毛地黄皂苷诱导的水稻悬浮细胞防卫基因表达的信号传导

用带水稻苯丙氨酸解氨酶PAL 2启动子和GUS读码框嵌合基因的水稻悬浮细胞证明毛地黄皂苷能诱导水稻PAL 2的转录。NAD-PH、NADH、过氧化氢、超氧歧化酶、过氧化氢酶、甘露醇、1,2-羟基苯-3,5-二磺酸(Tiron)、paraquat、精氨酸、还原型和氧化型的谷胱甘肽、N-乙酰-L-半胱氨酸、二硫苏糖醇等都不影响毛地黄皂苷诱导的PAL2转导。只有在超氧歧化酶和过氧化氢酶或超氧歧化酶和Tiron一起时才微弱地抑制这种诱导。毛地黄皂苷能在缺钙培养基中诱导胞外介质碱性化,但它只在含钙离子的条件下才诱导PAL 2转录。钙离子载体A 23187及Stauros-poline不诱导PAL 2基因转录和胞外介质碱性化。钙调素的拮抗剂N-(6-Aminohexy1)-5-chloro-1-naphthalenesulfonamide(W7)和trifluoperazine(TFP)能抑制毛地黄皂苷诱导的PAL 2转录,但一些蛋白激酶的激活剂和抑制剂包括phorbol-12-myristate(TPA)、1-(5-Isoquinoline sulfony1)-2-methylpiperaz-ine(H7)、staurosporine及genestein不干扰它对PAL 2转录的诱导,G蛋白激活剂GTP-γS和抑制剂百日咳毒素也不影响这种诱导。毛地黄皂苷不诱导几丁酶转录。二硫苏糖醇能抑制几丁酶转录。伴刀豆球蛋白及麦胚凝集素能微弱地促进几丁酶基因转录,但对PAL 2表达没有影响。看来毛地黄皂苷诱导的水稻悬浮细胞PAL 2转录与活性氧激活没有简单和直接的关系。但它依赖于胞外介质碱性化和钙-钙调素,它的信号传导途径与诱导几丁酶转录的信号传导途径是不同的。     

反效信号传导通路与氧化应激诱导的基因表达

细胞存活与凋亡受生长因子活化的ＥＲＫ与应激活化的ＪＮＫ－ｐ３８信号传导通路二者的动态平衡所控制,ＪＮＫ－ｐ３８通路的持续活化及ＥＲＫ通路的共济失活是细胞凋亡的关键所在。Ｈ２Ｏ２参与多种细胞类型的信号传导,并可诱导早期应答基因的表达。转录因子的激活与抗氧化酶合成有一定的因果关系,但中间环节尚待进一步阐明。     

太子参细胞悬浮培养及其皂苷含量分析

以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,并通过细胞悬浮培养获取皂苷.结果表明：用MS＋BA 0.2 mg L^-1＋2,4-D 1.0 mg L^-1＋KT 1.0 mgL^-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好.细胞悬浮培养约30 d时,每克干重细胞的培养液内可提取总皂苷量为2.13-2.92 mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量（3.6-4.3 mg）,与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近.     

高等植物防卫反应的信号传导

高等植物对病原微生物的防卫反应包括植物细胞对病原菌的识别,胞内信号的转换与传导,防卫反应的开启与ＳＡＲ抗性的形成等。本文对高等植物防卫反应信号传导的研究进展进行了综述。     

高等植物防卫反应的信号传导

高等植物对病原微生物的防卫反应包括植物细胞对病原菌的识别,胞内信号的转换与传导,防卫反应的开启与SAR抗性的形成等。本文对高等植物防卫反应信号传导的研究进展进行了综述。     

水稻悬浮细胞的超低温保存研究

本研究分析了水稻悬浮细胞的生理状态和各种冷冻前处理等因素对超低温保存后细胞存活率的影响。结果表明,继代后培养３－５天,处于对数生长期的细胞,采用二步冷冻法,超低温保存后存活率最高,采用二步冷冻法,超低温保存后存活率最高。电镜超微结构观察显示,０．５ｍｏｌ／Ｌ,山梨醇预培养,１０％ＤＭＳＯ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇复合保护剂处理,液泡显著变小,数目明显减少,从而降低了细胞内自由水含量,数目明显减少,从     

抗冻蛋白应用于水稻悬浮细胞超低温保存的研究

AFP from winter flounder was utilized in cryopreservation of plant cells. During cryopreservation of rice suspension cells by two-step method, AFP at 0.01 mg/ml damaged the cells extremely. The data obtained at relatively high concentration, however, decreased the variability of survival rate. During vitrification of rice cells, AFP at 0.2 mg/ml enhanced the viability. However, high concentration AFP (> 5 mg/ml) decreased the recovery rate. Studies indicated that the results of application of AFP in cryopreservation were closely related to the concentration of cryoprotectant. The amount of ice crystal in environment, the concentration of AFP and cryoprotectant, and the composition of plasma membrane were several key factors affecting the results of AFP application. In mechanism analysis, the authors suggested that on one hand AFP can interact with ice crystal, which inhibits ice recrystallization and prevent the cells from devitrification. On the other hand, AFP also can interact with cell membrane, resulting in the ice growth around the plasma membrane.     

ras信号传导途径

ras信号传导途径是起始于酪氨酸激酶受体的一种重要的细胞信号传导方式。近年特别是1993年夏以来,一个比较完整的、以ras为中心的细胞信号传导途径被揭示。 ras是目前所知最保守的一族癌基因,对于细胞生长、增殖、发育及分化调控以及细胞恶性转化的重要性已众所周知。许许多多癌基因、生长因子和刺激细胞生长的化学物质对细胞生长的促进,都要求ras的参与。 ras基因的正常产物是一大族鸟苷酸结合蛋白,以两种状态存在:结合GTP分子的     

PAF受体及其信号传导

血小板激活因子是一种强力的磷脂介质,普遍认为它经其特异受体而起作用．最近已克隆出PAF膜受体的cDNA．文章综述了有关PAF受体及其信号传导研究的新进展.     

水稻体内的乙烯信号传导途径(综述)

迄今为止,水稻中已经鉴定的有关乙烯信号传导途径中的组分包括乙烯受体、EIN2和EIN3的同系物,CTR1、RTE1、EBF1/2和EIN5的同系物,这些组分在双子叶植物拟南芥和单子叶植物水稻中相对保守。然而,对水稻ein2和eil1突变体的研究发现,两突变体与野生型相比并没有明显的表型差异。由此可以推断,水稻中的乙烯信号可能比拟南芥中的更加复杂。水稻依靠乙烯调节生长发育的许多方面（如对低氧环境的适应）,这些在拟南芥中是不存在的,这表明水稻可能在乙烯信号传导途径中存在新的组分或新的机制。文章就水稻体内乙烯信号传导途径、乙烯信号调节以及乙烯在水稻中的应答进行综述。     

水稻悬浮细胞的超低温保存研究

本研究分析了水稻悬浮细胞的生理状态和各种冷冻前处理等因素对超低温保存后细胞存活率的影响。结果表明,继代后培养3—5天,处于对数生长期的细胞,采用二步冷冻法,超低温保存后存活率最高。电镜超微结构观察显示,0.5mol/L山梨醇预培养,10%DMSO 0.5mol/L山梨醇复合保护剂处理,液泡显著变小,数目明显减少,从而降低了细胞内自由水含量,增强细胞的抗冷冻能力。在上述合适的前处理和冷冻-化冻条件下,超低温保存水稻悬浮细胞的恢复生长率为58%,恢复生长的细胞转移到分化培养基上,可再生健壮绿苗, 移植到盆钵,在温室中长成正常结实的植株。     

适合水稻悬浮培养细胞蛋白质组分析的双向电泳技术

水稻是研究植物蛋白质组学的一个重要试材,从蛋白质的提取,裂解缓冲液的成份和浓度,第一向聚焦的条件,蛋白上样量和二向胶的选择方面,对水稻悬浮培养细胞的双向电泳条件进行了比较和优化。结果表明,采用甲醇/氯仿沉淀蛋白,裂解缓冲液中加入0.5%的两性电解质、并加入盐桥,17cm的胶条、850μg的上样量可达到较好的等电聚焦效果;8%-16%梯度胶分离蛋白较为适宜。     

抗冻蛋白应用于水稻悬浮细胞超低温保存的研究

本文将鱼类抗冻蛋白应用于植物细胞的超低温保存。结果表明,在水稻悬浮细胞的两步法保存中,浓度为0.01mg/ml的抗冻蛋白具有特别的负作用,相对高浓度的抗冻蛋白则能减小细胞存活率的波动性。在玻璃化法保存中,浓度为0.2mg/ml的抗冻蛋白能改善保存效果,更高浓度的抗冻蛋白(>5mg/ml)反而会降低保存效果。环境冰晶量、抗冻蛋白浓度、低温保护剂浓度和细胞膜组成等是影响抗冻蛋白使用效果的几大因素。作者在机理分析中认为,一方面,抗冻蛋白能和冰晶作用,抑制重冰晶,防止去玻璃化;另一方面,抗冻蛋白也能和细胞膜作用,诱发膜表面冰晶形成。     

死亡受体的信号传导途径及其调节机制

细胞凋亡是多细胞生物保证个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必需的。凋亡细胞表面有特定的感应器即死亡受体,死亡受体可以接受胞外的死亡信号而激活细胞内的凋亡机制。本文简要综述了死亡受体的信号传导途径及其调节机制的研究进展。死亡受体CD95、TNFR1和DR3的信号传导途径相似,均有死亡结构域结合蛋白FADD和死亡效应蛋白caspase-8的参与,而DR4和DR5的信号传导途径研究得不是十分清楚,可能存在FASS依赖性和不依赖性两条不同的信号传导途径。     

适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法

目的:建立适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法。方法:采用酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法、三氯乙酸-丙酮沉淀法和硫酸铵沉淀等3种方法制备水稻悬浮细胞外分泌蛋白,并进行双向电泳分析;利用Western印迹对候选方法提取的外分泌蛋白进行纯度检测。另外,还利用质谱技术对从双向电泳胶上随机挑选的9个蛋白点进行测定,并用SignalP 3.0 Server对测定的蛋白点进行信号肽预测。结果:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法提取的外分泌蛋白得率最高,且双向电泳图谱清晰,并能检测到最多的蛋白点;Western印迹表明利用该法所提取的外分泌蛋白未被细胞内蛋白质污染。利用质谱技术鉴定了随机挑选的9个蛋白点,SignalP 3.0 Server分析表明其中6个蛋白含有信号肽。结论:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法是一种适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法。     

Ras蛋白与信号传导

Ｒａｓ介导的信号传导途径是近几年研究热点之一,这是因为许多细胞受体介导的信号通路和Ｒａｓ途径相关。Ｒａｓ蛋白广泛存在生物界,在信号传导途径中起着极为重要的开关作用。ＰＴＫ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫＫ和ＭＡＰＫ通过复杂的蛋白与蛋白之间的相互作用以及蛋白质磷酸化,将外界信号传入细胞中从而对细胞生长产生影响。本文对Ｒａｓ介导的信号传导途径的最新研究近展进行综述。     

植物细胞中的钙离子传导

近年来的研究表明，Ca2＋在植物细胞的信号转导过程中一直起着非常重要的作用。通常，生活细胞内游离钙的浓度保持在30—200nmol/L的范围内, 但来自细胞外或细胞内的各种刺激，则可引起细胞内游离钙浓度的瞬时变化，从而使Ca2＋通过不同的信号转导途径，直接或间接地调节细胞生理和生化过程。在植物细胞的生命活动过程中，Ca2＋的调节功能表现为多种多样，其中包括离子运输、细胞运动、糖类代谢、细胞分裂、细胞分泌以及基因表达等等。有人研究发现，在植物细胞间隙、细胞壁以及液泡中Ca2＋的浓度远高于细胞内游离钙浓度，它们是细胞质…     

花生四烯酸诱导肌球蛋白磷酸化被抑制的平滑肌细胞 迁移的信号传导途径

在应用肌球蛋白轻链激酶特异抑制剂ML-7抑制了肌球蛋白轻链磷酸化后,花生四烯酸(arachidonic acid,AA)仍可诱导兔血管平滑肌细胞（SM3）发生迁移.为了进一步阐明其信号传导途径,应用多种信号抑制剂,采用免疫印迹、Boyden小室和提取细胞膜蛋白等实验方法,对上述迁移作用的信号传导途径进行了深入的研究.结果显示,PTX（Gi蛋白抑制剂）、U73122（PLC抑制剂）、staurosporine (PKC抑制剂)、PD98059（ERK1/2抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）分别可拮抗上述AA诱导的SM3细胞迁移作用,而SP600125（JNK抑制剂）的作用较弱.免疫印迹结果显示,AA可提高SM3细胞中PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK信号的磷酸化水平,呈时间依赖性, PTX或U73122可抑制上述作用;staurosporine可抑制由AA 引起的ERK1/2和JNK的磷酸化水平增强,但对p38的磷酸化水平无影响.还发现AA可促进PLCβ2的细胞膜移位, PTX可抑制其作用.上述结果表明,当肌球蛋白轻链的磷酸化被抑制后, AA可通过Gi蛋白的活化促进PLCβ2向细胞膜移位,进而通过激活PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK等信号转导途径而诱导SM3细胞发生迁移     

从水稻根部悬浮培养细胞分离原生质体及植株再生

以长香稻(Oryza sativa L．)(糯稻)的幼嫩种子根为材料,在Ms和N6培养基上诱导产生结构松软而分散的愈伤组织,经过AA液体培养基振荡悬浮培养,悬浮培养细胞经酶解后得到了活性较高的原生质体,试验结果表明这是分离原生质体较理想的材料。在附加2,4-D lmg／L(以下单位同)、KT(激动素)0．2、各氨酰胺876、天门冬酰胺266的Ms琼脂糖培养基中,诱导出了大量愈伤组织,在含KT2、NAA(α-萘乙酸)0．2、zT(玉米素)0．2、cH(水解酪蛋白)1000和4％椰子汁的N6培养基中成功地诱导出了由原生质体再生的植株。当代原生质体再生植株能正常开花、结实、产生种子;染色体数均为二倍性(2n＝24),最显著的特点是结实率低,穗粒数减步、生育期延迟。