实验8 质粒DNA的提取

一、氯化铯超速离心提取法 1.在LB培养基(10克蛋白胨,5克酵母膏,10克氯化钠,15克琼脂粉,溶解于水后,用1N NaOH调节pH至中性,加水至1,000毫升,高压蒸汽灭菌)上划线接种含有待抽提的质粒的细菌。37℃培养过夜。如果质粒上带有抗性基因,则在培养基内加入相应的抗菌素,例如20微克氨苄青霉素/毫升,12.5—15微克四环素/毫升。 2.挑出单菌落接种在10毫升LB培养液(除不加琼脂粉外,成份与LB培养液相同)中,37℃培养过夜。     

用印片法制青霉和曲霉的永久封片

(一)材料和方法 1.菌种:青霉(Penicillium chrysogenum),黑曲霉(Aspergillus niger) 2.培养:将青霉和黑曲霉斜面制成悬液,吸0.1ml于马铃薯培养基(马铃薯200克,蔗糖20克,琼脂粉11克,水1000毫升,15磅/吋~2灭菌30分钟)平板上涂布,于28℃培养2天。 3.制片:取两块干净载玻片,在其中一块上涂一层薄胶层(胶为光学树脂),然后用解剖针在青霉或曲霉平板上挖一小块带菌琼脂(约0.5厘米~2),将琼脂块放在薄胶层上(培养面朝下),用另一块载玻片在琼脂块上轻轻按压,然后将琼脂块小心弃去。将印有菌迹的载玻片     

蝴蝶兰花梗腋芽的离体培养

植物名称:蝴蝶兰(Phalanopsis hyorid) 材料类别:花梗腋芽及花序顶端。培养条件:蝴蝶兰开花约一个月后,剪取其花梗顶端及各个花梗腋芽,用漂粉精溶液分两级消毒后,切成2—3厘米长的切段(每段带一胶芽),基部向下插于培养基上。诱导花梗腋芽启动的培养基(A): Hyponex(7—6—9)3克蔗糖 35克胰蛋白胨 2克琼脂 15克水 1000毫升 PH=5.0     

金针菇的人工栽培

金针菇((Collybia velutipes)又名冬菇、构菌、朴蕈等。属伞菌目、口蘑科。口味鲜美,营养丰富,特别是人体所必需的赖氨酸和精氨酸的含量比其它食用菌高数倍。另外,它还有抑癌和抗癌的作用。 (一) 培养基和培养料的配制 1.马铃薯培养基:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,加水至1000毫升。 2.棉籽壳培养料:棉籽壳88％,麸皮10％,葡萄糖     

松树某些外生菌根真菌对防治油松幼苗猝倒病的作用

从油松根部分离到的外生菌根真菌:牛肝菌之一种(Boletus sp.)和厚环粘盖牛肝菌(Suillus grevillei)除对油松(Pinus tabulaeformis)幼苗猝倒病有防治作用外,还能促进幼苗生长,其显著性水平P=0.01。引起油松幼苗猝倒病的病原菌主要是立枯丝核菌(Rhizoctonia solant)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。在盆栽接种试验中,用牛肝菌和厚环粘盖牛肝菌接种,油松幼苗发病率比对照降低21.0—36％;在田间接种试验中,松苗发病率比对照降低16.3—25.8％。用扫描电镜对接了种的油松幼苗进行观察,发现在油松营养根表面形成密集的菌丝套,而根尖则没有。用石腊切片观察到围绕在菌根皮层细胞周围的哈蒂氏网。采用500毫升的广口瓶,盛入草炭150克、细砂50克、玉米粉9克、红糖1克、麦芽汁(1.03波美)300毫升的配方,接种牛肝菌菌丝体,置30℃,10天左右产生山蘑菇子实体。     

油梨童期茎切段试管培养发根的生物鉴定

材料与方法 种子的发芽 将去皮种子用含有0.5％次氯酸钠(“Purex”,用水稀释10倍)和0.1％吐温20乳化剂的溶液浸泡灭菌。将子叶分开,切下带有1—2厘米厚的子叶的胚轴(带有胚根和胚芽),移栽入营养管内。发芽培养基含有MS培养基的盐分和蔗糖3000(单位:毫克/升,下同)、肌醇100、盐酸硫胺素0.4、活性炭1000和“TC”琼脂8000。在加入琼脂前,pH调整到5.7。每个容积为25×150毫米的试管加入营养琼脂25毫升。试管用聚丙烯罩罩口,以1.05公斤/厘米~2压力消毒15分钟。每个培养管放入一     

“遗传学和进化”实验

实验4 单基因杂种杂交 (一)实验器材 1 培养管的真实遗传野生型雄果蝇;1培养管的残翅处女雌;2培养管的培养基(每管贴有一空白标签);孵化箱(调至25℃);其它器材见实验3。注释: 下列配料可为100个培养管提供足够的培养基:120克玉米粉;20克琼脂;20克黄糖;80克红糖;20克酵母;3克尼巴精(nipagin,一种霉菌抑制剂),1升凉水。配制时用约20毫升凉水,使玉米粉呈糊状。把琼脂放入剩余的凉水中加文火。逐渐加入糊状玉米、黄糖和红糖,充分搅拌混合液。沸     

从小黑麦未授粉的幼嫩子房培养出小植株

通过未授粉子房的离体培养技术,在Ms无机盐十甘氨酸(7.7毫克/升)十天门冬素(1480毫克/升)十烟酸(0.15毫克/升) VB_1(0.25毫克/升)十VB_6(0.25毫克/升)十泛酸钙(0.25毫克/升) 2%蔗糖的固体培养基上,由小黑麦1号未授粉的幼嫩子房中诱导出愈伤组织,诱导率为53.4—66.8%。将愈伤组织转移到N_6 2.4-D(0.5毫克/升) 动力精(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂的培养基上,或在愈伤组织转移到N_6 2.4-D(2毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂培养基前后,分别注入2毫升的N_6 IAA(1毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖的培养液,均可由愈伤组织分化出小植株,但幼苗移栽时多数未成活,仅一株抽穗开花,然而不育。本文还讨论了外源激素对植株分化的作用问题。     

食品上的应用

<正> 853763 通过抗磺胺突变株生产色氨酸[英]/Shiio,L.…∥Agric.Biol.Chem.-1984,48(8).-2073～2080[译自 DBA,1984,3(23),84-11237]将抗5-氟色氨酸和氮丝氨酸的高产率色氨酸生产菌——黄短杆菌 A-100用亚硝基胍进行诱变处理。分离出的突变株是在含1000-2000微克/毫升磺胺的琼脂平板上出现的。突变株225在含13%的葡萄糖作为碳源的培养基中,经72小时培养后产生19克/升的色氨酸,与此相比较亲株 A-100只产生11.3克/升的色氨酸。在含10%的蔗糖培养基上,L-     

一种霉菌放线菌悬滴标本的制作方法

青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillum)和放线菌(Actinomycetes)是中学植物实验课必需的实验材料。本人经过摸索,为中学制作出霉菌、放线菌活体悬滴标本和永久装片,很受中学老师们的欢迎,在中学简陋条件下很易制作,效果极佳,现介绍如下。 1.悬滴活标本的制作方法 (1)倒平板 100毫升水中加2克琼脂,煮开使琼脂溶化,待凉至40℃左右(不烫手为度),将该液态琼脂培养基倒入直径90毫米的培养皿中,每皿倒培养基15—20毫升左右,约2—3毫米厚。待琼脂凝固(5—10分钟左右)     

介绍衣藻的几种培养方法

一、藻种的采集每年的早春或晚秋常有纯群的衣藻生在有机质比较丰富的水坑、池塘等处,特别是在温室中的积水缸里常可采到比较纯的衣藻。采集前先用野外工作的显微镜对水中藻类进行检查鉴定、确为较纯的衣藻而且浓度很高,就直接用吸管将绿色水样吸入到300—500毫升的玻瓶中,以装至容积的2/5—1/2为宜,保证水中有足够的氧气。     

实验9 λ噬菌体DNA的提取

一、平板扩增抽提法 1.LB培养基上划线接种宿主菌,37℃培养过夜。 2.挑取单菌落接种在LB培养液中,培养液含0.2％麦芽糖。37℃振荡培养过夜。 3.0.5毫升菌液;0.1毫升 Mg~++Ca~++溶液(10mM MgCl_2/10mM CaCl_2);噬菌体[10~5pfu(噬斑生成单位)],混和,37℃水浴中保温15分钟。 4.加入4毫升42—45℃含0.7％琼脂粉的LB培养液,迅速混匀,铺在直径为8.5厘米的含1.5％琼脂粉的LB培养基上。37℃培养过夜。铺有上层培养基的一面朝上培养。     

6-BA对杏胚萌发成苗的效应

剥去杏(Prunus armeniaca)果肉,砸开果核并小心取出种子放入消过毒的三角瓶中。接种前用70％酒精浸泡1min,再用0.1％升汞浸泡15min,最后用无菌水冲洗3次,随后在超净工作台上去掉种皮,将胚接种在附加不同浓度6-BA的改良MS培养基(1/2MS大量元素 1/2MS微量元素 1％蔗糖 0.8％琼脂)中。接种后不经低温处理直接放入培养室(26±2℃,3000lx,每天光照16h)培养,10d后调查幼苗生长情况,结果如下:     

抗氧化剂和吸附剂对槲蕨外植体中几种与褐化有关生理指标的影响

槲蕨[Drynaria,fortunei(Kze)J.Sm.]采自本校校园。取其幼嫩走茎,去除表皮后,用自来水冲洗干净。在超净工作台上先用70%乙醇浸泡30 S,再用0.1%HgCl_2,表面消毒4min,用无菌水冲洗5～6次后,接种在以下培养基中:(1)MS(对照);(2)MS 10mg·L~(-1)抗坏血酸(VC);(3)MS 1000 mg·L~(-1)聚乙烯吡咯烷酮(PVP);(4)MS 1000mg·L~(-1)活性炭(AC)。各培养基均加入1mg·L~(-1)6-BA、0.2 mg·L~(-1)NAA、3%蔗糖和0.8%琼脂。每种培养基接种18瓶。培养温度(25±2)℃,每天光照12 h,光照强度20～40μmol·m~(-2)·s~(-1)。培养1、3、     

淀粉可以做培养基的凝固剂

在配制固体培养基时,通常用琼脂做凝固剂。近来我们用普通淀粉做凝固剂,进行了根霉、曲霉、青霉和蕨的原叶体的多次培养实验,效果也很好。一、根霉、曲霉和青霉的对比实验:把马铃薯去皮后切成小块,取20克马铃薯小块放入100毫升水中,加热煮沸十分钟,用两层纱布过滤后在滤液中补足水到100毫升,加2克白糖,用     

肺血管注射制片

材料猫、兔、豚鼠、大鼠。步骤 1.注射浆的配制 (1)取5克卡红放入40毫升蒸馏水中,边搅拌边加氨水,至完全溶解后,用滤纸过滤。 (2)取明胶20克入150毫升蒸馏水中,置水浴锅中加热充分溶解。     

石油发酵长链二元酸的研究——(Ⅱ)热带假丝酵母(Candida tropicalis)多倍体的诱变育种

热带假丝酵母(Candida tropicalis)79经 MNNG诱变后获得产长链二元酸突变株N—26,十三烷1:13二羧酸产量为10克/升。N-26％用秋水仙碱和樟脑分别诱发产生多倍体细胞 NP_(CO)2和NP_(Oa)18,十三烷1:13二羧酸产量分别提高到17.3克/升和18.3克/升。多倍体NP_(CO)2和NP_(Oa)18的个体大,生长速率快,DNA含量分别为3.2×10~(-6)微克/细胞和4.O×10~(-6)微克/细胞,而 N-26则为1.6×10~(-6)微克/细胞。 多倍体NP_(OO)2和NP_(Ca)18对MNNG均较敏感,致死率较N—26高一倍,诱变之总突变频率则较原种高8—10％,以0.25毫克/毫升MNNG处理时正突变频率可提高一倍左右,因此获得高产突变株的机率显著提高。从多倍体NP_(OO)2和NP_(Ca)18经0.25毫克/毫升MNNG处理所得高产菌株、NP_(CO)N22和 NP_(Oa)N39,十三烷 1:13二羧酸的产量分别提高到33.5克/升和34.5克/升。 对多倍体高产变种生理特性的初步观察指出多倍体细胞较易为蜗牛细胞壁溶解酶作用生成原生质体,电子显微镜初步观察指出多倍体细胞的细胞壁可能较薄。 离体酶活力的测定指出多倍体变种的三羧酸循环酶系、呼吸链酶系和过氧化氢酶活力增加,因而推测多倍体变种之所以提高长链二元酸的产量可能是由于ATP的供应增加,促进了烷烃的氧化,而过氧化氢酶的增加可能是对于烷烃氧化过     

衣藻鞭毛银染色法

“衣藻的观察”是一个取材方便、步骤简单的实验。但是鞭毛很难看得清,我们用银染色法染色效果很好,简介如下。染液配制极为简单,取硝酸银结晶0.2—0.3克,加蒸馏水10毫升,摇动溶解即可。注意配好的溶液应在暗处保存。最好是现用现配。先用干净滴管吸一小滴(切不可太多)硝酸银溶液     

在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

用ELISA方法测定抗百日咳LPF—HA,F—HA抗体效价

<正>一、材料 a、聚氯乙烯微量滴定板。 b、提纯抗原。LPF-HA和F-HA抗原,是由百日咳S型菌培养上清提取精制。 c、包被用缓冲液,碳酸钠1.59克,重碳酸钠2.93克,叠氮钠0.2克,溶于1000毫升蒸馏水中。 D、洗脱液。氯化钠8克,磷酸二氢钾0.2克,磷酸氢二钠2.9克,氯化钾0.2克,叠氮钠0.2克,吐温-200.5毫升,溶于1000毫升蒸馏水中。