体外培养小鼠卵母细胞及其生长分化因子-9基因表达

体外培养小鼠的窦前卵泡以得到第二次减数分裂中期(MⅡ)卵母细胞，比较体外发育卵母细胞与体内生长的卵母细胞生长分化因子-9(GDF-9)的基因表达量，探讨GDF-9的表达对卵母细胞体外发育成熟的影响。选择体外培养第2天(D2)、D4、D6、D8、D10、D12卵母细胞作为体外发育组；同窝雌性小鼠出生后D12、D14、D16、D18、D20、D22卵母细胞作为体内发育组；半定量逆转录多聚酶链反应技术分别检测两组MⅠ卵母细胞GDF-9基因表达量。结果体外培养小鼠窦前卵泡可以得到MⅡ期卵母细胞，卵泡成活率、窦腔形成率、卵母细胞成熟率分别达到89.5%、51.8%和56.6%。小鼠卵母细胞GDF-9基因表达量随发育时间的改变而发生变化，而体外发育D8—12卵母细胞GDF-9表达量显著低于同期体内发育卵母细胞(P<0.05)。体外发育D8—12卵母细胞GDF-9基因表达量低于同期体内发育的卵母细胞的原因之一可能是其发育潜能较低。     

生长分化因子9基因的分子生物学

生长分化因子9是卵母细胞分泌的一种生长因子,它对卵泡的生长分化起着重要作用。本文介绍了生长分化因子9的结构、功能和调控,生长分化因子9基因的克隆及基因结构、发育性表达和作用、定位和多态性,并讨论了该基因与哺乳动物繁殖性能的关系。     

生长分化因子9基因及其在生殖中的作用

生长分化因子9是卵母细胞分泌的一种生长因子,它对卵泡的生长分化起着重要作用.文章介绍了生长分化因子9的结构、功能和调控,生长分化因子9基因的克隆及基因结构、发育性表达、定位和多态性,并讨论了该基因与哺乳动物繁殖性能的关系.     

大熊猫生长分化因子9(GDF-9)基因克隆与序列分析

生长分化因子9(GDF-9)是转化生长因子β(TGF-β)超家族的一个新成员,主要表达于卵母细胞,调节卵泡早期发育. 本文以大熊猫基因组DNA为模板,克隆了大熊猫GDF-9基因.序列分析显示:大熊猫GDF-9基因含两个外显子,编码一个由453个氨基酸组成的蛋白前体.该结果为进一步分析大熊猫GDF-9基因生物学功能奠定了基础.     

生长分化因子-9对牛卵丘细胞增殖的影响

研究生长分化因子-9（growth differentiation factor-9,GDF-9）对牛卵丘细胞增殖的影响。采用MTT法检测不同浓度GDF-9对卵丘细胞增殖的影响,结果表明,GDF-9能促进卵丘细胞的增殖,且GDF-9与卵丘细胞增殖效应存在浓度梯度关系;在卵丘细胞增殖过程中,FSH在一定程度上与GDF-9发挥协同作用。在GDF-9和FSH的作用下,去除卵母细胞的卵丘细胞复合体（oocytectomized cumulus cell complexes,OOX）也可以保持较好的发育形态。实时定量PCR结果表明,随着GDF-9浓度的增加,卵丘细胞扩展相关基因PTX3、HAS2及PTGS2的表达量也增加。总之,以上的研究结果表明,GDF-9可以促进卵丘细胞的增殖,对卵丘细胞功能的发挥起着重要的作用。     

小鼠体外发育成熟卵母细胞的胞浆成熟度评估

研究通过检测卵母细胞直径、谷胱甘肽含量和皮质颗粒分布来评估其胞浆成熟度。培养小鼠窦前卵泡13 d,得到258个体外发育MⅡ期卵母细胞;控制性超排得到205个体内发育的MⅡ期卵母细胞。测量卵母细胞直径,用免疫荧光染色、共聚焦显微镜观察卵母细胞皮质颗粒分布,化学法测定卵母细胞谷胱甘肽含量。结果发现,体外发育的卵母细胞直径(69.6±5.7)μm,体内发育卵母细胞直径(84.2±3.0)μm,两组间存在显著性差异(P<0.01)。体外发育成熟卵母细胞谷胱甘肽含量(4.3±0.7)pmol,体内发育的卵母细胞谷胱甘肽含量(6.1±1.0)pmol,两组间存在显著性差异(P<0.05)。体外发育卵母细胞皮质颗粒环状分布率36%,体内发育卵母细胞皮质颗粒环状分布率90%,两组间存在显著性差异(P<0.01)。本实验认为,体外发育成熟的卵母细胞胞浆成熟度与体内发育成熟的卵母细胞存在差异,可能是其发育潜能降低的原因之一。体外培养的卵泡内分泌结构改变可能影响卵母细胞胞浆成熟。     

小鼠卵母细胞的冷冻—解冻及其体外发育的研究

试验比较四种防冻剂对小鼠核泡期(germinal vesicle stage)无卵丘细胞的卵母细胞(下称裸卵),在各种不同条件下冷冻-解冻的影响,并用乙二醇为防冻剂,冷冻-解冻后,形态正常的裸卵1137枚,经体外培养排出第一极体、发育达中期Ⅱ的成熟率为43.2％(491/1137)。用体外获能的小鼠附睾尾精子进行体外受精的受精率为25.4％(31/122)。继续培养进一步发育至2-细胞期的发育率为17.3％(55/318)。对照组(新鲜裸卵)的成熟率为48.6％(158/325),受精率为26.4％(388/144)。两者无显著差异(P<0.05)。     

生长分化因子-5与骨骼发育

生长分化因子属于骨形态发生蛋白信号分子高度保守的亚家族,对骨骼的发育具有至关重要的作用。近年报道表明：生长分化因子-5（growth／differentiation factor-5,GDF6）的羧端区域与GDF-6和-7高度同源。GDF6在治疗肌腱或韧带修复,椎间盘退变修复,软骨修复,骨折愈合等方面具有潜在应用价值。     

绵羊GDF9基因PCR-SSCP分析

生长分化因子9（GDF9）是由卵母细胞分泌的一种生长因子,它对早期卵泡的生长和分化起重要的调节作用。采用PCR－SSCP技术分析了GDF9基因在小尾寒羊、湖羊、多赛特羊和萨福克羊4个绵羊品种的多态性。结果表明：GDF9基因在两对引物扩增片段中均存在PCR－SSCP多态性。对于引物1扩增片段,4个绵羊品种均检测到AA基因型,AB基因型只出现在湖羊、多赛特羊和萨福克羊中,仅在萨福克羊中检测到BB基因型;在4个绵羊品种中,A等位基因频率明显高于B等位基因频率。对于引物2扩增片段,4个绵羊品种均检测到AA基因型,AB基因型只出现在湖羊、多赛特羊和萨福克羊中,4个绵羊品种均没有检测到BB基因型;在4个绵羊品种中,AA基因型频率最高,A等位基因频率明显高于B等位基因频率。引物1的多态性片段测序分析表明：位于GDF9基因cDNA第152处发生了单碱基的改变（A→G）,并导致了氨基酸的改变（天冬酰胺→天冬氨酸）。     

低温保存的小鼠卵母细胞的体外授精研究

采用75分钟和150分钟两种精卵作用时间,对经6℃低温处理2小时和6小时的小鼠卵母细胞进行体外受精。精卵作用75分钟后,经6℃处理的卵子无一受精,而对照组的受精率为30.7％。作用150分钟后,低温处理2小时、6小时和对照组的受精率分别为62.0％,36.55％和76.0％。并对试验所出现的现象作了讨论。     

GDF5基因真核表达载体的构建及其在恒河猴骨髓间充质干细胞中的表达

目的克隆人软骨组织生长分化因子5（GDF5）基因及构建GDF5基因真核表达载体,观察其在恒河猴骨髓间充质干细胞（MSCs）中的表达情况。方法采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）从人胎儿软骨组织克隆hGDF5基因全长cDNA,插入pEGFP-C2载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5。重组质粒脂质体介导法转染MSCs细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-PCR法检测目的基因表达。结果成功克隆人软骨组织GDF5基因和构建GDF5真核表达质粒pEGFP-C2-GDF5,克隆在载体上的基因长度为1505bp,包含全部cDNA编码序列1505bp,测序显示与Genbank上的序列一致。重组质粒转染恒河猴MSCs细胞得到表达,绿色荧光蛋白在转染24h后开始表达,72h达高峰,然后表达逐渐减弱。转染后72h可检测到GDF5mRNA表达。结论人GDF5基因在恒河猴MSCs细胞的成功表达为应用恒河猴模型开展基于细胞的基因疗法修复骨和软骨损伤研究奠定了必要基础。     

生长分化因子-15在急性冠脉综合征中的临床研究

生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)是转化生长因子超家族的成员之一。近年来有实验室及临床研究发现,生长分化因子-15在心肌缺血或缺血/再灌注损伤时可高表达,并减少心肌细胞坏死的数量,抑制缺血心肌细胞的凋亡。在心肌压力超负荷的情况下,生长分化因子-15高表达或给予外源性生长分化因子-15可抑制心肌肥厚及心脏扩大,保护心功能。而在临床研究中发现急性冠脉综合征的患者生长分化因子-15增高,与部分心血管的危险因素存在相关性,对患者的预后有提示作用。     

两种分离斑马鱼卵母细胞方法的比较

对培养斑马鱼卵母细胞体外成熟中的两种分离方法进行了比较。结果表明,在卵母细胞的分离过程中,机械分离法获得的完整卵细胞的比例(87.0%)显著多于EDTA-胰酶消化法(33.2%)(P<0.01)。但机械分离法较费时,其平均分离每个卵细胞所用的时间(0.69min)显著多于EDTA-胰酶消化法(0.17min)(P<0.01)。此外,经过18h 27℃培养,机械分离法获得的卵细胞的存活率(88.2%)显著高于EDTA-胰酶消化法所获卵细胞的存活率(60.1%),而采用机械分离法和消化分离法对所获卵细胞的成熟度-GVBD%分别为83.9%、77.5%,无显著差异(P>0.05)。基于数据所示,机械分离法可以获得存活率高、完整性好的卵细胞,但所需操作时间较长;EDTA-胰酶消化法操作便捷,但其分离出的卵细胞的活力较差;两种方法对卵细胞体外培养成熟率的影响无明显差异。     

血浆鸢尾素、生长分化因子-8在老年肌肉减少症患者中的表达及其诊断价值分析

摘要 目的：分析血浆鸢尾素、生长分化因子-8在老年肌肉减少症患者中的表达及其诊断价值。方法：选择2020年4月至2022年4月在我院接受体检的620例老年体检者作为研究对象,其中238例肌肉减少症者作为观察组,382例非肌肉减少症者作为对照组。检测两组血浆鸢尾素、生长分化因子-8表达水平,观察血浆鸢尾素、生长分化因子-8在不同严重程度的老年肌肉减少症患者中差异性,使用Pearson相关性分析血浆鸢尾素、生长分化因子-8与全身骨骼肌质量、四肢骨骼肌质量、相对骨骼肌指数、握力和步速的关系,通过ROC下面积（AUC）评价血浆鸢尾素、生长分化因子-8对老年肌肉减少症的诊断效能。结果：观察组血浆鸢尾素表达水平低于对照组,生长分化因子-8表达水平高于对照组（P＜0.05）;肌肉减少症前期、肌肉减少症期、重度肌肉减少症期的患者血浆鸢尾素表达水平依次降低,生长分化因子-8表达水平依次升高（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,老年肌肉减少症患者全身骨骼肌质量、四肢骨骼肌质量、相对骨骼肌指数、握力和步速均与子鸢尾素呈正相关(P＜0.05),与生长分化因子-8呈负相关（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血浆鸢尾素、生长分化因子-8诊断老年肌肉减少症的敏感度为78.49 %,特异度为90.67 %,AUC为0.914。结论：老年肌肉减少症患者血浆鸢尾素表达明显下调、生长分化因子-8表达明显上调,两者与病情严重程度密切相关,联合诊断此病的效能较好,值得临床予以重视应用。     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的研究低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响。方法实验组小鼠和对照组小鼠分别在15w紫外灯照射产生的低浓度臭氧环境下和正常无臭氧环境下连续饲养7周,观察其体重变化;阴道涂片镜检观察雌性小鼠的动情周期。7周后,取脑、心、肝、脾、肺、肾等组织标本,做组织病理学分析;利用全自动生化分析仪对部分血清生化指标进行测定,利用放免试剂盒对血清性激素水平进行测定。结果实验组雌性小鼠体重与对照组雌性小鼠差异无统计学意义,实验组雄性小鼠体重比对照组雄性小鼠轻;实验组雌性小鼠的动情周期与对照组雌性小鼠差异无统计学意义;实验组与对照组小鼠的组织切片均未发现异常;实验组小鼠的血清生化指标以及血清性激素水平与对照组小鼠差异无统计学意义。结论本实验中紫外灯照射产生的低浓度臭氧对昆明小鼠的生长发育基本无影响。     

1-alpha羟化酶和人成纤维细胞生长因子-23 基因修饰小鼠离体股骨及下颌 骨X线影像的分形分析研究

目的:初步分析1-α羟化酶(1-alpha-hydroxylase,1α(OH)ase)、人成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor-23,FGF23)基因修饰小鼠离体股骨及下颌骨X线平片的分形维数(fractal dimension,FD),为其在骨质疏松症评价中的运用提供实验依据。方法:以6周龄的1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠为模型,以同龄的野生型(Wild-Type,WT)小鼠为对照,采集小鼠的股骨和下颌骨,使用离体X-射线摄影评估骨质疏松状况,利用Image J软件测量各组小鼠股骨和下颌骨X-射线影像兴趣区域的FD值,分析其差异及相关性。结果:1)与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠均出现骨质疏松征象,包括股骨和下颌骨骨长度及体积减少、骨密度明显下降,下颌磨牙、切牙及牙槽骨的射线透光度增高、牙髓腔宽大、根管变薄。2)1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠的股骨头和股骨远端干骺端的FD值均较WT小鼠明显增加(P<0.05),但股骨腔未见差异;下颌骨升支的FD值在1α(OH)ase-/-、FGF23+、1α(OH)ase-/-FGF23+小鼠中明显增高(P<0.05),而在牙槽骨中未见差异;3)下颌骨升支X平片的FD值与股骨干骺端的FD值显著相关(r=0.541,P=0.049)。结论:FD值可以较好地反映骨质疏松状况,股骨干骺端、下颌骨升支是较合适的兴趣部位,分形分析可运用于下颌骨影像学的再分析。