北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶电荷异构体的分离和某些性质

等电聚焦表明,北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为５．０,５．３,５．９,６．１和６．５的五个主要的活性组分（电荷异构体）构成,利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳进行电荷异构体的制备级分离,采用三氯乙酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置,电渗洗脱法回收蛋白,获得其中两个电荷异构体,对比研究结果表明电荷异构体的活性,氨基酸组成,二级结构等性质无明显差异。     

鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性

核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus, MHV) N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的PKCα S657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。     

玉米花粉32kD蛋白的纯化及性质

利用丙酮粉,硫酸铵分段盐析及离子交换层析技术,从玉米花粉细胞质中分离纯化了一种３２ｋＤ的可溶性蛋白,其ＧＴＰａｓｅ活性大于ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明达银染电泳纯。等电聚焦电泳测得等电点为５．２５。免疫印迹鉴定表明该蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为２８２ｎｍ,ＣＤ谱分析说明具有球蛋白特征。     

玉米花粉32kD蛋白的纯化及性质

利用丙酮粉、硫酸铵分段盐析及离子交换层析技术,从玉米花粉细胞质中分离纯化了一种３２ｋＤ的可溶性蛋白,其ＧＴＰａｓｅ活性大于ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明达银染电泳纯。等电聚焦电泳测得等电点为５．２５。免疫印迹鉴定表明该蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为２８２ｎｍ,ＣＤ谱分析说明具有球蛋白特征。     

大鼠,小鼠胰蛋白酶的分离纯化及动力学性质

采用ＳＴ１－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析的方法,从鼠新鲜胰脏中分离得到纯的胰蛋白酶。大鼠胰蛋白酶的比活为２４６１５ＢＡＥＥＵ／ｍｇ蛋白,总活性回收率４７％;小鼠胰蛋白酶的比活为３２７６８ＢＡＥＥＵ／ｍｇ蛋白,总活性回收率５５％。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,二者的等电点均匀呈现单一蛋白带,两者的分子量都是２４ｋＤ。用等电聚焦电泳测定。二者的等电点均为ｐＩ９．５以上,对它们的动力学性质作了研     

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛和阳离子交换高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛毒液中分离提纯透明质酸酶。经等电聚焦电泳为一条带,ＰＩ＝７．２,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ,经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ＰＨ３．５－５．５范围内有较大活性,最适ＰＨ值４．０,在ＰＨ４．５－６．０范围内稳定,在反应温度为３０－６０℃时有较大活性,最适温度为５０℃;对热稳定。０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活     

神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化

提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题．采用自然系统凝胶电泳,分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的１８ｋＤ蛋白,再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养,揭示了ｐＩ为５．２的１８ｋＤ蛋白具有诱神经生长的作用．经高效液相色谱仪分析获得较纯的１８ｋＤ诱向因子．蛋白／多肽测序仪检测,１８ｋＤ蛋白Ｎ端氨基酸序列为：ＰＥＰＡＷＳＡＰＡＰ．     

以小麦叶片过氧化物酶同工酶pI6.1酶带为生化标记研究小麦在各生长期对白粉病的敏感性(英文)

小麦白粉病以其多发性、普遍性成为世界各地小麦生产的主要病害之一。在研究抗病品种对白粉病菌侵染的抗病机理中,采用等电聚焦凝胶电泳技术对抗、感白粉病小麦品种的叶片过氧化物酶同工酶酶谱进行的比较发现：两者的ｐＩ６．１酶带（位于等电聚焦凝胶电泳酶谱ｐＩ６．１）从拔节期至田间发病期之间的表现水平有很大差别。可以将其视为区别抗、感白粉病品种的特征性酶带。实验采用功能叶片（Ｆｉｇ．１）,对５０个小麦品种品系、抗、感病品种间４个组合的正反交Ｆ１代、１１９株Ｆ２代、６５株抗病品种／感病品种／／感病品种的回交一代（ＢＣ１）材料,在ｐＨ５～８范围内进行过氧化物酶同工酶的等电聚焦凝胶电泳分离。胶片于联苯胺染色液中显色。抗病品种中,ｐＩ６．１酶带在小麦全生育期均有较强的活性,染色后着色深,多属一级酶带;感病品种中,ｐＩ６．１酶带在拔节之后变得模糊不清、甚至消失踪迹,多为三级、零级酶带;然而、感染白粉病之后酶活性重新表现,并再次回升为一、二级酶带（Ｔａｂ．１）。此结果在五个年份中均能很好地重复（Ｔａｂ．２）。抗、感病品种间正反交Ｆ１代的ｐＩ６．１酶带均正常（Ｆｉｇ．２）,证明：ｐＩ６．１酶带的活性是核基因的表达行为。进而在拔节期至发病     

利用生物化学标记分析鉴定一个抗小麦黄矮病的小麦新种质

利用多个生化标记系统对一个抗小麦黄矮病新种质（ＨＧ２９５）进行了分析鉴定,胚乳水溶蛋白等电聚焦表明,在ｐＨ８．０－１０．２范围内,中５有３条在其小麦亲本南大２４１９、克强中匀不存在的克异带,其中只有和经２条在ＨＧ２９５中得到表达。在ＨＧ２９５中,２ＤＳ控制的那条水溶蛋白带发生了的缺失,ＨＧ２９５中２ＤＳ的缺失在Ｐｅｒ－５与Ｅｓｔ－６电泳分析中进一步得到确证,Ｅｓｔ－７酶谱表明,中５与ＨＧ２９５均表     

豆薯种子中两种蛋白质的分离纯化及其性质研究

豆薯（Ｐａｃｈｙｒｒｈｉｚｕｓｅｒｏｓｕｓ）种子经磷酸盐缓冲液抽提,Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱,ＤＥ－５２纤维素柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析,提取出两种高纯度的蛋白成分,命名为ＰａｃｈｙｒｉｎⅠ和Ⅱ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为３３ｋＤ和１４．５ｋＤ,但ＨＰＬＣ分子筛的结果显示ＰａｃｈｙｒｉｎⅡ的分子量为２８ｋＤ,无论在还原条件下,还是在非还原条件下,ＰａｃｈｙｒｉｎⅡ电泳的结果都完全相同,表明该蛋白的亚基不是以二硫键相连。两种蛋白的等电点分别为４．５和６．５．用酸解法测定了它们的氨基酸组成。在无细胞体系中,它们对蛋白合成有较弱的抑制活性,显示它们可能是核糖体失活蛋白（ＲＩＰｓ）家族中的新成员。     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶。酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白。提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８,氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大     

大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H_4的分离纯化和某些性质的研究

采用８－（６－氨己基）－氨基－５＇－ＡＭＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析法和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出了乳酸脱氢酶同工酶Ｈ４．纯化的大熊猫ＬＤＨ－Ｈ４,比活为４４５Ｕ／ｍｇ蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＰＡＧＥ,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分子量为３６０００,等电点为５．４５．经测定大熊猫ＬＤＨ－Ｈ亚基Ｎ端被封闭,Ｃ端氨基酸残基经测定为Ｌｅｕ．氨基酸组成分析表明每个亚基含有５个Ｃｙｓ,９个Ｍｅｔ．     

LAK细胞中一种自由基清除剂——SLP的分离纯化与抗体制备

ＳＯＤ样蛋白（ＳＯＤ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＳＬＰ）是从ＬＡＫ 细胞中发现的一种具有自由基清除功能的蛋白．为阐明ＳＬＰ的生化特性和确定其蛋白序列或基因序列,采用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ层析从ＬＡＫ 细胞中得到部分纯化的ＳＬＰ,并采用ＩＥＦ等电聚焦电泳,活性染色,将含有活性蛋白的胶条直接免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠,制备抗血清并筛选得到多株有中和ＳＬＰ清除自由基活性的单克隆抗体．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果表明ＳＬＰ分子量约为６７ ｋＤ,并测得ｐＩ约为４．２．     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

菜心叶片中乙醇酸氧化酶的多种组分

乙醇酸氧化酶（EC．1．1．3．1,GO）是光呼吸中的关键酶,过去对其电泳行为和等电点的报告互不一致。Grodzinski和Col－man（1972）将菠菜、烟草等植物部分纯化的GO酶液在pH8．3的聚丙烯酰胺凝胶中电泳,活性染色后出现两条活性带,两者对FMN的依赖性有一定差异。Kerr和Groves（1975）对豌豆叶片部分纯化的GO酶液进行等电聚焦电泳,表明其pI值大于9．6.Behrends等（1982）将绿色黄瓜子叶的酶液经聚焦层析,发现GO活性分布在pH8．7附近。但Nishimura等（1983）发现在pH8．9的凝胶中南瓜子叶GO不迁移,而在pH4．5的凝胶中则出现一…     

我国不同地区东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）毒在三种…

用ＳＤＳ－不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳、ｐＨ４．５－不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳和聚丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,分离我国不同地区东亚钳蝎毒。其图谱表明：不同产地的东亚钳蝎毒蛋白的种类及含量存在一定的差异,地区相近,差异较小,反之亦然。     

原鸡不同组织乳酸脱氢酶同工酶研究

本文对中国原鸡的血浆,心脏肌肉和肝脏等不同组织,用薄层等电聚焦电泳进行乳酸脱氢酶同工酶试验比较。结果表明,原鸡不同组织在ｐＨ３．５－９．５时,电泳图和相应的扫描图有显著差异。     

循环自由流等电聚焦方法的建立及应用研究

等电聚焦是利用蛋白质分子或其它两性电解质分子的等电点不同,在一个连续、稳定、线性的pH梯度中进行蛋白质分析分离的技术。薄层凝胶等电聚焦具有高分辨率,但上样量小,聚焦后样品分析处理不便,仅局限于分析。循环自由流液相等电聚焦以液体循环流动代替固相载体,上样量大,聚焦后样品分析处理方便,有较大的制造潜力。Bier等已开展这项技术的研究。该技术应用到遗传工程上可对干扰素等进行精制纯化^[3]。本实验应用循环自由流等电聚焦仪(Recycling free-flow isoelectric fo-cusing,RIEF)进行了pH梯度的建立、模型化合物的分离、相关参数的比较,并被步应用于生物活性蛋白的精制和活性回收,旨在为遗传工程产品下游工艺提供一种新型而行之有效的方法。     

玉米籽粒贮藏蛋白组成及特性的研究

利用等电聚焦（ＩＥＦ）电泳和不连续醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＮＡＵ－ＰＡＧＥ）对玉米籽粒贮藏蛋白的等电点（ｐＩ）和在Ｆ１中的遗传表现以及贮藏蛋白在胚和胚乳中的分布进行研究,结果表明：（１）玉米籽粒贮藏蛋白的ｐＩ在３．５￣８．４５范围内,可分离的有３９条左右,６０％左右的蛋白质属酸性,ｐＩ分布在３．５０－６．８５范围内,４０％左右属中性偏碱,ｐＩ在６．８５－８．４５范围内。（２）籽粒贮藏蛋白在Ｆ１