湖南尖吻蝮蛇毒出血毒素的圆二色性和化学修饰

用远紫外ＣＤ谱研究了湖南产尖吻蝮蛇毒的两个出血毒素（ＤａＨＴ－１、ＤａＨＴ－２）的溶液构象,计算得ＤａＨＴ－１的α螺旋、β折叠、无规卷曲的含量分别为３６．９％、３５．５％、２７．６％;ＤａＨＴ－２的α螺旋、β折叠、无规卷曲分别为２３．４％、３１．３％、４５．３％。随ｐＨ的增大或减小,峰位蓝移,酸性条件下的变化比碱性条件下的变化大。构象单元含量计算表明：α螺旋减少,无规卷曲增多,β折叠基本未变。温度和ｐＨ对ＣＤ谱的影响相似,５０℃时峰位蓝移,α螺旋减少,无规卷曲增多．ＥＤＴＡ对ＣＤ谱影响显著,０．０２ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ便导致两个出血毒素呈极度的无序状态。ＥＤＴＡ完全抑制,半胱氨酸部分抑制,胰蛋白酶不影响它们的出血活性。     

尖吻蝮蛇毒出血毒素DaHT—3的红外光谱测定

目的观察蛇毒出血毒素结构的变化对功能的影响。方法利用傅利叶变换红外光谱仪对尖吻蝮蛇毒出血毒素（ＤａＨＴ－３）在溶液中酰胺Ｉ带吸收光谱的研究,探测了此出血毒素在溶液中的自然构象和加入ＥＤＴＡ螯合剂除去金属离子后构象的变化。结果此出血毒素在水溶液中的自然构象分别是：α－螺旋为３１．８％、β－折叠为５６．１％、转角为１２．１％;而在去除金属离子情况下α－螺旋和β－折叠减少,转角和无规卷曲增加,即加入螯合剂后其α－螺旋、β－折叠、转角和无规卷曲分别变为１１％、２６．４％、４６．２％和１６．５％。由于结构的变化,它的出血活性和蛋白水解酶活性均被丧失。结论金属离子,特别是锌离子在维系蛇毒出血蛋白酶分子中的二级结构中起着很重要的作用。     

皖南尖吻蝮蛇出血毒素生物学活性与圆二色性关系的…

用远紫外ＣＤ谱研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒３个出血毒素ＡａＨＩ、ＡａＨ．Ⅲ和ＡａＨⅣ的溶液构象,ＡａＨⅠ的α螺旋、β折叠、β围角和无规卷一分别为２５．８％、１２．７％、２６．８％和３４．７％;ＡａＨⅢ的二遥结构含量分别为２３．９％、２０．６％、２３。７％和３１．８％;而ＡａＨⅣ分别为１８．２％、３１．０％、１７．２％和３３．６％。当ＰＨ小于４．０或ＰＨ大于１１．０时,３种出血毒素α螺旋减不而β折叠增多,     

皖南尖吻蝮蛇出血毒素生物学活性与圆二色性关系的研究

用远紫外ＣＤ谱研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒３个出血毒素ＡａＨⅠ、ＡａＨⅢ和ＡａＨⅣ的溶液构象,ＡａＨⅠ的α螺旋、β折叠、β转角和无规卷曲的含量分别为２５．８％、１２．７％、２６．８％和３４．７％;ＡａＨⅢ的二级结构含量分别为２３．９％、２０．６％、２３．７％和３１．８％;而ＡａＨⅣ分别为１８．２％、３１．０％、１７．２％和３３．６％。当ｐＨ小于４．０或ｐＨ大于１１．０时,３种出血毒素α螺旋减少而β折叠增多,同时３种出血毒素的酪蛋白水解活性显著下降。ＥＤＴＡ抑制酪蛋白水解活性,表明３种出血毒素均是金属蛋白酶。ＥＤＴＡ、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋能改变３种出血毒素的二级结构,并影响酪蛋白水解活性。     

岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋,４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ,且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同;在２０－４０℃范围内,ＣＤ谱的变化甚微;６０℃时谱峰蓝移;在８０℃或１００℃时,２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时,ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显     

岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋,４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ,且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同;在２０－４０℃范围内,ＣＤ谱的变化甚微;６０℃时谱峰蓝移;在８０℃或１００℃时,２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时,ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显变化,二级结构单元也有变化,凝集兔红细胞的活性也随之减弱;随脲浓度的增加,ＭＤＬ的谱峰蓝移,最终在２１２ｎｍ处出现大负峰。当胍浓度为０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱即有明显变化和活性丧失;胍浓度继续增加,ＣＤ谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在ｐＨ９．０、温度超过８０℃、脲或胍浓度分别高于２ｍｏｌ／Ｌ和０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱发生显著变化的同时,其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失,分子的二级结构单元也发生很大改变。     

岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究

天然态岩豆凝集素（ＭＤＬ）远紫外圆二色性（ＣＤ）谱显示２１６ｎｍ处单一负峰,是一种高β－折叠构象凝集素;近紫外ＣＤ谱呈现２８２ｎｍ处负峰和２６０～２７５ｎｍ及２９５ｎｍ处的负肩,经Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺（ＮＥＭＩ）和对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）修饰ＭＤＬ的巯基,其近紫外ＣＤ谱未发生变化,远紫外ＣＤ谱仅发生细微变化,ＭＤＬ凝集活性保持不变;ＰＣＭＢ过量时,ＣＤ谱呈现典型的无规卷曲谱形,ＭＤＬ完全丧失凝集活性,去除ＰＣＭＢ后,活性又全部恢复．二硫苏糖醇（ＤＤＴ）修饰ＭＤＬ的二硫键并用碘乙酸（ＩＣＨ２ＣＯＯＨ）保护巯基,ＭＤＬ远紫外ＣＤ谱２１６ｎｍ处的负峰红移至２２５ｎｍ,且显著减小;同时,近紫外ＣＤ谱２８２ｎｍ处负峰几乎消失,两负肩分别保持完整,分子中α－螺旋降低,无规卷曲增加较多,ＭＤＬ凝集活性未发生变化．用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）修饰ＭＤＬ分子中的色氨酸,导致２１６ｎｍ负峰蓝移至２０８ｎｍ且变小,分子中无规卷曲和α－螺旋增加,β折叠减少,近紫外ＣＤ谱２９５ｎｍ负肩消失,２８２ｎｍ负峰红移至２８７ｎｍ,ＭＤＬ凝集活性完全丧失．     

抗菌多肽LC1的圆二色性和二级结构预测以及初步晶体学研究

由远紫外圆二色谱算得枯草杆菌Ａ０１４（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．）所分泌的新型抗菌多肽ＬＣＩ在水溶液中的各种构象含量为：α螺旋４．７—６．０％,β折叠６７．２－７２．８％,无规卷曲和转角２１．１－２８．１％。对多种方法的二级结构预测结果进行综合分析表明,ＬＣＩ可能含有３个β转角,４个β折叠片段,仅含少量或不合α螺旋．晶体最大线度可达０．２×０．２×０．４ｍｍ,属于三方晶系。其六方Ｈ晶胞为ａ＝ｂ＝５１．２１空间群为Ｒ３２。     

用激光拉曼探讨不同相对湿度下聚赖氨酸分子的二级结构

本文报导了聚赖氨酸分子的二级结构因其含水量变化而变化.用T.L Lippert等人提出的方法对不同含水量下的聚赖氨酸分子的激光拉曼光谱进行了定量计算.结果表明分子二级结构中的x螺旋、β折叠及无规卷曲成份有明显差异.当分子中相对湿度在0～33%时它的二级结构主要为无规卷曲成份;当湿度在90%-75%时分子的主键盘方式以α螺旋为主;而当湿度小于75%大于40%范围时分子的二级结构改变以β折叠和无规卷曲的肽链构象.     

用激光拉曼探讨不同相对湿度下聚赖氨酸分子的二级结构

本文报导了聚赖氨酸分子的二级结构因其含水量变化而变化.用T.L Lippert等人提出的方法对不同含水量下的聚赖氨酸分子的激光拉曼光谱进行了定量计算.结果表明分子二级结构中的x螺旋、β折叠及无规卷曲成份有明显差异.当分子中相对湿度在0～33%时它的二级结构主要为无规卷曲成份;当湿度在90%-75%时分子的主键盘方式以α螺旋为主;而当湿度小于75%大于40%范围时分子的二级结构改变以β折叠和无规卷曲的肽链构象.     

付里叶变换红外光谱法研究水在稳定多肽构象中的作用

在０—１００％相对湿度（ＲＨ）范围内用竹里叶变换红外光谱研究了水合对聚赖氨酸溴化氢结合物构象的影响。随相对湿度ＲＨ增加,水合分为：无规卷曲、β－折叠和α－螺旋三个稳定的阶段．多肽的水合行为远比报导的复杂,在三个阶段中都不是纯单一结构组分,在任何一个ＲＨ下都存在３－４个吸收组分。在ＲＨ＞４４％以上β特征吸收发生复杂变化,表明β－结构的类型可能发生变化。实验表明,水是肽链柔性的增塑剂,运动性和构象的催化剂。     

天然酶与复性酶的拉曼光谱研究

本文通过对胰凝乳蛋白酶的激光拉曼光谱的研究,揭示了天然酶和复性酶的不同分子空间构象.分子的主链构象主要是β折叠和无规卷曲成份,受过变性剂作用的酶,虽经复活(活性可达95%以上),其复性酶的分子结构仍比天然酶松散,它的无规卷曲成份相应增加.对分子二级结构的计算表明,天然酶分子中蛋白质的α螺旋、β折叠和无规卷曲成份之比为6.3:40.6:53;复性酶分子中上述成份的比为3.6:31:65.天然酶分子中C-C-S-S-C-C构型为gauche-gauche-gauche排列,而复性酶中为trans-gauche-gauche排列.     

FTIR法定量研究水对聚赖氨酸溴化氢结合物二级结构的影响

付里叶变换红外光谱定量法研究表明,在０～１００％相对湿度（ＲＨ）范围内,聚赖氨酸溴化氢结合物（ＰＬＫ－ＨＢｒ）干膜的水合原则上分为无规卷曲、β－折叠和α－螺旋三个构象稳定阶段,其水合行为远较文献报导的复杂。在任一水合度下都不是纯单一结构,其红外谱均由多个吸收组分组成,而且,β－折叠的类型还可能发生变化。     

脯氨酸对蛋白质热稳定性的贡献

单一氨基酸的置换可以改变酶的热稳定性。脯氨酸（Ｐｒｏ）残基在蛋白质结构及其热稳定性中具有特殊作用。它十分偏爱β－转折或无规卷曲结构,而很少出现在α－螺旋和β－折叠中。分析认为在改善酶热稳定性的蛋白质工程中,只要主链构象不发生骤变,则可在适当的β－转折或无规卷曲中引入Ｐｒｏ,通过其刚性的吡咯烷环,降低蛋白质去折叠时的骨架熵,从面使其周围的构象更合理。这一Ｐｒｏ理论（ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｎｅ ｔｈｅｏｒ     

胆碱脱氢酶光谱性质的研究

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）蛋白质部分内源荧光发射峰在３３５ｎｍ,并不受底物的影响,但底物可改变辅基ＦＡＤ部分的内源荧光光谱。应用ＦＴＩＲ技术研究了增溶ＣＤＨ的二级结构,其结果如下：５３．４％α－螺旋,２４．５％β－片层,１３．９％３１０－螺旋及０．５％β－回折。在ＣＤＨ处于非底物结合状态时,分子内部结构表现为α－螺旋以及β－片层优势构象,呈现出球状蛋白样的空间结构特征。在与底物作用过程中,３１０－螺旋的比例逐渐上升至４２％左右,与此同时α－螺旋结构则降低到３５％。提示了底物诱导ＣＤＨ分子内部发生了蛋白分子的重新折叠。     

不同折叠状态的Apocyt．C插膜后构象的研究

比较了不同折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ（Ａｐｏｃｙｔ．ｃ）对大豆磷脂单分子层的插入能力和对酸性、中性磷脂单分子层的插入能力。不同折叠状态的Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与大豆磷脂脂质体作用后的内源荧光发射谱提示它们各自在膜上的构象状态不同。与纯磷脂脂质体作用后的圆二色谱发现,溶液中折叠状态不同的鸡心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与膜作用后的构象也不同,溶液中处于无规心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与ＤＭＰＧ脂质体作用后的构象也呈α螺旋,但螺旋含量明显低于前者。折叠状态的鸡心Ａｐｏｃｙｔ．ｃ与ＤＭＰＣ作用后,其构象几乎没有变化。     

商品果胶酶中endo－PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料,经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００两步骤分离纯化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２,其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ,含糖量为１１．２２％及８．３％,最大紫外吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处,氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高,Ｍｅｔ含量较低,不含Ｃｙｓ,并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠,其中ｅｎｄｏ－ＰＧ１含α螺旋４５．１％,β折叠２４．９％;ｅｎｄｏ－ＰＧ２含α螺旋３９．６％,β折叠３６．５％。     

pH值及Na＋诱导α-辅肌动蛋白构象变化

用ＦＴＩＲ研究了不同浓度ＮａＣｌ溶液中α－辅肌动蛋白二级结构的变化。实验结果发现,在不同ＮａＣｌ浓度下,α－辅肌动蛋白至少具有三种不同的构象：低盐（３０－９０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）,中盐（１５０ｍｍｏｌ／Ｌ－２５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）与高盐（３００－５００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）构象。在低盐溶液中,α－辅肌动蛋白含有较高比例的α－螺旋结构（３３－３４％）,随着溶液中钠盐浓度的升高部分α－螺旋结构转变为β－转角或β－折叠结构。此外还研究了ｐＨ诱导α－辅肌动蛋白构象的变化,定量分析结果表明在ｐＨ７．０和中盐条件下（α－辅肌动蛋白交联Ｆ－ａｃｔｉｎ成束的活性最高）,α－辅肌动蛋白β－转角结构含量最高,而α－螺旋结构含量较低。由此可见,β－转角结构在α－辅肌动蛋白交联肌动蛋白成束中可能具有重要的功能。     

鸡心脱辅基细胞色素c自发折叠的进一步研究

将野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ及其突变体Ｖ９２Ａ的１７位半胱氨酸残基突变为丝氨酸,再将表达纯化的Ｖ９２Ａ／Ｃ１７Ｓ和Ｗ／Ｃ１７Ｓ用荧光探针ＩＡＥＤＡＮＳ标记．通过测量ＡＥＤＡＮＳ－Ｃｙｓ－１４的荧光光谱、荧光寿命以及ＡＥＤＡＮＳ与Ｔｒｐ－５９之间的荧光共振能量转移效率、比较了Ｖ９２Ａ与野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ因折叠状态不同引起的Ｎ端构象状态及肽链间相互作用的差异．结果显示Ａｐｏ．ｃ无论在低盐浓度下的无规卷曲状态还是高盐浓度下的融球态,Ｖ９２Ａ都较野生型处于更松散的折叠状态,此外,在鸡心脱辅基细胞色素ｃ的自发折叠中Ｎ端肽段并不起主要作用     

聚赖氨酸和它的溴化氢结合物结构变化的红外光谱研究

聚赖氨酸(PLys)和它的溴化氢结合物(PLys-HBr)在不同的相对湿度(R.H.)下,用红外光谱仪测得它们的结构变化.固态PLys-HBr(平均分子量(MW)55000)在40%R.H.以下能保持无规卷曲结构,在40—70%R.H.之间为β-折叠,70%R.H.以上为α-螺旋.PLys由于它们的平均分子量不同,结构变化差别较大.PLys(MW 55000)在各种相对湿度下保持α-螺旋,直至96%R.H.才出现β-折叠.PLys(MW 14000)在40%R.H.以下能保持无规卷曲结构,在40—85%R.H.之间主要为β-折叠,85%R.H.以上为α-螺旋.