降钙素基因相关肽（CGRP）受体的纯化和鉴定

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）为３７肽,它在体内主要分布于神经系统和心血管系统,是较强的扩张血管物质。人们已认识到脑部的ＣＧＲＰ最多,由于新鲜猪脑来源丰富,故我们选用猪脑为材料来纯化ＣＧＲＰ受体。以期为该受体的深入研究提供足够的材料和奠定基础,纯化的受体将用于制备抗ＣＧＲＰ受体的单克隆抗体,为了从猪脑中纯化ＣＲＲＰ受体,首先用含有胆盐的磷酸盐缓冲液将该受体从猪脑细胞膜上解离下来,解离下来的受体量较多,而杂蛋白较少,且受体活性可保持较长时间不降低。以离子交换柱层析（ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－２５）进行初步分离纯化,再用化学合成的ＣＧＲＰ与活化的琼脂糖（Ａｆｆｉ－Ｇｅｌ－１０,Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品）制备的亲和层析柱进行亲和层析,取得的纯化受体保留了与１２５Ｉ－ＣａＧＲＰ结合的能力,而与降钙素（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）神经肽Ｙ（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ）和Ｋａｔａｃａｌｃｉｎ等无交叉反应,但与有４６％氨基酸序列同源性的Ａｍｙｌｉｎ有一定交叉反应。纯化的受体经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相色谱（ＨＰＬＣ）鉴定呈现单一蛋白条带或蛋白峰,其位置对应分子量为６６ｋＤ。     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,发现只有抗ＣＧＲＰ－１的抗血清能够与ＣＧＲＰ很好地结合。因此,可以推测ＣＧＲＰ的羧端部分是其免疫活性部位。     

降钙素受体刺激肽：降钙素基因相关肽家族的新成员

降钙素基因相关肽 (ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ ,ＣＧＲＰ)家族包括五个成员 :降钙素 (Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ,ＣＴ)、胰淀粉样酶 (Ａｍｙｌｉｎ)、两种降钙素基因相关肽和肾上腺髓质素 (ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ,ＡＤＭ)。ＣＧＲＰ和其受体在体内广泛分布 ,是目前已知最强的内源性扩血管肽 ;ＣＴ主要参与体内的钙代谢 ;Ａｍｙｌｉｎ位于胰腺的 β细胞 ,可能与Ⅱ型糖尿病有关 ;ＡＤＭ的生物学作用与ＣＧＲＰ相似 ,亦具有强的扩血管作用。ＫａｔａｆｕｃｈｉＴ等将在 2 0 0 3年的ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ杂…     

抗金属螯合四肽单抗ScFv基因在大肠杆菌中的表达

作者将获得的抗３株金属螯合四肽单克隆抗体的轻,重链可变区基因,通过ｌｉｎｋｅｒ连接成单链基因,并在其后插入编码ＣＧＲＰ的Ｎ端前十三肽的３９ｂｐ基因片段,组成Ｌｖ－ｌｉｎｋｅｒ－Ｈｖ－ＣＧＲＰ,将该基因克隆入分泌表达载体ｐＴＣ０１中,获得实物。     

炎症介质在内毒素引起大鼠肠系膜血管床降钙素基因相关肽释放中的作用

本研究在离体大鼠肠系膜血管床灌流模型上,采用特异放免法测定灌流液中的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）,观察几种常见炎症介质在内毒素引起ＣＧＲＰ释放中的作用。结果显示：前列腺素合成酶抑制剂地塞米松、布洛芬与消炎痛,缓激肽受体Ｂ２拮抗剂ＨＯＥ１４０,血小板激活因子拮抗剂ＷＥＢ２０８６,组胺Ｈ１受体拮抗剂苯海拉明以及和组胺Ｈ２受体拮抗剂西咪替丁,均能明显抑剂制内毒素引起的ＣＧＲＰ释放,５羟色胺受体拮抗剂ＩＣＳ２０５９３０却无明显作用。从而提示：内毒素引起ＣＧＲＰ释放是通过炎症介质前列腺素、缓激肽、血小板激活因子和组胺介导的,阻断或减少炎症介质的产生可望减轻内毒素血症时ＣＧＲＰ的过量释放。     

炎症介质在内毒素引起大鼠肠系膜血管床降钙素基因相关…

本研究在离体大鼠肠系膜血管床灌流模型上,采用特异放免法测定灌流液中的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）观察几种常见炎症介质在内毒素引起ＣＧＲＰ释放中的作用,结果显示：前列腺素合成酶抑制剂地塞米松,布洛芬与消炎痛,缓激肽受体Ｂ２拮抗剂ＨＯＥ－１４０,血小板激活因子拮抗剂ＷＥＢ２０８６,组胺Ｈ１受体拮抗剂苯海拉明以及和组胺Ｈ２受体拮抗剂西咪替丁,均能明显抑剂制内毒素引起的ＣＧＲＰ释放,５羟色胺受体拮抗剂ＩＣ     

降钙素基因相关肽和心房肽对犬冠脉的舒张作用

本实验利用冠脉内给药和离体血管灌流等方法观察比较了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和心房肽（ＡＮＰ）对犬冠脉循环的影响及其对犬大小冠状动脉的舒张作用。结果显示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ均能明显增加冠脉血流量、降低大小冠脉阻力,两者均呈剂量依赖性舒张大小脉冠脉血管。ＡＮＰ的作用显著小于ＣＧＲＰ,其中大冠脉对两者的反应性显著小于小冠脉,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ对冠脉的舒张作用均无内皮依赖性。结果提示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ直接     

抗吗啡活性肽的分离纯化及一级结构测定

报道了一种新的具有抗吗啡镇痛活性的肽的分离纯化,并进行部分一级结构测定．狗脑先经醋酸提取,冷冻成干粉,然后上ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ．Ｆ柱,最后经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化,鉴定纯度后,测定其抗吗啡镇痛活性,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其分子量为８．９ｋＤ．氨基酸序列分析测得该肽的Ｎ端序列为：Ｖ－Ｉ－Ｓ－Ｖ－Ａ－Ｄ－Ｗ－Ｔ－Ｑ－Ｉ－Ｆ－Ｔ－Ｍ－Ｒ－Ｙ－Ｆ－Ｉ－Ｔ－Ｇ－Ｙ－Ｈ－Ｑ－Ｄ－Ｙ－Ｘ－Ｇ－Ｌ－Ｈ－Ｉ－Ｇ．经部分一级结构同源序列检索,未见与此有同源的蛋白质的报道,暂命名该肽为ＣＣ４肽     

大鼠内毒素血症不同时期血CGRP和背根神经节CGRP mRNA水平的变化

本文采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定大鼠内毒素血症不同时期胸腰段背根神经节降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）ｍＲＮＡ水平的改变,结合血浆ＣＧＲＰ水平的改变,以期全面了解大鼠内毒不血症不同时期ＣＧＲＰ释放与合成的变化。结果显示：注射内毒素（５ｍｇ／ｋｇ）后３０ｍｉｎ时,大鼠血浆ＣＧＲＰ开始增高,而背根神经节ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ水平无明显变化;注射内毒素后３ｈ时,血浆ＣＧＲＰ及背根神经节ＣＧＲＰ     

降钙素的基因结构与表达调控

降钙素与降钙素基因相关肽（ＣＴ／ＣＧＲＰ）基因编码一组多肽,即降钙素（ＣＴ）、降钙素的Ｎ端肽和Ｃ端肽、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及淀粉不溶素（Ａｍｙｌｉｎ）。ＣＴ／ＣＧＲＰ基因转录而成的ｍＲＮＡ前体,在不同组分中通过选择性加工形成ＣＴ ｍＲＮＡ或ＣＧＲＰｍＲＮＡ,再通过翻译及蛋白质加工,最后形成成熟的降钙素或降钙素基因相关肽。本简单介绍一下降钙素的基因结构及表达调控方面的研究进展。     

降钙素基因相关肽对小鼠肠道集合淋巴结T细胞及腹腔巨噬细…

本工作观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对小鼠肠集合淋巴小结（ＰＰ结）Ｔ细胞和小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果表明：ＣＧＲＰ能明显抑制ＰＰ结Ｔ淋巴细胞的转化,并且这种作用与Ｔ细胞的分化增殖状态有明显关系。此外ＣＧＲＰ对腹腔巨噬细胞ＤＮＡ和蛋白质的合成也有明显的抑制作用。以上结果提示ＣＧＲＰ可能作为一种抑制型的神经内分泌免疫调节肽而对肠道免疫功能发挥着重要的调节作用。     

降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA在大鼠淋巴细胞中的表达

最近,我们研究发现大鼠胸腺和淋巴结淋巴细胞中存在降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）样免疫反应活性。应用人工合成的可特异扩增降钙素／降钙素基因相关肽基因部分片断的寡核苷酸引物,通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测在大鼠脊髓背根神经节、胸腺细胞及肠系膜淋巴结淋巴细胞中是否存在ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ,进一步研究大鼠淋巴细胞能否合成ＣＧＲＰ。结果显示,通过ＲＴ－ＰＣＲ从脊髓背根神经节（阳性对照）、胸腺和淋     

降钙素基因相关肽对小鼠肠道集合淋巴结T细胞及腹腔巨噬细胞功能的影响

本工作观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对小鼠肠集合淋巴小结（ＰＰ结）Ｔ细胞和小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果表明：ＣＧＲＰ能明显抑制ＰＰ结Ｔ淋巴细胞的转化,并且这种作用与Ｔ细胞的分化增殖状态有明显关系。此外ＣＧＲＰ对腹腔巨噬细胞ＤＮＡ和蛋白质的合成也有明显的抑制作用。以上结果提示ＣＣＲＰ可能作为一种抑制型的神经内分泌免疫调节肽而对肠道免疫功能发挥着重要的调节作用。     

糖尿病大鼠肠系膜动脉降钙素基因相关肽释放减少以及一氧化氮的作用

我们以前的工作已表明,内毒素可引起降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）从大鼠肠系膜动脉床释放,此作用部分是通过一氧化氮介导的。我们在离体肠系膜动脉床研究了内毒素引起糖尿病大鼠ＣＣＲＰ释放的改变以及一氧化氮所起的作用。采用ＣＣＲＰ放射免疫分析法测定灌流液中ＣＣＲＰ含量,ＲＴ－ＰＣＲ法测定背根神经节ＣＧＲＰｍＲＮＡ水平。结果显示：内毒素累积灌流引起ＣＧＲＰ浓度依赖性地释放增多,此作用在糖尿病大鼠系膜动脉术明显     

降钙素基因相关肽的研究进展

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）是由３７个氨基酸残基构成的生物活性多肽,与降钙素（ＣＴ）源子一个共同的基因。ＣＧＲＰ分布广泛,具有很强的血管扩张、降低血压以及心肌正性肌力作用等,并参与心血管系统稳态的调节。目前,ＣＧＲＰ已能人工合成,将为某些心血管疾病如高血压、心肌缺血、痉挛性或闭塞性周围血管疾病等的治疗提供一条崭新的途径。     

豚鼠胆囊内CGRP免疫反应阳性神经纤维的分布特点

应用免疫组织化学ＡＢＣ法，研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）免疫反应阳性神经纤维在豚鼠胆囊内的分布及分布特点。结果表明：胆囊内有较丰富的ＣＧＲＰ免疫反应阳性神经纤维，它们多呈念珠状膨大，在血管壁内及血管周围区域数量较多。胆囊颈部和胆囊管ＣＧＲＰ免疫反应阳性神经纤维的分布多于胆囊底部和体部。提示ＣＧＲＰ对胆囊的功能有调节作用。     

恒河猴肺内CGRP及CGRP mRNA免疫组织化学和原位杂交的研究

本实验采用免疫组织化学ＡＢＣ－ＧＤＮ法和地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及其ｍＲＮＡ在恒河猴内的表达。结果显示ＣＧＲＰ分布于恒河猴肺内各级支气管粘膜上皮的神经内分泌细胞（ＮＥＣ）和神经上皮样小体（ＮＥＢ）中。ＣＧＲＰ杂交阳性细胞的分布与免疫组织化学的结果相同。ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ杂交信号均匀分布于整个细胞质,而ＣＧＲＰ免疫反应物仅在神经内分泌细胞的基部更明显,说     

电场刺激对离体温育垂体前叶促肾上腺皮质激素分泌的影响

本实验应用离体温育大鼠垂体前叶组织块结合电场刺激及放射免疫测定方法,观察了垂体前叶内的神经纤维兴奋对促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）分泌的影响以及其它因素的作用。结果表明,一定参数的电场刺激使温育的大鼠四分之一垂体前叶组织块ＡＣＴＨ分泌增加,能被河豚毒素（ＴＴＸ）和藜芦碱部分阻断,此效应也可被地塞米松显著抑制,而同一参数的电场刺激与促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）诱发的ＡＣＴＨ分泌没有相互作用。经典神经递质受体阻断剂阿托品、心得安、酚妥拉明对电场刺激诱发的ＡＣＴＨ分泌没有显著影响;ＧＡＥＡ＿Ａ受体拮抗剂荷包牡丹碱明显促进此效应。该作用不受Ｐ物质拮抗剂ｓｐａｎｔｉｄｅ的影响,而降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）受体拮抗剂ＣＧＲＰ片段８－３７能部分阻断这一作用。上述结果提示电场刺激所诱发的ＡＣＴＨ分泌可能部分由垂体前叶内ＣＧＲＰ能神经纤维介导。     

电刺激致心脏骤停复苏兔血浆ET、CGRP含量变化的研究

心脏骤停复苏过程中血浆内皮素 (ＥＴ)、降钙素基因相关肽 (ＣＧＲＰ)含量变化及影响的报道甚少 ,本文以电刺激方法致心脏骤停兔模型为研究对象 ,动态观察了心脏骤停及心肺复苏过程中血浆ＥＴ、ＣＧＲＰ含量的变化 ,以期为临床心肺复苏提供可靠的理论依据。1　材料与方法(1)材料　日本大耳白兔 30只 ,体重 2 .2～ 3.3ｋｇ ,雌雄兼用 ,随机分为实验组 2 0只和对照组 10只。ＥＴ、ＣＧＲＰ放射免疫试剂盒 ,解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。ＣＡＴ ＲＩＡ16放射免疫全自动γ计数器 ,日本日立公司生产。(2 )动物模型制作　实验组用 3%戊巴…