组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）cDNA序列的测定

已经从ｍｅｌａｎｏｍａ细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ,在此基础上用双脱氧终止法测定了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ编码区全序列及３′非编码区部分序列,并发现与Ｐｅｎｎｉｃａ等发表的ｔ－ＰＡｃＤＮＡ序列相比,有两处差异,其一是第１７２５位核苷酸残基为Ｃ而非Ａ,并使此处序列与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比新产生一个ＳｔｙＩ切点,但由于差异发生在密码子第三位,没有引起编码的氨基酸变化;其二是第１７７７位核苷酸残基（终止密码子后第４位核苷酸残基）为Ｔ而非Ｇ,使与终止密码子相隔３个核苷酸残基处产生了一个新的ＴＧＡ,与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比此处的ＢｓｔＮＩ切点也消失了。     

人绒毛膜促性腺激素α、β亚基cDNA的筛选与序列分析

构建３周龄人胚ｃＤＮＡ 文库,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ标记的一链ｃＤＮＡ 为探针从中筛选高度表达的克隆子并测序,得到人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）的α和β亚基ｃＤＮＡ 克隆,序列同源性分析表明：α亚基编码区的ｃＤＮＡ 序列与已报道的完全同源,β亚基编码区第３０位碱基Ｇ→Ａ,该碱基的改变不引起氨基酸的改变．另外,在α和β亚基非编码区发现有多处碱基的改变．     

美洲商陆一种抗真菌蛋白的cDNA克隆及序列分析

根据美洲商陆种子中一种抗真菌蛋白ＰＡＦＰ的Ｎ端部分氨基酸顺序,设计,合成一条５‘端寡核苷酸引物,通过３’－ＲＡＣＥ技术从种子总ＲＮＡ扩增出一约３５０ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,成功地克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统中。序列分析该,ｃＤＮＡ含有１１４ｂｐ的编码区,由此推导的３８个氨基酸序列有３６个与ＰＡＦＰ的序列相同,仅在第３５,３６位氨基酸分别由Ｃｙｓ,Ｌｙｓ代了后者的Ｇｌｎ和Ｉｌｅ。     

凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究

用Ｋｕｎｋｅｌ突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变,并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右,与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明,激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明,ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大     

重组人骨形态形成蛋白2在家蚕幼虫中表达及产物纯化

将编码人ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因插入昆虫杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ１,与修饰的家蚕核形多角体病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞,通过同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的ＢＭＰ２ｃＤＮＡ基因的重组病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ－ＢＭＰ２。用重组病毒感染家蚕幼虫,第五天ＢＭＰ２表达率最高,每毫升蚕血淋巴中约１０μｇ表达产物;表达产物在在体内被加工成Ｃ－端１６ｋＤ片段,以二硫键连结成分子量为３０ｋＤ的同源二聚体;经纯化获得９０％以上纯度的成熟ＢＭＰ２,与骨基质胶原结合后植入大鼠皮下,７天后在局部诱导生成软骨组织。     

兔防御素（MCP—1）cDNA的克隆与序列分析

从兔脾脏细胞中分离提取总ＲＮＡ,经反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出兔巨嗜细胞阳离子多肽（ＭＣＰ－１）ｃＤＮＡ,插入经ＥｃｏＲ Ｉ和Ｘｂａ Ｉ双酶切的ｐＵＣＤ１９中,构建了党生质粒ｐＵＣＤＥＦ,进行了限制性酶切鉴定和序列分析,结果在扩增出的ｃＤＮＡ２８８个碱基中,在前片段中有一个碱基与发表的兔ＭＣＰ－１ ｃＤＮＡ序列不同,即第１５７位碱基由Ｇ变为Ａ,导致编码的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。该ｃＤＮＡ全     

t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达

应用ＰＣＲ方法,在ｔ－ＰＡ ｃＤＮＡ５＇端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽,与酵母表达载体ｐＰＩＣ９重组,构建表达质粒ｐＳＴＥ－Ｙ,利用ＬｉＣｌ转化法转化酵母菌ＹＳ１０８,在ＭＭ和ＭＤ平板上筛选表型,ＰＣＲ筛选ｔ－ＰＡ ｃＤＮＡ与酵母染色体整合而形成的阳性克隆,阳性克隆经甲醇诱导表达后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明表达产物的分子量为６ｋＤａ左右,用酪蛋白板溶圈法测定ｔ－ＰＡ的活性。Ｍｕｔ＾ｓ表型菌表     

黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析

依据国外报道的南瓜甘油－３－磷酸转酰酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ序列合成相应引物,用ＲＴ－ＰＣＲ技术,成功地分离了黑子南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｆｉｃｉｆｏｌｉａ）ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段,并亚克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上,序列分析表明黑子南瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ序列及递推的氨基酸序列与南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍｏｓｃｈａｔａ）相比分别具有９８％和９６５％的同源性。在１１８８ｂｐ中有２２个核苷酸发生变化,导致１３个氨基酸的改变     

人腺苷酸环化酶激活多肽cDNA克隆和序列分析

以人睾丸组织总ＲＮＡ为材料,用ＲＴ－ＰＣＲ方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽（ＡＣＡＰ）编码区（５３０ｂｐ）和全长ｃＤＮＡ（１９３０ｂｐ）片段．并分别将这些ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１８载体的ＳｍａⅠ限制性内切酶位点．对重组质粒分别采用直接ＤＮＡ双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶Ｓ１作用下连续缺失ＤＮＡ后,相继克隆,构成一系列连续缺失的缺失体的方法,测定了全部核苷酸顺序．结果表明：ＡＣＡＰ编码区的ｃＤＮＡ顺序与已报道的有１２处碱基的改变,其中１１处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化,只有第３８５位的Ｔ→Ａ后,才引起其编码的氨基酸由Ｓｅｒ→Ｔｈｒ,但由于Ｓｅｒ和Ｔｈｒ的理化性质极其相似,这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化．这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异．     

水稻D1snoRNA及其基因的鉴定和功能分析

测定和比较了籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）、粳稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）和多年生野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＷ．Ｇｒｉｆｉｔｈ）ｈｓｐ７０基因第一个内含子中Ｄ１ＤＮＡ以及部分上游序列,并通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ｃＤＮＡ序列分析对Ｄ１ＤＮＡ编码的Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ进行了实验鉴定。Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它与水稻２５ＳｒＲＮＡ互补序列为１４个核苷酸长。根据理论计算,Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ具有指导水稻２５ＳｒＲＮＡ中第８０７位的核糖甲基化功能。Ｄ１ＤＮＡ与Ｃ１ＤＮＡ相隔仅１０５个核苷酸,在内含子中如此短的距离内连续编码两种ｓｎｏＲＮＡ是罕见的,这一结构为研究串联结构的ｓｎｏＲＮＡ转录后加工机制提供了一个良好的研究体系。     

中国人肥胖基因克隆及其原核表达载体的构建

为了探讨人肥胖基因的生理和病理意义,利用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总ＲＮＡ中扩增出肥胖基因编码区序列（ＣＤＮＡ）,定向亚克隆至ＰＵＣ１９质粒,克隆的ＯＢＣＤＮＡ不含信号肽序列并加入了亲折起始密友子ＡＴＧ〈序列分析表明,与日本报道的人ＯＢＣＤＮＡ相比,多出一个谷氨酸密码子ＣＡＧ,将ＯＢＣＤＮＡ定向克隆至原功体ＰＢＶ２２０,构建了重组ＯＢ基因表达质粒ＰＢＶ     

人骨形态发生蛋白—7全长cDNA的克隆及序列测定

从人胎儿肾中提取总ＲＮＡ,反转录得ｃＤＮＡ,ＰＣＲ扩增获得１．３ｋｂ的骨形态发生蛋白－７（ＢＭＰ－７）的全长ｃＤＮＡ。克隆的ＢＭＰ－７基因编码的氨基酸序列与献报道相同。     

重组家蚕病毒表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白

将传染性囊病病毒ＨＺ９６株主要宿主保护性抗原ＶＰ２的ｃＤＮＡ基因克隆到杆状病毒转移载体ｐＢａｃ－ＰＡＫ８中,获得重组转移载体ｐＢａｃＰＡＫ－ＶＰ２,载体ｐＢａｃＰＡＫ－ＶＰ２与修饰病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ６线性化基因组ＤＮＡ共转染单层家蚕Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ（Ｂｍ）Ｎ细胞,经细胞内同源重组,筛选到重组病毒。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫鲩迹结果表明,ＶＰ２在家蚕培养细胞和家蚕幼虫中均得到了表达。     

利用DDRT-PCR技术分析神经生长因子低亲和力受体诱导的细胞凋亡过程中基因表达的差异

转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞与有血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞以及去血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｐ细胞基因表达的差异．克隆了数个特异或差异表达的短ｃＤＮＡ片段,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实其中两个片段ＬＩＡＲＥＳＴ－１和ＬＩＡＲＥＳＴ－２表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中,ＧｅｎＢａｎｋ检索表明此二片段为新的ｃＤＮＡ序列并给予登录号Ｕ４７３１５和Ｕ４７３１６．另有一个ｃＤＮＡ片段ＬＩＡＲＣＤ－３在凋亡细胞中受到了明显的抑制,经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的ＤＮＡ结合蛋白ｃＤＮＡ编码区的一部分,首次被证实它与Ｐ７５ＮＧＦＲ诱导的神经细胞凋亡调控关联     

番茄抗病基因Cf9的3′UTR区含有内含子序列

从番茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌ．）抗病品种“中杂９号”基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了番茄抗叶霉病基因Ｃｆ９。序列分析结果表明,该基因全长２７５１ｂｐ,含有一个编码８６３个氨基酸的开放阅读框架。在该基因的３′ＵＴＲ区发现了一段未曾报道的内含子序列,长１１５ｂｐ,它所处的位置与番茄另一个抗叶霉病基因Ｃｆ２内含子的位置相似,其５′和３′边界序列为一重复序列,ＴＣＣＡＧＧ（Ｔ）ＡＴＴＣ,并与Ｃｆ２基因内含子边界序列高度同源。与已报道的Ｃｆ９的ｃＤＮＡ序列相比,它的第３７１位的核苷酸Ｔ突变成了Ｃ,从而使其编码蛋白的ＬＲＲ区第１２１位的亮氨酸突变为脯氨酸。     

芸苔属植物CAL基因的结构特征与花球的形态遗传

从花椰菜变种（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ Ｌ．ｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ）中分离出４种花球类型的纯合株系：光滑型花球ｃｕｒｄ－ｓ、毛状物花球ｃｕｒｄ－ｈ、颗粒状花球ｃｕｒｄ－ｃ和刺状物花球ｃｕｒｄ－ｔ。用ＰＣＲ方法分别扩增各株系的ＢｏｂＣＡＬ基因并分析其中的部分序列,发现４种株系的ＣＡＬ基因在第五个外显子中都有ＡＡＧ向ＴＡＧ的终止突变,而且该终止密码子上游６３８ｂｐ的ＤＮＡ序列完全一致,说明     

LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ,将长为２６０５ｂｐ的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＪＮ６,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第７５４位Ｃ→Ｔ,和１６５４位的Ｇ→Ａ,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用ＬＤＬ受体基因ｃＤＮＡ中的ＣｌａＩ片段的作为探针,检测到ＬＤＬ受体基因上外显子８的ＳｔｕＩ位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的ｃＤＮＡ含有可译框架的全     

β—银环蛇毒素A链cDNA的克隆和表达

从银环蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ,ＲＴ－ＰＣＲ扩增编码β－银环蛇毒素Ａ链的ｃＤＮＡ,克隆并测定了全序列。一个新的ｃＤＮＡ得以克隆,其编码一个２７个氨基酸的信号肽和一个１２０个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白和其他β－银环蛇毒素Ａ链一样,具有１３个位置固定的半胱氨酸,而且和这些Ａ链具有很高的同源性。此外,以同样的引物,从眼镜蛇毒腺总ＲＮ中。克隆到编码眼镜蛇ＰＬＡ２前体的ｃＤＮＡ。将β－银环蛇毒素Ａ链和眼镜蛇Ｐ     

中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较

为研究中国人ＩＬ－１２的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了Ｐ３５、Ｐ４０两亚基ｃＤＮＡ基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中Ｐ３５ ｃＤＮＡ编码２１９个氨基酸的多肽,Ｐ４０ ｃＤＮＡ编码３２８个氨基酸的多肽,与国外序列（ＮＫＳＦ、ＣＬＭＦ）比较结果发现：所克隆序列Ｐ３５同ＮＫＳＦ相比,第４４ａａ密友子由ＧＴＣ（Ｖａｌ）→ＧＴＧ（Ｖａｌ）,但未改     

小鼠金属硫蛋白ⅠcDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达

将质粒ＰＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板,通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒ＰＢＳ－ＳＫ中,经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确,再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间,通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测,表达量为１ｍｇ＝