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1.
鼻咽癌中感染的EBV以潜伏态存在,只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知BZLFl基因和BamHIEZ片段内部分基因对EBV的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增(PCR)法扩增BZLFl基因外显子-1序列,并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外,检测了BamHIEZ片段内缺失,结果发现21例鼻咽癌(NPC)组织中,ll例有BamHIEZ片段内缺失,长2.99kb,与潜伏态存在的RajiEBV类似。提示鼻咽癌小的EBV以潜伏态存在,与NPC发病有关。 相似文献
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从两例鼻咽癌(NPC)病人的活检组织切片中,用PCR方法扩增出EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因的Exonl、Introl ExonΠ和IntronΠ共500bp的片段,克隆入载体pGEM-3zf(+)′,测定核苷酸序列,其中有一个样品所测序列段与台湾析相似,另一个样品则与B95-8极为相似。由此可知。中国陆南方的NPC组织中EBV-LMP基因存在不同的变异。 相似文献
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Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBV受体(EBVR/CR_2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR_2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Humanembryonicnasoparyngealepithelium,HENE)组织样本中EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列。这一片段的DNA序列测定结果显示,人NPC细胞和正常HENE细胞的EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列,与正常人B淋巴细胞的EBVR/CR_2的相应序列完全相同,提示EBV感染鼻咽上皮细胞可能与EBVR/CR_2基因的EBV结合区结构改变无直接关系。 相似文献
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鼻咽癌Epstein—Barr病毒受体(EBVR/CR2)基因的病毒结合区的序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBC受体(EBVR/CR2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Human embryonic nasopharynge 相似文献
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采用异硫氰酸胍(GuSCN)和硅藻从B95-8细胞中快速抽摸板DNA。根据EB病毒(EBV)B95-8株DNA全序列及编码EBV胸苷激酶(TK)的开放读框BXLF1的结构,设计合成一对引物,并在引物的5′一端分别引入EcoRI和PstI切点,用PCR技术扩增出一含完整的EBVTK基因的1.843KbDNA片段,NcoI酶切分析鉴定,EcoRI/PstI双酶切PCR产物和载体,使目的基因定向克隆至选 相似文献
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马立克氏病病毒(MDV)814株B抗原基因的克隆及部分序列分析 总被引:6,自引:1,他引:6
提取感染鸡胚成纤维细胞MDV-I弱毒株814病毒DNA为模板,根据RBIB株gB基因5′及3′两端核苷酸离列设计引物,利用PCR技术扩增了我国MDV-I弱毒株814gB基因(2.9kb)将扩增片段平末端克隆到载体pBluescriptSK中EcoRV位点,经BamHI,HindIII酶切鉴定得到不同插入方向的重组质粒。构建圹增片段的酶切图谱及部分序列分析证明与RBIB株gB基因无差异,显示了极高的 相似文献
8.
昆虫杆状病毒衣壳主蛋白基因的PCR扩增,克隆和定位 总被引:1,自引:0,他引:1
用PCR技术成功地扩增了苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的衣壳主蛋白基因(vp39基因),并克隆了该基因,利用纯的vp39基因探针,在低严谨杂交条件下,已将粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的vp39基固定位在PstI-F,BamHI-C,EcoRI-C,XhoI-D,I,EcoRV-H,X等片段上。PCR反应时,在扩增出预期的包括完整vp39基因的1406bp片段的同时也扩增出一条Ca.400bp的片段,本文讨论了PCR的特异性扩增和非特异性扩增。 相似文献
9.
根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒(CAV)环形基因组DNA(全长2.3kb)的EcoRI位点和BamHI位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用PCR技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的CAV感染的MDCCRP1细胞基因组DNA中,分别扩增出包含EcoRI和BamHI分割开的病毒基因组两部分(1.5kb和0.8kb)约1.5kb和约1.25kb的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进pUC18载体,获得包含CAV全基因组序列DNA片段的克隆质粒pCAV2.4。酶切分析表明,该质粒具有预期的BamHI位点、PstI位点、HindⅢ位点,而预期的EcoRI位点消失。重组质粒插入DNA片段的两端序列分析表明,质粒pCAV2.4是包含CAV全基因组序列的重组质粒,插入DNA片段序列中的EcoRI位点序列发生了一个碱基突变。 相似文献
10.
应用染色体原位杂交、PCR扩增、克隆及核苷酸序列分析等方法,分析了CNE1和CNE3细胞株中的潜伏感染膜蛋白(LMP1)基因。CNE1是来自我国东北的高分化鼻咽癌细胞株,CNE3是来自广西的低分化鼻咽癌细胞株。染色体原位杂交结果表明,CNE1细胞中LMP1基因存在于细胞核内,整合在第一号染色体上,CNE3中LMP1基因则随机存在于细胞核内及多条染色体上。用PCR方法分别从CNE1及CNE3中扩增得到了LMP1基因片段(外显子3),核苷酸序列分析证明,来自CNE1的LMP1与来自B95-8细胞的LMP1核苷酸序列同源性极高,达99.5%,而CNE3的LMP1基因与B95-8的LMP1基因同源性为93%。 相似文献
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以PRRSV弱毒株膜蛋白(M)和核衣壳(N)蛋白基因为模板,设计的一对含有EcoRI和BamHI酶切位点的引物,通过RT-PCR扩增出一约900bp的MN基因片段,将此基因片段成功克隆于高效表达载体pBV220,构建成重南粒pBVMN,导入大肠杆菌DH5α,经温敏诱导,成功地表达了MN基因。表达产物经SDS_PAGE电泳和Westernblot印迹分析,其分子量约34kD,与兔抗PRRSV高兔血清 相似文献
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广西壮族自治区HIV—1流行毒株的基因序列测定和亚型分析 总被引:6,自引:0,他引:6
使用PCR技术对14份广西HIV-1阳性感染者外周血单核细胞(PBMCs)样品进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,并对其C2-V3及邻区350 ̄450个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,14份样品中9份为泰国B(B')亚型,5份为E亚型毒株。其中B'亚型毒株的基因离散率为4.2%,与A-E参考亚型及部分B亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的B亚型毒株序列十 相似文献
14.
Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征 总被引:2,自引:0,他引:2
对EB病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,EB病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体(Episome)形式存在,而其基因转录有如下特征:(1)EB病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达EBNA-1,并且此基因转录产物由一个在BamHI-F区的启动子(Fp)驱动;(2)潜伏感染膜蛋白(Latent membrane protein,LMP)和末端蛋白(Terminal pr 相似文献
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根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列,设计了一对含有EcoRI和BamHI酶切位点的引物,用RT-PCR对四个流产猪场的病料进行了检测,扩增出约918bp的基因片段。通过病毒分离、酶切鉴定和序列分析证实为PRRSV感染。结果说明应用所设计的引物进行RT-PCR快速检测PRRS是可行的,为我国快速特异诊为PRRS和PRRSV强毒株的深入研究奠定了基础。 相似文献
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以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒的核衣壳蛋白基因vp39设计引物,用PCR技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株(BmNPV-Ch)-1.3kb片段并测定了其全序列长1230bp。推导的氨基酸351个,其与BmNPV日本株(BmNPV-Ja)vp39基因核苷酸序列同源性达97.5%,氨基酸同源性达97.1%。该片段在E.coliBL21中诱导表达能产生分子量约为38kD的特征性蛋白带,证明所扩增片段为Bm 相似文献
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从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV)。提取病毒基因组DNA,并以此DNA为模板,采用人工合成的引物进行PCR扩增,PCR产物经BamHI、SacI双酶切后,克隆于pUC19质粒的BamHI/SacI位点。重组质粒pUCVP2经PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV-IM)VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt, 相似文献
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高分化及低分化鼻咽癌细胞株中Epstein—Barr病毒潜伏感染膜蛋白(LMP… 总被引:2,自引:0,他引:2
应用染色原位杂交、PCR扩增、克隆及核苷酸序列分析等方面,分析了CNE1和NE3细胞株中的潜伏感染膜蛋白(LMP1)基因。CNE1是来自我国东北的高分化鼻咽癌细胞株。CNE3是来自广西的低分化鼻咽癌细胞株。染色体原位杂交结果表明,CNE1细胞中的LMP1基因存在于细胞核内,整合在第一号染色体上,CNE3中LMP12基因则随机存在于细胞核内及多条染色体上。用PCR方法分别从CNE1及CNE3中扩增到 相似文献
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。 相似文献
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应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI的酶切位点,经双酿切法把该DNA片段重组到pUC118质粒中。对插入片段的DNA序列测定和分析结果证实该片段为H-1NS-1基因序列。以此重组质粒为探针,采用分子杂交的方法,分别测定了H-1及MVMDNA在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备H-1的质量监测、H-1及MVMNS-1蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。 相似文献