摩根摩根菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解摩根摩根菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）、金属酶（MBLs）、碳青霉烯酶（KPC）情况,并分析其对17种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs和AmpC及MBLs采用三维试验检测,碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定17种常见抗菌药物的耐药性。结果 102株摩根摩根菌单产ESBLs 15株,检出率为14.71%;单产AmpC 8株,检出率为7.84%;单产金属β-内酰胺酶（MBLs）3株,检出率为2.94%;所有菌株中未检出碳青霉烯酶（KPC）;同产ESBLs及AmpC 6株,检出率为5.88%;未发现其他双产酶菌株。摩根摩根菌非产酶分离株对17种抗生素的耐药率均低于50.0%;摩根摩根菌产酶分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于15.0%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.05）。同产ESBLs＋AmpC与耐亚胺培南摩根摩根菌分离株呈多重耐药。结论我院摩根摩根菌分离株产生多种β-内酰胺酶,且对常用抗生素耐药性比较严重,建议临床医师合理使用抗生素,以免耐药菌株的产生。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解肺炎克雷伯菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)、金属酶(MBLs)、碳青霉烯酶(KPC)情况,并分析其对19种常见抗菌药物的耐药性.方法 ESBLs和AmpC及MBLs采用三维试验检测,碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定19种常见抗菌药物的耐药性.结果 582株肺炎克雷伯菌单产ESBLs 168株,检出率为28.86％;单产AmpC52株,检出率为8.93％;单产KPC 38株,检出率为6.53％;所有菌株中未检出MBLs;同产ESBLs及AmpC43株,检出率为7.39％;同产ESBLs及KPC 12株,检出率为2.06％,同产AmpC及KPC 10株,检出率为1.72％,未发现同产ESBLs、AmpC及KPC 3种酶菌株.单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs+ AmpC肺炎克雷伯菌分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于3.0％,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义(P＞0.05);对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(P＜0.01).另外,同产ESBLs+ AmpC肺炎克雷伯菌分离株与单产ESBLs、单产AmpC株相比,对头孢他啶、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明等多种抗生素表现为明显升高(P＜0.01或P＜0.05).单产碳青霉烯酶株、同产ESBLs及KPC、同产AmpC及KPC菌株对多粘菌素B的耐药率为28.94％～33.33％,其余抗生素的耐药率均高于50.0％;单产KPC株与非产酶菌株相比,对所有抗生素的耐药率均明显升高(P＜0.01).结论 肺炎克雷伯菌分离株产生多种β-内酰胺酶,且对常用抗生素呈高度耐药,建议临床医师合理使用抗生素,以免耐药菌株的产生.     

超广谱β-内酰胺酶菌种间分布及耐药性分析

目的：了解质粒介导超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的产生及菌种间分布。方法：将初筛的可疑菌用E-test法确诊,对细菌进行ESBL检测,药物敏感试验用K-B纸片法进行。结果：717株革兰阴性菌中,检出ESBL61株,其中大肠埃希菌16株,肺炎克雷伯菌12株,阴沟杆菌9株,弗劳地枸椽酸杆菌6株,类产碱杆菌5株,黄杆菌,施氏假单胞菌各3株,聚团肠杆菌2株,液化沙雷菌2株,铜绿假单胞菌,不动杆菌,鼠伤寒沙门菌各1株,对亚胺培南,丁胺卡那,环内沙星,呋喃妥因和头孢他啶的敏感率分别为100%,30.2%,26.6%,71.5%和37.7%,结论：ESBL易借助耐药质粒传播,在细菌间分布广泛,具有较高的检出阳性率。     

摩氏摩根菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶检测

目的了解摩根摩根菌临床分离株对抗菌药物的体外敏感性和临床分布,研究摩氏摩根菌超广谱β-内酰胺酶基因类型分布。方法用K—B法对67株摩氏摩根菌进行药物敏感性检测;PCR法检测超广谱β-内酰胺酶基因,并对PCR结果进行测序分析。结果摩氏摩根菌株对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、氨苄西林／舒巴坦、庆大霉素、呋喃妥因均已产生较高的耐药率;而对环丙沙星、左旋氧氟沙星和第三代头孢菌素的耐药率保持在较低水平;对亚胺培南、美洛培南、头孢西丁100％敏感。基因型分析显示有5株携带CTX-M基因,其中3株摩根摩根菌基因型为CTX—M-14型,2株为CTX—M-15型。结论摩氏摩根菌ESBLs检出率仍较低;5株产超广谱β-内酰胺酶摩氏摩根菌对多种抗菌药物耐药,其基因型为CTX—M-15或者CTX—M-14;需加强对不常见肠杆菌科细菌的耐药监测。     

福氏志贺菌CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性

目的 产超广谱β-内酰胺酶( extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)福氏志贺菌的耐药性及其基因型.方法 K-B法检测福氏志贺菌对抗菌药物的敏感性,改良三维试验检测菌株是否产生ESBLs,ESBLs的基因型通过PCR扩增、DNA测序的方法进行.结果 148株福氏志贺菌检测出6株产ESBLs,其基因型为CTX-M-3和CTX-M-14;产ESBLs福氏志贺菌对氨苄西林、头孢噻肟、复方新诺明、四环素均耐药,对头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星敏感.结论 应加强对福氏志贺菌的耐药性监测,合理使用抗生素,防止产ESBLs福氏志贺菌的流行和传播.     

ICU病房产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的监测和耐药性分析

了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。采用自动化细菌鉴定仪(法国生物梅里埃公司Vitek-2和BD Phonenix 100)进行细菌鉴定和药敏试验,应用WHO-NET5.4软件进行耐药性分析。ICU病房共分离出100株肺炎克雷伯菌,其中产ESBLs株48株,占48%,药敏结果显示产ESBLs菌株的耐药率普遍高于不产ESBLs株,产ESBLs株对氨苄西林、头孢呋辛、头孢唑啉等全部耐药,对头孢曲松、头孢噻肟的耐药率也大于80%,对氨基糖苷类的庆大霉素、四环素,对喹诺酮类的环丙沙星、左氧氟沙星以及磺胺类中的复方新诺明耐药率较高(均大于55%),对哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢西丁等耐药率较低,对亚胺培南、美洛培南高度敏感。产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药现象严重,及时监测产ESBLs菌的发生率及其耐药趋势,为临床合理应用抗菌药物,延缓细菌耐药性的产生,控制医院感染具有重要意义。     

产超广谱β-内酰胺酶阳性菌检测及其耐药性分析

目的 了解新乡市中心医院近年来产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性菌的种类、分布及对11种常用抗菌药物的耐药情况,为控制其扩散、暴发流行和指导临床治疗提供科学依据。方法 对该院2003年1月～2004年1月从临床各类标本中分离的革兰阴性菌用双纸片协同法筛选产超广谱β-内酰胺酶阳性菌株,采用K-B纸片扩散法比较亚胺培南等11常用抗菌药物对产ESBLs耐药菌体外抗菌作用。结果 产ESBLs耐药株占全部革兰阴性菌的22.82%,克雷伯菌属、肠杆菌属、埃希菌属、假单胞菌属和沙雷菌属ESBLs的流行较严重,检出率分别为31.22%、29.02%、27.23%、25.19%和23.08%,在11种常用抗菌药物中,亚胺堵南的体外抗菌活性最好,敏感率为100%。结论 革兰阴性菌中,ESBLs阳性菌的发生率较高,同时ESBLs阳性菌有较高的耐药性。实验室应注重ES-BLs的检测和报告,指导临床合理应用抗生索,有效地控制ESBLs菌株在医院内的传播和流行。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性检测

目的 了解临床分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对喹诺酮类等抗菌药物的耐药性。方法 NCCLS表型确证试验（纸片增强法）检测出临床分离大肠埃希菌中产ESBLs菌株,琼脂稀释法测定产ESBLs菌株对喹诺酮类等抗菌药物的耐药性。结果 临床分离大肠埃希菌中产ESBLs菌株的检出率为40．2％（92／229）,产ESBLs菌株以尿标本多见,对6种喹诺酮类抗菌药物的耐药率均在89％以上,哌拉西林的耐药率为100％;对头孢噻肟、头孢他啶和哌拉西林-三唑巴坦的耐药率分别为77．2％、1．1％和21．7％,对亚胺培南极其敏感,耐药率为0％。结论 产ESBLs大肠埃希菌发生率较高,对喹诺酮类抗菌药物耐药显著,临床应加强检测和监测。     

革兰氏阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药分析

目的了解ESBLs的发生率和耐药特点,为临床合理用药提供依据.方法从住院及门诊病人的尿、粪、痰、血、分泌物等标本中分离的菌株共284株,使用法国梅里埃公司的细菌分析仪进行细菌鉴定和药敏检测及纸片扩散法确证试验.结果检出ESBLs菌株81株,检出率28.52%;产ESBLs的菌株主要是大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌;以阿莫西林和复方新诺明耐药率最高,达90%以上.结论对ESBLs细菌感染应根据药敏结果选择碳青霉烯类、喹诺酮类及β-内酰胺类/酶抑制剂等抗生素治疗.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检测及药敏分析

目的对3年间分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌进行鉴定和药敏试验分析。方法采用1999年NCCLS建议的纸片扩散确证法,从76株肺炎克雷伯菌中分离出14抹产超广谱β-内酰胺酶细菌,检出率为18．4％。结果产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对7种常用抗生素的药敏结果可以看出,亚胺培南对肺炎克雷伯菌作用最强,可作为治疗产ESBLs肺炎克雷伯菌感染的首选药物,敏感率高达86％,是控制感染的最有效的药物。其次为头孢哌酮／舒巴坦,敏感率达59．7％,也有一定的抗菌活性。结论产超广谱β-内酰胺酶检测对指导临床合理使用抗生素具有重要意义。     

张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因分析

目的：了解张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因的基因型别,为临床合理使用抗生素提供实验依据。方法：应用改良三维试验法筛选耐β-内酰胺类药物的菌株,再结合PCR技术和序列测定检测耐药菌ESBLs和AmpC酶的基因型别,最后进行统计学分析。结果：2010年12月~2011年12月本地区临床分离的48株木糖无色杆菌菌株中有32株对β-内酰胺类药物耐药,检出率高达66.7%,其中14株单产ESBLs,5株单产AmpC酶,9株同时产ESBLs和AmpC酶,4株为未知型菌株;筛选出的耐药菌中有24株PCR结果阳性,分属于不同耐药基因型并发现存在多重耐药基因。ESBLs以TEM型检出率最高,均为TEM-1亚型;AmpC酶检出率也较高,均为DHA-1型;多重耐药基因TEM＋CTX-M-1＋AmpC检出率最高。结论：张家口地区木糖氧化无色杆菌的耐药现象严重,临床上应严格掌握头抱菌素类药物的使用以取得更好的治疗效果。     

CLSI三代头孢菌素新旧折点对判定肺炎克雷伯茵药物敏感性及产ESBLs菌株分布的影响

目的了解CLSI2010（S20）及2009（S19）头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）新旧折点变化对本地区肺炎克雷伯菌药物敏感性及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株分布的影响。方法收集安徽医科大学第一附属医院临床分离的50株肺炎克雷伯菌;纸片扩散法测定菌株对CTX及CAZ的敏感性,CLSI表型确证试验确定产ESBLs菌株,改良三维试验检测CTX和／或CAZ耐药、非产ESBLs菌株的产酶情况。结果在S19折点下,CTX和CAZ耐药率分别为54．0％、30．0％;在S20折点下,耐药率分别为68．0％、42．0％。产ESBLs菌株总检出率为64．0％（32／50）。旧折点下,分别有81．3％、43．8％的产ESBLs菌株分布在CTX和CAZ耐药菌株中;新折点下,升高至100％、62．5％。2株对CTX和／CAZ耐药、非产ESBL菌株中,1株同时产ESBLs和AmpC酶,1株仅产AmpC酶。结论根据S20,肺炎克雷伯菌对CTX和CAZ的耐药率较S19均有所增高;并提高了耐药表型与产ESBLs菌株的一致性。产AmpC酶可影响表型确证试验对产ESBLs菌株的检出。     

Detection of Tetrodotoxin and Bacterial Production by Serratia Marcescens

Summary A simplified HPLC detection method for tetrodotoxin and its biosynthesis by Serratia marcescens was investigated. With 0.04% phosphoric acid as mobile phase, tetrodotoxin could be detected by HPLC equipped with a UV detector at a lower limit of 1 mg/l. After being cultivated in an improved ORI medium for a few days, Serratia marcescens was found to be capable of producing tetrodotoxin, and this was confirmed by both HPLC, and mouse bioassay.     

Isolation of Serratia marcescens mutants which could overproduce and excrete Escherichia coli alkaline phosphatase and beta-lactamase

Serratia marcescens mutants, which excrete Escherichia coli alkaline phosphatase (APase) encoded by the plasmid-bearing phoA gene, were isolated after mutagenesis by N-methyl--nitro-N-nitrosoguanidine. These mutants produced two to four times as much APase as did the parent strain under a phosphate-limiting condition, and more than 70% of the enzyme was released into the culture medium. In addition, overproduction and excretion of beta-lactamase was observed in these mutants.     

不同时期肠杆菌科细菌产ESBLS及耐药性的监测

目的对不同时期肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）及耐药性进行监测。方法采用生物梅里埃ATB药敏试验板测定肠杆菌科细菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗生素的敏感性,同时用表型确证法检测ESBLS。结果肠杆菌科细菌2006-2008年与2009-2011年两个时期相比,ESBLS的检出率增长近50%。对亚胺配南、头孢吡肟、头孢西丁耐药率较低,对哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐药率次之,对其他β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类及磺胺类抗生素的耐药率较高,且两个时期相比耐药率增加明显,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论临床产ESBLS菌株不断增多,多重耐药现象越来越严重,临床实验室应当把ESBLS的检测作为常规监测工作,有效指导临床选用抗菌药物。     

The active site protonation states of perdeuterated Toho-1 β-lactamase determined by neutron diffraction support a role for Glu166 as the general base in acylation

Room temperature neutron diffraction data of the fully perdeuterated Toho-1 R274N/R276N double mutant β-lactamase in the apo form were used to visualize deuterium atoms within the active site of the enzyme. This perdeuterated neutron structure of the Toho-1 R274N/R276N reveals the clearest picture yet of the ground-state active site protonation states and the complete hydrogen-bonding network in a β-lactamase enzyme. The ground-state active site protonation states detailed in this neutron diffraction study are consistent with previous high-resolution X-ray studies that support the role of Glu166 as the general base during the acylation reaction in the class A β-lactamase reaction pathway.