红苋P104种子谷蛋白的电泳分析

通过单向不平变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＩＥＦ×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成,亚其分子量和等电点分布。谷蛋白的双向电泳图谱可分辨出１００多个亚基成分,其主要亚基为：５４ｋＤ（ｐＩ７．１５）;３３ｋＤ（ｐＩ５．８２）;３１ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ６．７０;ｐＩ６．６５）;２２ｋＤ（ｐＩ８．３４）;２     

不同品种花生种子蛋白质的电泳分析

对中国花生（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）５种不同类型的４６个栽培品种的种子蛋白质进行电泳分析。ＳＤＳＰＡＧＥ和ＩＥＦＳＤＳＰＡＧＥ（双向电泳）的结果显示,不同品种的花生种子蛋白多肽组成存在４种类型。与初步纯化的花生球蛋白及伴花生球蛋白的ＳＤＳＰＡＧＥ结果比较,花生种子蛋白组成的主要差异在于花生球蛋白亚基组成的不同,其中类型Ⅰ花生球蛋白主要含有４１ｋＤ、３８５ｋＤ和２个１８ｋＤ亚基,类型Ⅱ主要含４１ｋＤ、３８５ｋＤ、３７５ｋＤ和３个１８ｋＤ亚基,类型Ⅲ主要含４１ｋＤ、３８．５ｋＤ、３６．５ｋＤ和３个１８ｋＤ亚基,类型Ⅳ主要含４１ｋＤ、３８．５ｋＤ、３７５ｋＤ、３６．５ｋＤ和３个１８ｋＤ亚基。不同品种的伴花生球蛋白多肽组成基本一致。对不同类型８个品种种子蛋白的氨基酸组成进行测定,发现类型Ⅰ的含硫氨基酸含量较高。     

盐生杜氏藻生油—3—磷酸脱氢酶的分离化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,Ｂｈｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸（Ｇ－３－Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）得到比活为１２．６ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４－２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶     

玉米籽粒贮藏蛋白组成及特性的研究

利用等电聚焦（ＩＥＦ）电泳和不连续醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＮＡＵ－ＰＡＧＥ）对玉米籽粒贮藏蛋白的等电点（ｐＩ）和在Ｆ１中的遗传表现以及贮藏蛋白在胚和胚乳中的分布进行研究,结果表明：（１）玉米籽粒贮藏蛋白的ｐＩ在３．５￣８．４５范围内,可分离的有３９条左右,６０％左右的蛋白质属酸性,ｐＩ分布在３．５０－６．８５范围内,４０％左右属中性偏碱,ｐＩ在６．８５－８．４５范围内。（２）籽粒贮藏蛋白在Ｆ１     

盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）,得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５,催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）,二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ）,辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）,Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ,２７２μｍｏｌ／Ｌ,１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ,６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度,而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用,但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的分离和初步表征

东北长白山白眉蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｂｌｏｍｈｏｆｆｉＵｓｕｒｅｎｓｉｓ）蛇毒经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析柱,连续３步ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤柱得到了磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）的纯品。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）以及基质辅助激光解析电离飞行时质谱（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳ）表征为单一蛋白,其准确分子量为（１４．００８±０．００７）ｋＤ。最适ｐＨ范围８．０～９．０,最适的反应温度为４５℃。在溶液中有多聚体的存在。     

玉米精细胞质膜68kD特异糖蛋白组分的纯化和N—端序列测定

经ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ和ＩＥＦ＿ＳＤＳ双向电泳，从玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）精细胞质膜分离纯化得到等电点（ｐＩ）为５．５的６８ｋＤ糖蛋白的单一组分。伴刀豆球蛋白＿辣根过氧化物酶（ＣｏｎＡ＿ＨＲＰ）染色结果表明，该组分的糖链中含有甘露糖及葡萄糖残基。氨基酸序列分析表明，该组分的Ｎ＿端１５个氨基酸序列与ＣｏｎＡ的Ｎ＿端相应序列相同。根据分子量及ｐＩ值的差异，认为该组分并非ＣｏｎＡ，而可能与玉米精细胞质膜上的ＣｏｎＡ受体有关。它在玉米的精卵识别、粘附及融合中有何作用，无疑是令人感兴趣的问题。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７ 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５ ２００ ｕ 的碱性脂肪酶, 纯化倍数１６ ．５ , 得率３３．２％ , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）上均呈现单一蛋白质条带。ＳＤＳＰＡＧＥ 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ ｋＤ和２９ ｋＤ, 表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０ 个氨基酸的序列测定结果为ＡＴＡＤＡＡＡＦＰＤ, 与已知的碱性脂肪酶的Ｎ 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为２５ ℃, 在３０ ℃以下稳定,４０ ℃处理２０ ｍｉｎ 仅残留３０ ％ 酶活性;ｐＨ 稳定范围在６．５～１０．５ , 最适ｐＨ 为１０ ．０ 。低浓度的碱性蛋白酶对ＰＧ３７ 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACFⅡ的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法,从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦⅡ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒⅡ）。纯化的ＡＣＦⅡ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ－ＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦⅡ由两条分子量为１４．６ｋＤ的肽链通过二硫键连接在一起,其等电点为７．０。ＡＣＦⅡ具有显著的抗凝血活性,在体外延长ＰＰＴ时间的最终浓度为０．４ｍｇ／Ｌ。Ａ     

菜心中高等电点高活性的乙醇酸氧化酶同工酶的纯化和特性

乙醇酸氧化酶 (EC 1 1 3 15 ,GO)被认为只含4 0kD一种碱性亚基 ,是因为从多种植物中获得了具GO活性的蛋白 ,SDS PAGE后呈约 4 0kD单带[1] .菠菜GOcDNA编码约 370个氨基酸 ,即 4 0kD多肽 ,其碱 酸性氨基酸的比例高达 0 96 ,富含碱性氨基酸[2 ] .已克隆的GOcDNA在E .coli中表达     

不同数量的2kDa富苯丙氨酸的碱性短肽（BOP）和乙醇酸氧化酶结合

乙醇酸氧化酶（GO）只含40 kD亚基却具有多个等电点（pI）.我们曾报告GO含40 kD酸性亚基和68 kD碱性亚基,组成3种GO同工酶［1~6］.后来证实,68 kD亚基由14个2 kD富苯丙氨酸的碱性短肽（BOP）和40 kD亚基组成［7］.现在进一步证实,不同数量的BOP和乙醇酸氧化酶结合,组成多种GO-BOP复合体GC.这些复合体具有不同的pI、乙醇酸氧化酶活性和吸收曲线,但SDS-PAGE和免疫反应相同.在低电压和短时间的醋酸薄膜电泳中,GO和BOP不会解离,GC呈现强碱性（pI>10.0）;在高电压的毛细管等电聚焦电泳(cIEF)中,GO和BOP发生不同程度解离,导致GC不聚焦,或聚焦为不同带,pI为7.4/6.8/6.2/5.3.BOP存在于各种动植物和微生物以及血纤维蛋白原中.     

菠菜叶片中乙醇酸氧化酶3种同工酶的生化特性

By DEAE cellulose and Sepharose 6B chromatography, the proteins containing glycolate oxidase isozymes GOⅡ and GOⅢ were extracted from spinach green leaves. The protein containing GOⅡ showed two bands of 67±2 kD and 40±2 kD in SDS PAGE whose specific activity of glycolate oxidase was 33.4 U·mg -1 ·min -1 .It migrated towards cathode in Native PAGE in pH 8.3 buffer system. pI of GOⅡwas about 9.4 detected by IEF. The protein containing GOⅢ showed three bands of 67±2 kD, 40±2 kD and 38±2 kD in SDS PAGE whose specific activity of glycolate oxidase 14.4 U·mg -1 ·min -1 and could not migrate anywhere in the same Native PAGE. pI of GOⅢ was about 8.3 detected by IEF. The 40±2 kD might be the subunits of GOⅡ and GOⅢ. Antibodies of the protein containing GOⅡ and GOⅢ were prepared respectively. GOⅡ was very unstable and could change into GOⅢ artifact; GOⅢ was also unstable and could change into GOⅠartifact whose Mr ≈470 kD and pI ≈7.4 . This GOⅠ(specific activity: 9.8 U·mg -1 ·min -1 ), showing one 40±2 kD band in SDS PAGE, could be purified on another Sepharose 6B chromatography. The specific activity of GOⅡ decreased rapidly to about half of its original value and then was relatively stable when stored in 50% glycerol at -20℃. The results above explained why GOⅡ was extracted difficultly, and GOⅢ were easily confused with GOⅠ and GOⅡ.     

Molecular heterogeneity of Cowpea (Vigna unguiculata Fabaceae) seed storage proteins

81 wild forms and 110 cultivated cowpea,Vigna unguiculata, accessions from 21 countries of Africa were screened for variability in seed storage proteins. Total seed proteins, albumin and globulin fractions were investigated by means of sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and isoelectric focusing (IEF) of nonreduced and/or reduced samples in one- and two-dimensional procedures. The globulin fraction is heterogeneous in molecular weight and contains both legumin-like components and three to six nondisulfide-linked subunits. Three globulin subunits, with molecular weights 110, 76, and 41 kD were found to be composed of disulfide-linked polypeptides. In the nondisulfide-linked fraction, both cultivated and wild forms exhibited patterns of four types (A–D). This fraction contains polypeptide subunits of molecular weights 62, 56, and 52 kD for A type, 62, 56, 54, and 52 kD for B type, 62, 56, 52, and 50 kD for C type, and at least 62, 56, 54, 52, 50, and 49 kD for D type. These subunits present similar multiple charge forms but C and D types possess more basic specific 50 and 49 kD nondisulfide linked components. Major albumin fraction contains subunits of 94, 86, 32, and 24kD. No infraspecific variation was observed in albumin or legumin-like fractions. The discussion is focussed on the relations between genetic variability assessed by storage protein coding genes and phenotypic variability.     

高分子量麦谷蛋白１４和１５亚基的纯化、Ｎ—末端序列及部分生化特性研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳技术结合一种新的凝胶中蛋白质显色方法,对普通小麦（Triticum aestivum)小偃六号的高分子量麦谷蛋白１４和１５亚基进行了有效的分离纯化,将其转印于ＰＶＤＦ膜上测定了Ｎ－端的氨基酸顺序,通过比较了发现它们与已知序列的其他的高分子是麦谷蛋白亚基高度同源。用两种双向电泳技术确定了它们的等电点（ＰＩ）属于碱性范围。     

八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及其生化性质

通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM 5 2纤维素阳离子交换层析、反相毛细管液相色谱 (re verse phasecapillaryliquidchromatography ,RP CLC)等步骤 ,从八棱丝瓜籽中分离到 2种单链核糖体失活蛋白luffaculin 1和luffaculin 2 .在SDS PAGE和IEF上均显示为单一条带 ,表观分子量均为 2 8kD ,其等电点分别为 8 86 (luffaculin 1)和 9 0 5 (luffaculin 2 ) .实验表明 ,它们具有RNAN 糖苷酶活性 .蛋白质合成抑制活性测试表明 ,它们对蛋白质合成具较强的抑制作用 .体外抑制肿瘤细胞生长活性检测表明 ,luffaculin 1和luffaculin 2对人白血病细胞株K5 6 2有较强的毒性 ,IC50 分别为 1 1×10 -6mol L和 2 0× 10 -7mol L .八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白具有可以用于或构成免疫毒素治疗癌症的应用前景     

河蚌C-反应蛋白的分离纯化及其性质研究

用合成的CDPC-Sepharose-6B亲和层析吸附剂一步提纯河蚌C-反应蛋白(CRP)。纯化的CRP在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦电泳鉴定时均显示为一条区带。其等电点(pI)为5.2,分子量约为310,000道尔顿,由六个亚基组成,亚基分子量约为51,000道尔顿。在280nm处的消光系数E_(1cm)~(1mg)/ml=1.2。河蚌CRP与C_多糖(CPS)发生的沉淀反应是钙依赖性的。本文对河蚌CRP的氨基酸组成及其它性质也作了研究。     

The novel peptide composition of the seeds of Trichosanthes dioica Roxb

The seeds of Trichosanthes dioica contain a large amount of peptides in the range of 2-8 kD. These peptides can be resolved in a discontinuous sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) system using Tricine as the trailing ion. The seed proteins contain a number of charge species as determined by isoelectric focusing (IEF) in polyacrylamide gels. The peptides were focused in the basic region as determined by two-dimensional electrophoresis involving IEF and SDS-PAGE. The seed peptides have the unique property of being resistant to the action of silver nitrate, a sensitive reagent commonly used to stain proteins. The seed contains haemagglutinating activity which is inhibited by galactose.     

草菇低温诱导蛋白分离纯化及其部分性质的测定*

采用硫酸铵分级沉淀和制备电泳分离技术,从低温处理过的草菇菌丝中分离纯化得到三种低温诱导蛋白,分别命名为CspDZG1 ,CspDZG2 ,CspDZG3。IEF测定了等电点,分别为3.7,4.4,4.4。SDS-PAGE结果表明,CspDZG1 ,CspDZG2由一条多肽组成,分子量分别为56kD,54.5kD;CspDZG3由两个亚基组成,分子量分别为54.5 kD,68 kD。经S. aureus V8蛋白酶酶解后,测定了N端氨基酸序列。     

香石竹花瓣中乙烯诱导合成的60 kD蛋白功能的初步研究

Antibody against the ethylene induced 60 kD protein (E60) in carnation (Dianthus caryophyllus L.) petal was obtained from immunized rabbit serum. The E60 was purified with gel filtration, DEAE-Sephadex and Hydroxylapatite column. By combining IEF, SDS-PAGE and immune-blot analysis, the ethylene induced 60 kD protein was found to be an pI 6.3 peroxidase.