野生大鲵及其人工繁殖后代的遗传多样性分析

中国大鲵（Andrias davidianus）,俗称“娃娃鱼”,隶属两栖纲Amphibia、有尾目Caudata、隐鳃鲵科Cryptobranchidae、大鲵属Andrias“。大鲵是我国特有的珍稀野生动物,是现存的两栖动物中最大的一种。近几十年来,随着人口的膨胀及人类开发自然资源强度的增强,大鲵赖以生存的环境受到严重破坏,种群数量减少,种群内年龄结构趋向小型化。特别是由于大鲵有很高的经济价值,人为的捕杀导致了它的天然资源严重衰竭。随着大鲵人工繁殖及规模化繁育技术的成功,我国大鲵人工繁殖种群的数量在逐年增长,开展大鲵保护遗传学的研究,对大鲵的人工增殖和种质资源管理有重要的意义。     

大鲵性腺发育的组织学观察

大鲵Megalobatrachus davidianus(Blanchard),俗称娃娃鱼,是我国珍贵的大型两栖动物。分布在我国中、南部各省。大鲵经济价值高,营养丰富,肉味鲜美,常作为珍馔佳肴,并是一种珍奇的观赏动物。 大鲵的天然繁殖率低,加之近年人工捕捉量大,致使部分地区出现资源日趋衰退的迹象。由于大鲵已列为我国第二类重点保护的特产动物,因此,如何保护大鲵资源和人工增殖与合理利用资源是极为重要的问题。近年来大鲵产区的有关部门开展了对这一珍贵资     

小鲵家族

提到小鲵,人们自然而然会想到大鲵。大鲵的正式名称为＂中国大鲵＂,是现存的两栖动物中体型最大的一种,一般长约60-70厘米,体重5-6公斤,最大个体长达1.8米,重达30公斤。由于大鲵的叫声像婴儿的啼哭声,因此又名＂娃娃鱼＂。大鲵生活在水质清澈、低温和幽暗的溪流或溶洞中,     

低温和超低温保存对中国大鲵成熟精子的影响

中国大鲵Andrias davidianus是中国特有的一种濒危有尾两栖类动物,为了保护这一珍稀物种并且为中国大鲵人工辅助繁育建立一套可靠的技术,对中国大鲵的精子在0—4℃下低温短期保存和在液氮中超低温长期保存进行了研究。研究表明中国大鲵精子原液在常温下一般仅存活3—5h,4℃下能存活6d,0℃下存活时间可达9d。精子原液中添加Ringer氏液或Holtferter氏液,精子存活率比原液保存显著降低。在改良的超低温冻存条件下,中国大鲵精子在液氮中保存两周后解冻,精子复苏率可达10%—15%。利用扫描和透射电镜观察冻融前后中国大鲵精子的超微结构,发现受冷冻损伤精子质膜出现膨胀、破裂;精子穿孔器和轴丝显著弯曲,甚至断裂;波动膜明显脱落或膜结构损坏;精子线粒体嵴变形。结果表明,超低温冻存导致部分中国大鲵精子超微结构发生变化而产生冻伤,进而导致精子活力、复苏率下降。研究为建立规范化的中国大鲵精液保存程序和中国大鲵规模化人工繁育提供重要参考。     

中国大鲵的活动节律及繁殖行为描记

采用定时定点观察法,对仿生态条件下养殖的中国大鲵(Andrias davidianus)活动节律及繁殖行为进行了观察。结果表明,大鲵活动具有明显的昼夜节律变化,白天隐藏在洞穴中不活动,每天20:30时部分大鲵开始出洞活动,21:00时至次日凌晨1:00时为活动高峰期,1:00时后部分大鲵开始陆续回到洞穴,3:00时后又全部隐藏在洞穴中;大鲵的夜间活动随季节的变化而发生周期性变化,8～9月出洞活动的大鲵数量达到一年之中的最大值。大鲵尤其是雄鲵在繁殖季节表现出明显多样的繁殖行为:①推沙行为;②求偶行为,包括聚集、露头、巡视、追随、尾阴探究、亲吻、邀请和爬跨8种行为型;③冲凉行为;④护卵行为;⑤婚配行为。     

张家界大鲵人工放流效果及其影响因素分析

大鲵(Andrias davidianus)是我国特有的两栖动物, 由于栖息地破坏和人类过度捕杀等, 种群数量急剧下降, 被列为我国II类保护野生动物。为探索大鲵人工放流的有效方法, 实现野生大鲵资源增殖, 作者对2002–2008年间在湖南张家界大鲵国家级自然保护区内进行的大鲵人工放流活动与放流效果进行了评估, 并通过对放流点的隐蔽物、水质及饵料生物等生境特点的分析, 探讨影响放流成败的因素。该保护区内共在9处大鲵原栖息地进行了11次人工放流活动, 共放流各种规格大鲵995尾, 其中4次成功。成功放流的大鲵为1–4.5 kg的性成熟个体, 雌雄比在1:1和1:1.5之间, 成功放流点均有良好的后期管理措施, 如建立保护站, 补充饵料等。虽然所选择的多数放流点生境基本能满足大鲵生长和繁殖的要求, 但由于受水质、饵料或安全某一因素的制约, 野生大鲵资源增殖效果不明显, 导致放流失败。因此我们认为依据野生大鲵繁殖的生境特征标准, 科学选择放流地点, 选择性成熟的大鲵在春季放流, 并进行完善的后期跟踪保护, 可能是大鲵人工放流成功和实现资源增殖的有效途径。     

我国的稀有珍贵动物—大鲵

两栖动物约近三千种,其中值得重视的是产于我国内陆水域的大鲵。大鲵作为一种珍稀动物,在我国虽然分布存在于广大的区域内,但长期以来,由于忽视了对它的保护和合理利用,致使产地资源数量严重下降和衰减,甚至有的大鲵产区濒临灭绝;笔者近年来对大鲵的人工增殖方面做了大量的工作,有关大鲵的资源保护提出了建设性的意见。     

多普勒B超鉴定中国大鲵性别

首次报道了从影像学水平上鉴定中国大鲵性别的研究结果。采用多普勒B超,常规方法直接扫描雌雄中国大鲵腹部,并记录大鲵的精巢或卵巢的形状、内部回声。实验结果表明,雌雄中国大鲵的检测结果存在明显的差畀,在雄性中国大鲵的腹部,可检测到精巢组织;在雌性中国大鲵的腹部,可检测到为卵巢组织和卵泡。初步分析了实验结果,并认为将多普勒B超鉴定法与泄殖孔法鉴定相结合可以作为中国大鲵性别鉴定的可靠方法。     

中国大鲵研究近况

在中国大鲵研究概况一文的基础上,收集１９９１－１９９７年资料,从形态、胚胎、生态、生化、人工养殖以及建议等方面,对中国大鲵最近的研究概况做了论述。     

中国大鲵Sox2基因全长cDNA序列的克隆及组织表达分析

Sox2是Sox转录因子超家族B1亚族成员之一,对胚胎发育和神经细胞的维持有重要作用。本研究以中国大鲵(Andrias davidianus)性腺组织为材料,通过RT-PCR和RACE方法成功克隆到中国大鲵Sox2基因全长2 233 bp c DNA。系统进化树分析表明,中国大鲵与红腹蝾螈、火焰蝾螈及六角恐龙聚成一支,这与其在两栖类中分化较早相一致。实时荧光定量PCR检测Sox2基因在中国大鲵组织表达结果显示,其在性腺中的表达量最高,肾脏中次之,在肠道中几乎不表达,表明Sox2基因可能在大鲵性腺发育和生长发育过程中发挥了重要作用。这为今后进一步研究Sox2基因在大鲵性别分化中的功能提供了参考。     

商南地区大鲵的种群组成

大鲵(Megalobatrachus davidfanus)是我国特有的珍贵动物。过去泛捕乱猎,大鲵资源遭到一定程度的破坏,有的地方濒于绝迹。因此,研究大鲵的种群组成,了解资源概况,颇有必要。1978年6月,我们在商南县腰庄公社,对大鲵的种群组成作了观测;1979年9—10月,在太白县做了大鲵的人工繁殖试验;又调查了大鲵的收购数字。现将大鲵种群组成的资料汇总整理如下,以资参考。大鲵种群组成的分组依据我们在商南县腰庄清油河上游,长500米,宽5—10米的河流中共捕获大鲵49尾。根据     

中国大鲵促甲状腺激素受体的克隆及序列分析

本实验以大鲵脑组织为材料,通过RT-PCR和RACE方法成功获得了中国大鲵Andrias davidianus促甲状腺激素受体(TSHR)cDNA全长序列。该序列编码585个氨基酸,具有典型的G蛋白偶联受体家族的特点,有4个N-糖基化位点,7个跨膜α螺旋。同源分析显示,大鲵TSHR与热带爪蟾、变色龙、人的TSHR同源性分别为70%、70%和67%。同时大鲵与其它脊椎动物TSHR在结构上存在一些差异,如缺乏前导序列、胞外部分序列缩短、没有富含亮氨酸的重复单位(LRRs)等,大鲵TSHR结构上的这些差异是否与其不同的生理功能相关有待进一步研究。利用邻接法对部分脊椎动物TSHR氨基酸序列构建分子系统树,结果显示有尾目大鲵为两栖动物中较早分化的一支,表明其进化地位较原始。RT-PCR组织分布分析发现,TSHR基因在大鲵的甲状腺外组织也有表达,其中性腺组织表达量最高,这可能暗示TSHR与大鲵的生殖调节有关。     

患病大鲵中弗氏柠檬酸杆菌的分离与鉴定

【目的】确定导致大鲵(Andrias davidianus)细菌性感染死亡的病原。【方法】从大鲵肝脏中分离细菌,通过Biolog微生物自动鉴定系统及分子生物学方法对纯培养的细菌进行鉴定,再用大鲵和鲫鱼分别进行人工感染试验,以确定分离菌的致病性,同时对分离到的病原菌进行药物敏感试验。【结果】从患病大鲵肝脏中分离到一株致病菌JZ01,经人工感染健康大鲵,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病鲵体内再次分离到相同的病原菌。该致病菌对健康鲫鱼也有致病性。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为弗氏柠檬酸杆菌。药物敏感性试验表明,该菌株对氨曲南、头孢三嗪、先锋噻肟等9种药物高度敏感。【结论】弗氏柠檬酸杆菌是大鲵的一种致病菌。本文在国内外首次报道了该菌对大鲵具有致病性。     

珍贵的两栖动物—酉阳的大鲵

大鲵属于两栖纲,有尾目,隐鳃鲵科,是我国列为二类保护的珍贵动物之一。在酉阳全县四十多条大小江河中,二十六条江河有大鲵分布,最高年产量达到2700多公斤,一般均在1500公斤左右。酉阳的大鲵多呈黑色,少数也有棕褐色,体表光滑湿润,体扁平,头宽而扁圆,口大,眼小;四肢短而肥实,前脚四趾,后脚五趾,行动笨拙,爬行缓慢。一般体重一、二十公斤,大的三十公斤,甚至有达五十公斤重的。大鲵食性很广,通常潜伏在巨石下面或洞口,寻机猎食水下鱼、虾、蟹等活食。有时还捕捉蛙、蛇等食,生命力极强。当地人们曾将大鲵的皮剥去,发现一、二天后还照样呼吸;曾剖…     

大鲵油的水酶法提取及精制过程中脂肪酸组成的变化

为研究大鲵油脂肪酸的营养价值,通过水酶法提取大鲵油,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析粗大鲵油及其精制(脱胶、脱酸、脱臭)过程中脂肪酸组成的变化以及精制草鱼油中脂肪酸组成的差异。研究结果表明:水酶法提取大鲵油的最佳条件为酶解温度60℃,pH6.5,酶添加量0.75%,酶解时间90 min。所得粗大鲵油达到SC/T 3502-2016粗鱼油二级标准。研究发现,在粗大鲵油中共检出脂肪酸20种,精制过程中脂肪酸组成基本不变,精制后大鲵油中不饱和脂肪酸和必需脂肪酸的相对含量分别达74.76%和25.17%,均高于精制草鱼油中不饱和脂肪酸(61.08%)与必需脂肪酸(18.90%)的相对含量,由此可知,当前方法对大鲵油的提取较为有效,且大鲵油营养价值较草鱼油高。     

温度对禁食大鲵碳氮代谢的影响

本文研究温度对禁食大鲵碳代谢和氮代谢的影响,结果表明：随着温度的升高、禁食大鲵的碳代谢和氮代谢均上升,其代谢率升高,禁食大鲵的代谢率很低,１５℃时,每日每公斤体重内的蛋白质消耗为０．７克左右,从理论上证明大鲵的耐饥能力很强,雄性大鲵比雌性大鲵的代谢率稍高。     

大鲵栖息地环境的初步研究

2001年4月至8月,对湖南省壶瓶山自然保护区河流中大鲵(Andrias davidianus)的栖息洞穴,首次使用量化指标进行分析。通过主成分分析发现,大鲵栖息洞穴处的水深、洞口宽、水流速度和河底的组成是影响大鲵选择洞穴的主要因子,而海拔高度和洞口高的影响不大。同时,对重庆市酉阳县、陕西省太白县、河南省卢氏县大鲵自然保护区和新安县青要山大鲵自然保护区大鲵的栖息河流特征进行了调查。结果表明大鲵的栖息河流类型可分为溪流、U型河流、平底型河流和暗河4类,而且大鲵对其栖息洞穴的质量要求较高。     

人工养殖大鲵全长与体重关系的回归分析

大鲵(Andrias davidianus)隶属两栖纲,有尾目,隐鳃鲵科,大鲵属,为我国特有的珍稀濒危两栖动物。目前在我国一些主要历史分布区掀起了一股大鲵养殖高潮,但是对当前养殖效果缺乏成熟的评价手段,因此本研究通过对陕西省汉中市和安康市两大鲵养殖场养殖的1530尾大鲵的体重和全长进行实际测量,利用SPSS分析软件对数据进行了回归分析。结果表明,体重与全长之间存在极显著的相关关系,体重与全长之间的关系主要表现为幂函数关系,其关系式为:Y=0.010X2.867。本研究的顺利完成,为今后评价大鲵的人工养殖效果提供了科学的方法。     

大鲵的野外生长观察

大鲵的标记流放:1985年10月,在陕西省太白县水柏河(1200～1450米)做了大鲵标记流放试验。河宽1.5～3米,深0.4～0.8米,工作区2.9公里。先后捕到大鲵23尾.称量、标记后将之放回河中。大鲵标记采用断指(趾)方法,见图1。     

中国大鲵生殖激素的初步研究

首次全面报道了中国大鲵6项生殖激素的研究结果.采用电化学发光技术,检测了雌雄中国大鲵在繁殖期与非繁殖期的血清中垂体泌乳素、卵泡生成激素、黄体生成激素、雌二醇、孕酮和睾酮6项生殖激素的含量.实验结果表明,雌雄性中国大鲵在繁殖期间与非繁殖期间的6项生殖激素检测结果没有明显的差异,对中国大鲵血清中的生殖激素与繁殖期的相关性进行了初步探讨,为中国大鲵生殖内分泌学的研究和人工繁殖积累了资料.