VITEK-2 Compact 仪器法鉴定棒状杆菌属细菌的方法学评价

【摘 要】 目的 评价全自动微生物鉴定系统鉴定棒状杆菌属细菌的准确率及可靠性。方法 分别选用VITEK-2 Compact系统、API CORY系统、Vitek-32系统鉴定37株纹带棒状杆菌，5株无枝菌酸棒状杆菌，两种方法间的比较采用卡方检验，同时以“API CORY系统”为金标准，计算VITEK-2 Compact仪器法的特异性、敏感性。结果 经卡方检验，VITEK-2 Compact系统在鉴定纹带棒状杆菌方面具有很好的一致性，特异性为100%，敏感性为100%，kappa值为1.0；VITEK-2 Compact系统在鉴定无枝菌酸棒状杆菌方面一致性较差，kappa值为0。API鉴定为纹带棒状杆菌的37株菌，VITEK-32均错误的鉴定为干燥棒状杆菌，5株无枝菌酸棒状杆菌在Vitek-32鉴定系统中，生长不良。结论 VITEK-2 compact在鉴定纹带棒状杆菌方面较准确可靠，但在鉴定其他棒状杆菌方面还需进一步研究。Vitek-32系统不能准确的鉴定棒状杆菌属细菌。     

临床分离纹带棒状杆菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因突变的研究

目的 探讨gyrA 、parC基因的改变与纹带棒状杆菌耐喹诺酮类抗生素的关系.方法 采用微量稀释法测试纹带棒状杆菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星、万古霉素的敏感性.PCR扩增检测gyrA和parC基因喹诺酮类耐药决定区相关片段并测序,在GenBank中进行Blast及BlastX分析并观察氨基酸突变位点,用NcoI酶进行PCR-RFLP.结果 37株纹带棒状杆菌对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率为94.6％,30株菌发生双突变(87位Ser突变为phe,91位Asp突变为Ala),5株菌单点突变(87位Ser突变为phe).PCR-RFLP经NcoI酶切后显示,敏感株和耐药株均产生3个条带.结论 纹带棒状杆菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率较高,对万古霉素全部敏感.纹带棒状杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药机制主要是gyrA突变引起的,尤以双突变占优势.纹带棒状杆菌不携带parC基因,不编码拓扑异构酶Ⅳ.     

纹带棒状杆菌耐药特征研究

分析我国山东地区临床分离的纹带棒状杆菌对常用药物的敏感性,并对其耐药机制进行探讨。收集该省某三甲医院临床样本,用哥伦比亚血平板培养基对纹带棒状杆菌进行分离培养,用微量肉汤稀释法检测12种常用抗生素对纹带棒状杆菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对耐药菌株的耐药基因[aph(3”)-Ⅰb、aph(6)-Ⅰd、aac(6’)-Ⅰb, tetW, ermX, gyrA]进行扩增、测序比对,以探讨相关的耐药机制。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)对耐药基因ermX、tetW进行定量分析,采用公式2^－ΔΔCt计算基因相对表达量差异倍数。结果显示,共分离出纹带棒状杆菌83株,且均为多重耐药菌。对万古霉素、利奈唑胺表现为完全敏感;对红霉素、环丙沙星、克林霉素表现出完全耐药,对四环素的耐药率为86.7%(72/83),对庆大霉素的耐药率为38.6%(32/83);ermX基因的检出率为100%(83/83),tetW基因的检出率为88.0%(73/83),aph(3”)-Ⅰb基因的检出率为36.1%(30/83),aph(6)-Ⅰd基因的检出率为37.3%(31/83),aac(6’)-Ⅰb基因的检出率为15.7%(13/83)。ermX和tetW基因的相对表达量均有所变化,但变化不明显。内在型耐药(cMLS)是菌株对红霉素耐药的潜在机制。结果提示,本研究调查医院的纹带棒状杆菌耐药严重,耐药谱较为广泛,须引起医院和实验室的重视。     

马尾松染色体荧光带型的研究

对马尾松有丝分裂中期染色体荧光带纹的分析结果表明,其色霉素Ａ的染色体的荧光带赤;１对为着丝粒区和臂间我均有带纹的中间着丝染色体。６对为臂间区有带纺的中间着丝粒染色体;２对为着丝粒区有带纹的中间着丝粒染色体;３对无带纹的中间或近中着丝粒染色体;１对为着丝粒区有带纹的近中着丝粒染色体。     

棒状杆菌中质粒DNA的快速检测方法

在棒状杆菌质粒DNA快速检测中,比较了三种方法:强碱法、快裂法和我们设计的酶法。用强碱法抽提的质粒带很淡,快裂法其次,且不能区别两个分子量相近的质粒;而用酶法则显带清晰,且能很好地区分两个大小相近的质粒,分辨率高,认为在棒状杆菌质粒快速检测中是一种很好的方法。     

鼠棒状杆菌PCR检测方法的建立及其应用

目的建立鼠棒状杆菌PCR检测方法并应用于临床样本检测。方法用脑心浸出液培养基复苏、培养鼠棒状杆菌（corynebacteriumkutscheri,C．kutscheri）并提取基因组DNA作模板;根据GenBank中C．kutsche6的16S基因序列设计合成引物,建立鼠棒状杆菌PCR检测方法并进行敏感性和特异性的评价;人工感染昆明鼠,建立小鼠棒状杆菌感染模型,采集肝脏和肾脏,提取DNA进行检测。结果成功建立了鼠棒状杆菌PCR检测方法,该方法可检测到100个阳性质粒;对小鼠沙门氏菌、肺炎链球菌和巴氏杆菌无交叉反应;全部8个人工感染样本全部检测为阳性。结论建立的鼠棒状杆菌PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可作为鼠棒状杆菌感染的快速检测方法。     

细胞壁缺陷对白喉棒状杆菌致病性影响的研究

检测白喉棒状杆菌稳定L型对动物的致病性,探讨细胞壁缺陷对白喉棒状杆菌致病性的影响及其可能的分子机制。采用氨苄青霉素在非高渗培养基内诱导并获得产毒性白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物。收集白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物,将收集的高于细菌型10 000倍浓度的白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物皮内注射家兔,观察局部注射部位皮肤或全身的病理改变。分别采用对流免疫电泳(CIEP)和SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测白喉棒状杆菌稳定L型可溶性代谢产物中的白喉毒素蛋白质。结果显示,白喉棒状杆菌稳定L型不能引起动物局部或全身发生异常表现,在其可溶性代谢产物中并未检测到白喉毒素蛋白质。提示细胞壁缺陷变异可影响白喉棒状杆菌产生白喉毒素蛋白质,从而使其丧失了产生外毒素致病的作用。     

谷氨酸棒状杆菌异源合成萜类化合物的研究进展

萜类化合物具有可观的商业价值,但生产过程复杂,产量低,利用微生物异源合成萜类化合物已成为热点。谷氨酸棒状杆菌内含合成萜类色素的途径,具有异源合成萜类化合物的天然优势和研究前景。首次对谷氨酸棒状杆菌合成萜类化合物进行了综述,从萜类合成途径、关键酶和全局调控机制三个方面进行了途经介绍。概述了谷氨酸棒状杆菌中单萜、倍半萜、四萜类化合物的异源合成,并对利用谷氨酸棒状杆菌高效合成萜类化合物所需解决的问题进行讨论,为谷氨酸棒状杆菌高效合成萜类化合物提供建议。     

棒状杆菌发酵基因工程研究进展

传统的育种方法由于本身的缺陷受到了基因工程育种的强有力挑战,基因工程技术应用于发酵工业创立了全新的发酵基因工程。传统发酵菌种棒状杆菌的分子生物学研究欣欣向荣,棒状杆菌的受体系统、载体系统以及ＤＮＡ转移技术都已取得长足进展。对棒状杆菌的分子遗传机制的阐明使得构建表达载体并表达目的基因成为现实。利用基因突变和基因重组技术选育优良的棒状杆菌发酵菌种,业已取得明显成效。     

细胞壁缺陷白喉棒状杆菌致病作用的观察及其毒力基因检测

目的比较白喉棒状杆菌亲代细菌型及其稳定L型动物致病性的差异,了解白喉棒状杆菌稳定L型变异的特点,探讨其变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。方法用氨苄青霉素在非高渗培养基内人工诱导产毒性白喉棒状杆菌为稳定L型。采用白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物皮内感染家兔,观察局部感染部位皮肤或全身的病理改变。采用微量法提取白喉棒状杆菌稳定L型的染色体DNA,用Tox基因特异性引物进行PCR扩增以检测毒素蛋白结构基因,并进行序列测定和分析。结果白喉棒状杆菌在氨苄青霉素作用下可发生细胞壁缺陷而成为L型,白喉棒状杆菌稳定L型不能引起动物局部或全身发生异常表现,该稳定L型的传代培养物可仍然保留同其亲代细菌型一致的Tox基因及其核苷酸序列。结论提示细胞壁缺失将导致白喉棒状杆菌与产生毒素蛋白有关结构基因在宿主菌细胞内的表达受到抑制,以致使白喉棒状杆菌稳定L型丧失了产生外毒素致病的作用。     

短小棒状杆菌对小鼠实体瘤及免疫功能的影响

目的研究短小棒状杆菌对H22荷瘤小鼠及其免役功能的影响。方法采用抑瘤实验、小鼠碳廓清实验、MTT法观察短小棒状杆菌对小鼠实体瘤和免疫功能的影响。结果短小棒状杆菌可使荷瘤小鼠的碳廓清指数、胸腺指数、脾脏指数升高,并由刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)诱导体外小鼠T、B淋巴细胞增殖,能够抑制小鼠实体瘤生长。结论短小棒状杆菌能够增强小鼠机体免疫功能,并有抑瘤作用。     

赤斑羚和斑羚核型比较研究

本文对赤斑羚（ＮａｅｍｏｒｈｅｄｕｓＣｒａｎｂｒｏｏｋｉ）和斑羚（Ｎ．ｇｏｒａｌｇｒｉｓｅｕｓ）的染色体Ｇ带、Ｃ带和Ａｇ－ＮＯＲｓ的数目、分布等作了较详细的比较研究。赤斑羚２ｎ＝５６全部为近端着丝粒染色体,Ｎ．Ｆ＝５４;斑羚２ｎ＝５４,除Ｎｏ．３是亚中着丝粒染色体外,具有丰富的异染色质;二者Ｇ带带纹相似程度高,其Ｎｏ．３长臂Ｇ带带纹相似。斑羚的Ｎｏ．３短臂与赤斑羚Ｎｏ．２７近端着丝粒染色体的大小、     

库特氏棒状杆菌败血症1例报告

库特氏棒状杆菌败血症１例报告云南省玉溪地区医院，云南省医学微生态研究中心６５３１００陈宗淦，鲁慎文，朱江，刘姝惠云南省玉溪地区卫校史云丽我们从１例发热、贫血患者骨髓和血液中均分离出库特氏棒状杆菌，现报告如下。１．临床资料患者，女，５２岁，回族，工人，...     

黄牛泌乳系统正常菌群的检测

采用稀释滴种法对30头健康黄牛泌乳系统的10种主要正常菌群分四个部位(乳头、乳池、输乳管和腺泡)进行定性、定量检测。结果有6种菌群被检测出,按数量由多至少依次为棒状杆菌、乳杆菌、葡萄球菌、芽胞杆菌、双歧杆菌和肠杆菌。乳头的优势菌群为棒状杆菌、芽胞杆菌和葡萄球菌;乳池、输乳管和腺泡的优势菌群均为棒状杆菌和乳杆菌。黄牛泌乳系统各正常菌群的数量均较少,远低于其他孔道系统。     

谷氨酸棒状杆菌集成细胞网络的构建与结构分析

谷氨酸棒状杆菌是一种重要的传统工业微生物,其基因组学和分子遗传操作工具的快速发展使得谷氨酸棒状杆菌具备了作为新型细胞工厂的潜力。但是,相对于大肠杆菌等模式生物,对于棒杆菌的代谢调控研究较少,特别是目前还缺乏谷氨酸棒状杆菌集成细胞网络的研究,这一现状阻碍了谷氨酸棒状杆菌的系统生物学研究和大规模菌种理性设计优化。文中综合应用公共数据库、文献数据库资源,首次构建了谷氨酸棒状杆菌的集成细胞网络,包含1 384个反应,1 276个代谢物,88个调节子,999对转录调控关系。其转录调控可分为5层,代谢网络呈现出清晰的bow-tie结构。文中还以赖氨酸的生物合成为例,提出了一种提取代谢调控子网络的新方法,这对氨基酸等产品高产生物机制的研究和工程菌株的重新设计具有指导意义。     

大麦G－带变动性以及与染色粒的一致性分析

以大麦为材料,进行了Ｇ－带带纹变动性分析以及Ｇ－带与减数分裂粗线期染色粒的比较。有丝分裂早中期至中期两个不同时期Ｇ－带带纹总数减少３６％,染色体组的绝对长度缩短２５％,带数减少的幅度大于染色体长度缩短的幅度。染色体组中每条染色体之间带纹减少的比例不尽相同,变幅在０．２９－０．５０之间。不同染色体绝对长度减少的幅度在０．２７－３．７０μ之间。从早中期至中期,每单位染色体绝对长度带数具相对减少的趋势。选择第６染色体进行的比较显示,减数分裂的染色粒与有丝分裂的Ｇ－带带纹之间具有很好的对应关系,Ｇ－带带纹和染色粒间的数目、位置和着色程度上都具一致性。对Ｇ－带性质和植物中Ｇ－带的应用等问题进行了讨论。     

厌氧棒状杆菌与双歧杆菌抗小鼠腹水瘤活性的比较

厌氧棒状杆菌和双歧杆菌分别制成死菌苗,在相同实验条件下观察两菌对小鼠腹水瘤的抗瘤效果。结果显示,两种菌苗均有显著的抗瘤活性,而厌氧棒状杆菌抗瘤作用更强于双歧杆菌,特别在延长观察期尤为显著。应用两菌苗后,脾指数均有不同程度升高,未见明显毒性作用。     

大麦G—带变动性以及与染色粒的一致性分析

以大麦为材料,进行了Ｇ－带带纹变动性分析以及Ｇ－带与减数分裂粗线期染色粒的比较,有丝分裂早中期至中期两个不同时期Ｇ－带带纹总数减少３６％,染色体组的绝对长度缩短２５％。带数减少的幅度大于染色体长度缩短的幅度,染色体组中每条染色体之间带纹减少的比例不尽相同,变幅在０．２９－０．５０之间,不同染色体绝对长度减少的幅度在０．２７－３．７０μ之间,从早中期至中期,每单位染色体绝对长度带数具相对减少的趋势。     

应用纤维素结合域标签构建谷氨酸棒状杆菌表达系统

为优化谷氨酸棒状杆菌表达系统的纯化工艺,合成里氏木霉的CBD基因,将其与谷氨酸棒状杆菌分泌表达载体pXMJ19-sp连接,构建以CBD为纯化标签的重组载体pXMJ 19-sp-CBD.在该载体中插入GFP基因并转化至谷氨酸棒状杆菌,可获得分泌表达融合蛋白GFP-CBD的重组菌.该菌经IPTG诱导后的发酵液在紫外灯下显示强烈的绿色荧光,重组蛋白的分泌表达量达200 mg/L.利用CBD标签对纤维素柱的可逆性吸附,可直接对谷氨酸棒状杆菌分泌到培养基中的重组蛋白进行纯化,从而简化工艺和降低成本,为工业化大生产奠定基础.     

短棒状杆菌外用制剂安全性的评价

研究短棒状杆菌外用剂型,为体外用药开辟新途径。将短棒状杆菌接种在适宜培养基上,连续扩增传代,培养终液稀释成不同浓度。依照新药管理办法,在动物体内进行各种安全性试验。结果显示:经急性毒性试验、长期毒性试验、生殖毒性试验,皮肤光敏试验、局部刺激试验等测定,在动物体内未见到毒性反应。该试验为短棒状杆菌外用制剂的开发提供了安全性依据。