C-myc-siRNA通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡

为探讨原癌基因C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,本研究利用细胞计数盒(cell counting Kit-8, CCK-8)法分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞活力;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的变化;流式细胞仪分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测预处理NAC (ROS抑制剂)后,C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化。结果表明:C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的表达显著高于空载体转染组,且抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p<0.05);C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,细胞ROS水平明显增加(p<0.05);NAC预处理显著减弱C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的促进作用(p<0.05)。本研究结论表明,C-myc-siRNA能够通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡。     

Pten基因沉默可抑制子宫内膜细胞增殖

本研究将Pten-siRNA转染至子宫内膜细胞,通过蛋白免疫印迹检测子宫内膜细胞中Pten蛋白的表达情况;通过MTT法检测Pten-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)细胞增殖状态;通过蛋白免疫印迹检测Pten-siRNA转染组和对照组子宫内膜细胞中PCNA、Ki67蛋白表达情况;通过流式细胞仪检测子宫内膜细胞Pten-siRNA转染组和对照组中ROS的水平,以探究Pten基因对子宫内膜癌发生发展的影响。研究表明,Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中Pten蛋白明显低于对照组;Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞增殖率显著高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,细胞增殖相关蛋白PCNA和Ki67明显高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中ROS水平明显低于对照组(p<0.05)。本研究初步结论显示Pten-siRNA可降低子宫内膜细胞中Pten蛋白表达,抑制子宫内膜细胞的增殖并增加子宫内膜细胞中ROS水平。     

miR-25抑制结肠癌细胞凋亡

为了通过结肠癌细胞实验,探究miR-25对结肠癌细胞凋亡的影响,本研究通过qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-25的表达情况;通过CCK-8法检测miR-25抑制剂转染组细胞活力状态;将miR-25抑制剂转染至结肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;通过Caspase-3活性检测试剂盒检测结肠癌细胞中Caspase-3表达情况;通过流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平;通过Elisa试剂盒检测4-HNE、GSH和MDA含量。结果表明:结肠癌细胞中miR-25表达明显高于正常结肠粘膜组;miR-25抑制剂转染结肠癌细胞后,结肠癌细胞活力明显低于空载体对照组;miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中Bax蛋白显著高于空载体对照组(p0.05),且Bcl-2蛋白低于空载体对照组(p0.05),Caspase-3活性高于空载体对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于空载体对照(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后结肠癌细胞中4-HNE (p0.05)和MDA (p0.05)含量明显增加,GSH (p0.05)含量显著降低。miR-25抑制剂可促进结肠癌细胞凋亡,其机制可能与增加结肠癌细胞中ROS水平导致氧化应激水平增强有关。     

干扰YAP1对食管癌Eca-109细胞生物学功能的影响

该文研究Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)对Eca-109细胞生物学功能的影响。构建针对YAP1基因的sh RNA慢病毒载体,转染Eca-109细胞,采用q PCR和蛋白印迹法检测转染前后Eca-109细胞中YAP1 m RNA和蛋白以及P53蛋白的表达情况;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情况;CCK-8实验检测细胞的增殖情况变化。结果显示,慢病毒转染组细胞内YAP1 m RNA和蛋白表达量低于空白对照组和空病毒转染组,p53基因表达量高于空白对照组和空病毒转染组;Eca-109细胞增值率从第3 d开始低于对照组(P0.05);慢病毒转染组细胞G1期比例增高(P0.05),早期凋亡率增加(P0.05),以上差异均有统计学意义。结果表明,干扰YAP1可诱导Eca-109细胞凋亡,降低Eca-109细胞的增殖能力,且其抗凋亡的作用可能部分与p53基因相关。     

UBE2T基因对结直肠细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人类泛素结合酶E2T(Ubiquitin-conjugating enzyme E2T,UBE2T)基因对结肠细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人正常结直肠粘膜细胞FHC,采用将UBE2T基因慢病毒质粒转染至FHC细胞48 h后,通过MTT法检测细胞增殖情况,western blotting检测细胞中增殖相关蛋白UBE2T蛋白、Ki67、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与转染空质粒的FHC细胞相比,UBE2T基因慢病毒质粒转染FHC细胞48 h后,细胞增殖能力显著上调(P0.05),UBE2T蛋白明显增加,Ki67的表达明显增加(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),且Bax的表达明显下调而Bcl-2的表达上调(P0.05)。结论:UBE2T基因能够促进正常结肠粘膜细胞的增殖,并抑制其凋亡。     

CD47-siRNA通过调控ROS诱导食管癌细胞SEG-1凋亡

目的:探讨CD47-siRNA对食管癌细胞SEG-1凋亡的影响及其机制研究。方法:Western blot法检测食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;CCK-8法检测食管癌细胞SEG-1细胞活力;DCFDA细胞ROS检测试剂盒检测食管癌细胞SEG-1中ROS水平。结果:CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白明显低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1细胞活力显著低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中促凋亡蛋白Bax表达显著高于空载对照组(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染食管癌细胞SEG-1组ROS水平明显高于空载对照组(P0.05);与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理增加了细胞活力;与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理显著降低食管癌细胞SEG-1中Bax蛋白表达以及增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结论:CD47-siRNA转染通过上调食管癌细胞SEG-1内ROS水平促进食管癌细胞SEG-1凋亡。     

CTSB 对人脐静脉血管内皮细胞系增殖及凋亡的影响

目的:探索组织蛋白酶B(CTSB)对人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)增殖及凋亡的影响。方法:采用细胞转染法得到慢病毒空载体转染HU-MOCK细胞及CTSB过表达的HU-CTSB细胞,与正常的HUVEC细胞进行比较。采用MTT法检测HUVEC增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法检测Bal-2/Bax及Caspase家族(Caspase-3/9)的表达情况。结果:HU-CTSB组各时间点HUVEC的增殖率明显低于其他两组,且差异具有统计学意义(P0.05);HU-CTSB组的HUVEC早期凋亡率(右下象限)和晚期凋亡率(右上象限)显著高于HUVEC组和HU-MOCK组,且组间差异具有统计学意义(P0.05);HU-CTSB组的抑制凋亡蛋白Bcl-2表达量明显低于其他两组,且促凋亡蛋白Bax表达量显著高于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05);HU-CTSB组caspases-3和caspases-9的活化片段显著高于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:CSTB通过激活Caspase-3/9信号通路来上调Bax,并下调Bal-2,显著抑制HUVEC的增殖,并促进其凋亡,进而影响心血管疾病的发展。。     

miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖凋亡中的作用。方法:分离幼鼠海马神经元细胞,转染miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(inhibitor control)、miR-34a模拟物(miR-34a mimics)、模拟物对照(mimics control),RT-PCR检测细胞中miR-34a表达水平。MTT检测转染后细胞增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平。结果:转染miR-34a inhibitor可以抑制miR-34a的表达,miR-34a mimics可以促进miR-34a的表达。miR-34a mimics对细胞增殖抑制率明显高于mimics control组(P0.05),miR-34a inhibitor组抑制率明显低于inhibitor control组(P0.05)。miR-34a inhibitor组神经元细胞凋亡率明显低于inhibitor control组(P0.05),miR-34a mimics组神经元细胞凋亡率明显高于mimics control组(P0.01),inhibitor control组和mimics control组神经元细胞凋亡率差异不显著(P0.05)。miR-34a inhibitor组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量低于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a inhibitor组Bcl-2蛋白表达量高于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量高于mimics control,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Bcl-2蛋白表达量低于mimics control,差异显著(P0.05)。结论:miR-34a抑制海马神经元细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达有关。     

降压通络方对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:研究降压通络方对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞,经过缺血缺氧,将大鼠肾小管细胞随机分为4组:正常组、模型组、降压通络方组、缬沙坦组。采用CCK-8检测细胞增殖情况,免疫组化法检测大鼠肾小管上皮细胞p-AKT蛋白的表达,蛋白免疫印迹法检测大鼠肾小管上皮细胞凋亡相关基因调控蛋白Bcl-2、Bax的表达,对Bcl-2、Bax蛋白的表达水平进行相关性分析。结果:缺血缺氧呈时间依赖性抑制大鼠肾小管上皮细胞活性;免疫组化结果示:p-AKT在正常组呈高表达,模型组低表达,降压通络方组p-AKT表达明显高于模型组(P0.01),缬沙坦组表达低于模型组(P0.05);蛋白免疫印迹法结果示:模型组Bcl-2表达较正常组明显降低(P0.01),降压通络方组和缬沙坦组Bcl-2的表达均高于模型组(P0.05,P0.01);模型组Bax表达较正常组明显升高(P0.01),降压通络方组和缬沙坦组Bax的表达均较模型组降低(P0.05);Bcl-2蛋白与Bax蛋白表达呈负相关性(r=-0.811,P0.01)。结论:降压通络方可抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡,其作用机制可能与上调p-AKT、Bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达有关。     

抑癌基因miR-195对口腔癌细胞CAL27生物学特性的影响

为了探究抑癌基因miR-195对体外培养的口腔癌细胞CAL27生物学特性的影响,本研究在口腔癌细胞CAL27中,通过质粒转染的方法,构建miR-195过表达和mimic空载体的CAL27细胞株,在用RT-PCR检测质粒构建成功的基础上,运用MTT法和Western blotting法分别检测过表达miR-195的人舌鳞癌细胞CAL27细胞增殖和凋亡的生物学特性。结果显示,过表达miR-195的CAL27细胞株构建成功(p0.05);与mimic空载体的CAL27细胞株相比,过表达miR-195的细胞株增殖能力明显下降(p0.05);与mimic空载体的CAL27细胞株相比,过表达miR-195的细胞株促凋亡蛋白Bax表达明显增加(p0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(p0.05)。本研究表明过表达miR-195可有效抑制口腔癌细胞CAL27的生物学特性。     

硫酸化茯苓多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

为了探讨硫酸化茯苓多糖(SP)对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因(Bcl-2,Bax)的表达;Western blotting技术检测SP对乳腺癌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果表明,SP对MCF-7细胞增殖有抑制作用,且在一定范围内呈剂量效应;细胞贴壁能力减弱,细胞间隙增大,胞膜褶皱;Bcl-2基因表达水平和蛋白表达水平明显降低(p0.05),Bax基因表达水平和蛋白表达水平明显升高(p0.05)。基于以上研究,SP通过促凋亡基因Bax的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达来下调Bcl-2/Bax比值,激活凋亡途径,诱导MCF-7细胞的凋亡。     

小花棘豆中毒对家兔生精细胞p53、Bcl-2和Bax表达的影响

探讨小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞p53、Bcl-2和Bax基因的影响。将24只公兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组饲粮分别按照Ⅰ组15%、Ⅱ组30%、Ⅲ组45%的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14天、第35天、第70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过Real-time q PCR检测生精细胞p53、Bcl-2和Bax m RNA的表达,免疫组化和Western Blot检测生精细胞p53、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果显示,试验Ⅱ组和Ⅲ组家兔睾丸生精细胞p53、Bcl-2和Bax m RNA的表达均与对照差异极显著(p0.01),试验Ⅰ组家兔睾丸生精细胞p53、Bcl-2和Bax m RNA的表达均与对照差异显著(p0.05);试验组家兔生精细胞中Bcl-2蛋白表达均明显低于对照,p53和Bax蛋白表达均明显高于对照,其差异性随中毒时间的延长而变化。结果表明小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax表达异常,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应。     

miR-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨mi R-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:首先构建慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,然后感染椎间盘退变髓核细胞得到稳定过表达细胞系,同时设置空载体和空白细胞组对照。用荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,分别提取三组细胞总RNA,采用RT-q PCR方法检测mi R-155的表达;通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western-Blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化情况。结果:在荧光显微镜下,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光;RT-qPCR结果显示构建的稳定过表达细胞系(GV369-miR-155-NP)中mi R-155的表达水平较高,且与空载体细胞系及空白细胞对照组均呈显著性差异(P0.05);与空载体组(GV369-NP)及空白细胞对照组相比,过表达组(GV369-miR-155-NP)细胞凋亡率显著降低(P0.05),FADD、Caspase-3、Bax的表达水平均明显下降,而Bcl-2表达水平显著增加(P0.05)。结论:mi R-155可能通过靶向结合Caspase-3和FADD阻止FasL-Fas途径或通过线粒体途径抑制人椎间盘退变髓核细胞凋亡。     

血管细胞黏附分子-1对卵巢癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨过表达血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)对卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:构建过表达VCAM-1的慢病毒载体GV358-VCAM1+,转染人类卵巢癌IGROV1细胞株,利用嘌呤霉素筛选稳定表达VCAM-1的IGROV1细胞,通过倒置荧光显微镜下观察绿色荧光,确定细胞转染效率,Western blot及RT-PCR法确定卵巢癌细胞VCAM-1蛋白和m RNA水平;采用流式细胞仪检测过表达VCAM-1的IGROV1的细胞凋亡变化,western blot法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Casepase-3、Cleaved Casepase-3)以及STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的变化。结果:成功构建的慢病毒载体GV358-VCAM1+在IGROV1细胞中的转染效率达到85%以上,转染细胞的VCAM-1蛋白及m RNA水平均呈稳定表达;VCAM-1过表达卵巢癌细胞的细胞凋亡显著高于空载体对照组(P=0.0149);Bax、Casepase-3、Cleaved Casepase-3表达水平均较对照组显著升高(P0.01),Bcl-2、p-STAT3表达水平明显低于对照组(P0.01),但STAT3表达水平无显著改变。结论:VCAM-1可能通过下调STAT3的磷酸化水平诱导卵巢癌细胞凋亡。     

沉默YAP基因抑制卵巢癌细胞增殖及Warburg效应

为了通过卵巢癌OVCAR-3细胞实验探讨YAP基因对卵巢癌增殖的影响,本研究通过MTT法检测卵巢癌细胞增殖情况,借助蛋白免疫印迹法检测卵巢癌细胞中PDK-1、PDH和LDHA蛋白的表达情况;通过乳酸检测试剂盒检测卵巢癌细胞中乳酸的产量。研究表明YAP-siRNA转染后,与空载体对照组相比,YAPsi RNA卵巢癌细胞转染组细胞增殖率明显增加(p0.05);YAP-siRNA转染后,与空载体对照组相比,YAP-siRNA卵巢癌细胞转染组细胞中PDK-1蛋白和LDHA蛋白表达明显增加,PDH蛋白表达显著降低(p0.05);YAPsi RNA转染后,与空载体对照组相比,YAP-siRNA卵巢癌细胞转染组乳酸产量明显增加(p0.05)。研究结果初步表明:沉默YAP基因能够抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与调控Warburg效应有关。     

莫诺苷对人恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的调控机制

目的:探究莫诺苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖及凋亡的影响及作用机制。方法:将莫诺苷作用于A375细胞,采用MTT法测定细胞活力,Annexin-FITC/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western印迹检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:与空白对照组比较,顺铂阳性药和高中低浓度莫诺苷均能明显抑制细胞增殖(P0.01),明显下调周期蛋白D1和凋亡因子Bcl-2的表达水平(P0.01或P0.05),明显上调P21和促凋亡因子Bax的表达水平(P0.01)。结论:莫诺苷能抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖和促进其凋亡,其机制可能是通过下调周期蛋白D1和Bcl-2蛋白的表达水平,上调P21和Bax蛋白的表达水平,调控周期蛋白D1-CDK-P21通路及凋亡通路,从而促进恶性黑色素细胞的凋亡。     

地佐辛对缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的作用及机制

目的: 探讨地佐辛通过调控微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)/泛素E3连接酶10(TRIM10)表达影响缺氧复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞H9C2氧化应激和凋亡的作用机制。方法: 将H9C2细胞分为对照组(细胞正常培养)、H/R组(缺氧处理3 h,复氧培养4 h)、不同剂量地佐辛干预组(分别采用10^-7、10^-6、10^-5 mmol/L的地佐辛预处理H9C2细胞24 h,再进行H/R处理)、H/R+miR-7a-5p组(转染miR-7a-5p mimics至H9C2细胞,然后进行H/R处理)、H/R+miR-NC组(转染miR-NC至H9C2细胞,然后进行H/R处理)、H/R+地佐辛+anti-miR-7a-5p组(10^-5 mmol/L的地佐辛预处理转染anti-miR-7a-5p的H9C2细胞24 h,再进行H/R处理)、H/R+地佐辛+anti-miR-NC组(10^-5 mmol/L的地佐辛预处理转染anti-miR-NC的H9C2细胞24 h,再进行H/R处理),每组细胞设置3个复孔,实验重复3次。酶联免疫吸附法检测细胞中氧化应激指标丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹(Western blot)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和泛素E3连接酶10(TRIM10)蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-7a-5p和TRIM10 mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-7a-5p与TRIM10调控关系。结果: 与对照组比较,H/R组MDA含量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达及TRIM10的mRNA和蛋白表达均升高(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白表达和miR-7a-5p表达均降低(P＜0.05)。与H/R组比较,不同剂量地佐辛干预组MDA含量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达及TRIM10的mRNA和蛋白表达均降低(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白表达和miR-7a-5p表达均升高(P＜0.05),且不同剂量地佐辛干预组间各指标两两比较差异均显著(P＜0.05)。与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-7a-5p组MDA含量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达及TRIM10蛋白表达均降低(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白表达均升高(P＜0.05)。miR-7a-5p靶向负调控TRIM10表达。与H/R+地佐辛+anti-miR-NC组比较,H/R+地佐辛+anti-miR-7a-5p组MDA含量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达及TRIM10蛋白表达均升高(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白表达均降低(P＜0.05)。结论: 地佐辛可降低H/R诱导的大鼠心肌细胞H9C2氧化应激和凋亡,其可能通过调控miR-7a-5p/TRIM10轴发挥作用。     

SHIP1在急性髓细胞白血病患者中的表达及对人白血病细胞凋亡的影响研究

目的:探讨含SH2结构域的肌醇1(SHIP1)在急性髓细胞白血病患者中的表达及对人白血病细胞凋亡的影响。方法:采用Western blot检测收集的急性髓细胞白血病患者骨髓中SHIP1的表达。人白血病细胞U937转染SHIP1过表达载体(pEGFP-SHIP1组)及对照空载体(pEGFP组),同时设置对照组,对照组细胞不转染载体,其他步骤同pEGFP-SHIP1组和pEGFP组。流式细胞仪检测48 h的细胞凋亡情况,Western blot检测48 h细胞中SHIP1、Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt的表达。结果:急性髓细胞白血病患者骨髓中SHIP1表达明显低于正常人(P0.05)。pEGFP-SHIP1组细胞中SHIP1、Bax表达和凋亡率均明显高于pEGFP组及对照组(P0.01),Bcl-2、p-Akt表达均明显低于对照组(P0.01)。结论:SHIP1在急性髓细胞白血病患者骨髓中表达下调,其可能通过Akt信号促进人白血病细胞凋亡。     

IGF-1 基因转染对脂肪间充质干细胞活性的影响及机制研究

目的:探讨携带IGF-1基因慢病毒转染脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的可行性,对其引起的细胞凋亡机制做出初步研究,并讨论其与PI3K/Akt通路的关系。方法:分离培养ADMSCs,利用脂质体将携带IGF-1基因的慢病毒载体转染入ADMSCs。实验分为Blank组,Lv-non和Lv-IGF-1三组,转染后用MTT法测定各组细胞的生长情况并绘制生长曲线,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot测定各组中IGF-1、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白的表达。结果:成功分离、培养了大鼠脂肪间充质干细胞;携带IGF-1慢病毒载体转染ADMSCs后,流式细胞术检测发现Lv-non和Blank组凋亡率明显高于Lv-IGF-1组(P0.05)。同时发现Lv-IGF-1组中促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9蛋白和Bax的表达水平显著下调(P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2显著上调(P0.01)。MTT法结果显示Lv-IGF-1能促进细胞生长,在5到6天时显著高于其他两组(P0.05)。通过检测PI3K/Akt通路发现,Lv-IGF-1组PI3K和p-Akt水平显著高于Blank和Lv-non组(P0.05),通路被激活。结论:携带IGF-1基因慢病毒载体成功转染ADMSCs。在ADMSCs中过表达IGF-1蛋白可以促进细胞生长,同时抑制细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt通路蛋白磷酸化相关。     

猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-2 3''UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3''UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-2 3''UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。