外源性GM3／GD3对人肝癌培养细胞蛋白激酶活性的影响

ＧＭ３／ＧＤ３在体外对部分纯化的酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）都有激活作用,ＧＭ３处理细胞４ｄ后,完整细胞ＴＰＫ活性未出现大改变,而ＰＫＣ的活性则大幅度上升,为对照组的８８倍;同样条件下经ＧＤ３处理后,ＴＰＫ的活性下降,为对照组的０．６６倍,而ＰＫＣ活性则上升,为对照组的４３倍,上述结果表明,ＧＭ３／ＧＤ３对不同蛋白激酶活性的影响互不相同,对同一蛋白激酶在不同条件下的影响也互不相同     

外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

应用原位分子杂交技术及细胞图象分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ_３／ＧＤ_３处理后,ＧＤ_３处理组细胞内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞,而经ＧＭ_３处理组和对照组阳性信号集中于核膜。ＧＭ_３／ＧＤ_３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中于核膜,但ＧＭ_３处理组信号强度最大。上述结果提示,ＧＤ_３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展,而ＧＭ_３则可使某些肿瘤细胞向正常方向转化。     

外源性神经节苷脂GM3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性ＧＭ３能明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长,在ＧＭ３处理３ｄ时,出现明显差异,通过ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析发现,外源性ＧＭ３可明显影响人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ四种癌基因的ｍＲＮＡ表达,未经ＧＭ３处理的细胞中没有检测到ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ,但ｃ－ｊｕｎ微量表达,并有ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ的高     

外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞蛋白激酶活性的影响

ＧＭ_３／ＧＤ_３在体外对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）都有激活作用。ＧＭ_３处理细胞４ｄ后,完整细胞ＴＰＫ活性未出现大改变,而ＰＫＣ的活性则大幅度上升,为对照组的８８倍;同样条件下经ＧＤ_３处理后,ＴＰＫ的活性下降,为对照组的０．６６倍,而ＰＫＣ活性则上升,为对照组的４３倍。上述结果表明,ＧＭ_３／ＧＤ_３对不同蛋白激酶活性的影响互不相同,对同一蛋白激酶在不同条件下的影响也互不相同。     

肝癌组织中GD3合成酶的性质研究

肝癌组织中ＧＤ３合成酶的性质研究谢天培，夏霞娟，顾天爵（上海医科大学基础医学院生物化学教研室，２０００３２）关键词肝癌；ＧＤ３合成酶；特性我们先前的研究发现肝癌组织中神经节着脂ＧＤ３的含量增加，并证明这与ＧＤ３合成酶（ＯＭＰ－－ＮｃｌｌＡＩ：ＧＭ３唾...     

肝癌组织中GD3合成酶的纯化

ＧＤ３合成酶是膜嵌合蛋白,定位于高尔基体,经过制作微粒体,Ｔｒｉｔｏｎ增溶、ＡＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓ亲和层析等步骤,二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌组织中的ＳＴ２被纯化了３１５９７倍,得率为０．３５％。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染色呈１条蛋白着色带,分子量为５５ｋｄ。     

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,Ｈ－ｒａｓ原癌基因及Ｒｂ抗癌基因转录表达的影响。结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,ｒａｓ基因表达无影响;（２）ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势;（３）ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ具有使ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ,和ｒａｓ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）;（４）天然和氧化修饰型脂蛋白对Ｒｂ基因表达均无影响。据上述结果推测：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＶＬＤＬ和ｏｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｓｉｓ,ｊｕｎ和ｒａｓ原癌基因表达增加有关。     

重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合,置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游,构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１）,ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性,说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．     

豚鼠气道及肺组织原癌基因表达与哮喘的相关研究

目的：为研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法：以卵白蛋白致敏豚鼠建立哮喘模型,用Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ－ｂｌｏｔ分子杂交及免疫组化技术,分别观察正常及哮喘发作后豚鼠气道上皮及肺组织中原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ的表达水平。结果：正常豚鼠气道及肺组织中ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ无或很少表达,哮喘发作后豚鼠气道上皮及肺组织中ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达明显增强,３０ｍｉｎ达高峰,发作后４ｈ降至正常水平。地塞米松对ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃｍＲ－ＮＡ有部分抑制作用。结论：原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃ在哮喘发病过程中可能起一定作用。     

天然和氧化修饰型LDL、VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因fos及myc表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原癌基因异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ,ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响。结果表明：①ＨＤＬ对ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达无影响;②ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势,但与对照比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）;③ＯＸ－ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ有使ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）．上述结果说明：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和０Ｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｆｏｓ和ｍｙｃ癌基因表达增加有关。     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素—3融合蛋白的表达研究

利用ＰＣＲ扩增得到粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素－３（ＩＬ－３）完整基因片段,将其分别克隆ｐＧＥＭ－Ｔ构建成ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白基因,ＤＮＡ序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对７２ＲＮＡ聚合酶表达载体ｐＴ７ｚｚ,得到表达质粒ｐＦｕ,经转化至表达宿主Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）,在ＩＰＴＧ诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

在建立大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）体外培养方法的基础上,通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验,ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响．结果表明,ｂＦＧＦ作用于ＭＣ１８ｈ,ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入率明显增加（Ｐ＜０．０５）,２４ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１）;ｂＦＧＦ显著诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达,其表达活性分别于３０ｍｉｎ和１ｈ达到高峰．提示ｂＦＧＦ是ＭＣ的强效丝裂原,其对ＭＣＤＮＡ合成的促进作用与诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达有关．     

过表达TIMP3对肝癌细胞生物功能的影响

组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)在肝癌中的具体作用机制尚不明确。该文探讨了TIMP3在肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响。通过q RT-PCR和Western blot检测肝癌细胞株(97H、97L和HUH7)和人正常肝细胞(LO2)中TIMP3的表达情况。将过表达TIMP3的质粒转染进97H和HUH7细胞,利用q RT-PCR和Western blot检测转染后细胞的TIMP3表达情况。通过MTT实验和活细胞工作站检测过表达TIMP3对肝癌细胞增殖的影响。此外,通过流式细胞术检测过表达TIMP3对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响,通过划痕实验检测表达TIMP3对肝癌细胞迁移的影响。最后,利用GESA软件进行基因富集分析以及Int Act数据库构建相互作用蛋白网络图对TIMP3相关生物学功能进行探索。研究结果表明, 97H、97L和HUH7细胞中TIMP3的表达比LO2细胞中低。97H和HUH7细胞转染TIMP3质粒后RNA及蛋白水平明显升高,且过表达TIMP3可以促进细胞增殖,促进G1期向S期转化,抑制细胞凋亡,下调Bax的表达,上调Bcl-2、Bcl-xl的...     

神经节苷脂GM3对人白血病J6—2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化。在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化。采用（＾３２Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－＾３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－＾３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨。ＧＭ３促进［＾３２Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－＾３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［Ｃ     

乙型肝炎病毒3‘末端缺失的preS／S基因在转基因小鼠中的表达

从乙型肝炎病毒ａｄｒ亚型的基因组ＤＮＡ中分离３’末端缺失的ｐｒｅＳ／Ｓ基因的ＤＮＡ片段,构建了由ＣＭＶ启动子控制的真核表达载体。采用受精卵显微注射方法,获得了基因组整合有３’末端缺失的ｐｒｅＳ／Ｓ基因的２个转基因小鼠品系。在不同的时间点采取血清进行了ＥＬＩＳＡ分析,发现在这２个小鼠品系中３’末端缺失的ｐｒｅＳ／Ｓ基因可被表达,而且呈稳定状态。此小鼠品系的建立,对于探讨乙型肝炎病毒３’末端缺失的ｐｒ     

人肝癌细胞株QGY—7703的p53基因及其表达研究

本文利用等位基因分析,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,ＲＴ－ＣＰＲ／序列分析,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹,免疫组织化学,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹,免疫沉淀等方法对人肝癌细胞株ＱＧＹ－７７０３的Ｐ５３基因背景进行了研究,发现１７号染色体短臂可能存在等位基因缺失,在Ｐ５３基因的编码序列上没有发现任何突变,但发现其ｍＲＮＡ和蛋白表达水平很低,表明在ＱＧＹ－７７０３细胞中Ｐ５３基因的低水平表达可能同细胞的恶性程度有关。     

肝癌组织中SOCS-3 mRNA的表达

目的:探讨人肝癌组织中细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)的表达.方法:应用RT-PCR法测定8例人正常肝组织、10例肝硬化组织及10例肝癌组织中SOCS-3 mRNA的表达.结果:与正常肝组织和肝硬化相比较,肝癌组织SOCS-3 mRNA的表达明显降低(P<0.05).肝硬化组织与正常肝组织SOCS-3 mRNA的表达无明显差异(P>0.05).结论:SOCS-3表达下降与肝癌的发生、发展密切相关.