-1类抗原与其相应抗体间的微量淋巴细胞毒试验为阴性．由此可以得出结论,经mPEG修饰后可以完全阻断HLA—I类抗原与其相应抗体间的特异性免疫反应．     

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚/氯仿法提取标准血样基因组DNA,在DRB1的exon2区域设计一对引物,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针,将探针固定在APS-PDC法制作的DNA Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,扫描仪对杂交效果进行扫描,Imagene软件对杂交图像进行分析。共检测了33例标准血样的HLA DRB1基因型。检测结果证明研制的DNA Microarray准确、灵敏。DNA Microarray技术可以有效地检测DRB1等位基因,对比常规的PCR-SSP和PCR-SSO方法、分型基因芯片方法更为直观,并有集成化优势。     

HLA系统D区基因分型和中国汉族人特有的RFLP

HLA II类抗原在外来抗原提呈中起重要作用,在DNA水平进行II类抗原基因分型有更强的多态性鉴别能力,有利于检出新的特异性,根据白种人纯合分型细胞（HTC）和中国人部分纯合细胞DRB和DQA基因的RFLP格局,我们对上海地区90名随机健康人进行了HLA－D区基因分型,并将结果与血清学分型相比较,证明了它的可靠性和优越性。此外,通过与白种人格局相比,我们还发现了中国人特有的HLA－D区RFLP格局。     

关于人类白细胞抗原HLA

我们偶尔会在媒体上看到白血病患者或再生障碍性贫血患者进行骨髓移植后康复的好消息,但更多的却是由于缺少合适的骨髓而使生命之花凋零的坏消息。为什么合适的骨髓这么难找呢?这要从与骨髓移植密切相关的人类白细胞抗原HLA谈起。     

肿瘤细胞中HLAⅠ类抗原表达的研究进展

HLAⅠ类抗原的许多肿瘤中表达降低,从而影响肿瘤的临床治疗和T细胞免疫疗法的预后,本文从肿瘤细胞HLAⅠ类抗原分子的表达情况、分子机制以及其临床意义方面对肿瘤细胞HLAⅠ类抗原研究情况作一综述。     

人类白细胞抗原（HLA）系统及其生物医学意义

ＨＬＡ（ｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ，人类白细胞抗原）系统是目前所知人体最复杂的多态系统。自１９５８年发现（ＪｅａｎＤａｕｓｓｅｔ）第一个ＨＬＡ抗原，到７０年代，ＨＬＡ便成为免疫遗传学、免疫生物学和生物化学等学科的一个重要新兴研究领域。...     

超抗原葡萄球菌肠毒素A、B和C1的T细胞抗原HLA表位预测

为预测超抗原葡萄球菌肠毒素（SE）家族中的SEA、SEB和SEC1的HLAⅠ和HLAⅡ抗原结合表位,并对其活化T细胞作用的机理进行探讨,根据已发表的SEA、SEB和SEC1基因全序列,用T细胞抗原表位预测软件Guotif2.0对其进行T细胞抗原表位预测,统计与HLAⅠ和HLAⅡ各抗原位点结合的SEA、SEB和SEC1肽段的出现次数。结果显示,SEA、SEBT SEC1具有共同的特点,即都是主要与HLAⅠ类分子的A3位点和HLAⅡ类分子的DR1位点具有较强的结合。说明SEA、SEB和SEC1与HLAⅠ类分子和HLAⅡ类分子都有很强的结合性。三者在HLAⅠ和HLAⅡ结合位点上具有较强的同源性。本研究为SE活化T细胞作用机制的功能实验提供了依据。     

病理性近视与HLA的关联性研究

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对江浙沪籍汉族５５例病理性近视眼（ＰＭ）患者的ＨＬＡⅡ类ＤＱＢ１基因的第二个外显子进行了基因分型。结果发现ＨＬＡ－ＤＱＢ１＊０２０１、＊０３０３、＊０４０１等位基因在ＰＭ患者中和正常人中的分布有显著的差异（Ｐｃ＜０．０５,ＡＦ分别为０．１６３６,０．１０９１,０．１６３６,０．１０９１ｖｓ．０．０４００,０．０３００,０．０４００,０．０２００）,可能与ＰＭ的致病相关。ＤＱＢ     

HLA复合体与感染性疾病的关系

人类白细胞抗原（ＨＬＡ）是人类主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）的基因产物,为目前已知的最复杂的人类基因复合体。由于ＭＨＣ分子在个体免疫调节中起主要作用,故其在控制个体对疾病的易感性方面也起重要作用。本文总结了近年来ＨＬＡ复合体与感染性疾病相关性的研究进展。     

汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究

根据HFRSV汉滩型（HTN）代表株76－118和汉城型（SEO）代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1：100000用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）,检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100％和84．6％,符合率为84．6％,但前者比后者敏感性高15．4％。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（RT-PCR－RFLP）分型法。被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型。此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功．与RT-PCR－RFLP法结果符合。分型成功率RT-PCR－RFLP法比血清法高30％。     

中国人常见HLA—DPB1不明确杂合子SSP分型解决方案

目的：人类染色体是二倍体,这使得以测序方法研究多态性区域时会遇到不明确杂合子,这个问题在HLA-DPB1的分型上尤为突出。试图寻找一个来解决HLA-DPB1分型中不明确杂合子比例高给分型带来的困难的方案。方法：对946例样品进行HLA-DPB1分型,其中不明确杂合子有353例,共30种,占总例数的37％。建立了一套SSP分型方法,设计上游引物6条,下游引物15条,每一个样品同时用两对特异性引物进行扩增,两对引物分别代表两种不同的杂合模式。再从30种不明确杂合子类型中各挑2个样品进行克隆测序,结果与SSP分型结果比较。结果：SSP分型方法采用同一套扩增体系与两套循环反应条件,只需一次PCR扩增,就可以方便快捷地实现不明确杂合子的分辨,其结果与克隆测序结果相符。结论：与以往的克隆测序、SSCP方法相比,本研究中SSP分型方法具有高效率、高通量、省时省力的特点。     

HLA分型技术在亲子鉴定中的应用

本文对ＨＬＡ分型实验用于亲子鉴定进行了研究，应用统计学公式计算出ＨＬＡ单倍型检测的平均亲子概率为９４０６％，并对５例要求亲子鉴定的家庭进行检测。结果表明：３例亲子关系成立，１例否定，１例可疑     

中国人HLA纯合细胞的筛选及纯合性鉴定

本文报告了我们实验室在中国人中筛选HLA纯合子的方法和筛选流程。用HLA血清学分型法,从上海129个近亲婚配家庭中筛选到HLA-AB纯合子23个(分布于17个家庭)。其中19个HLA-AB纯合子(分布于14个家庭)进一步做了家系MLC棋盘。最终证明,它们中14个细胞(分布于10个家庭)的HLA-D位点也纯合。