铜绿假单胞菌耐消毒剂-磺胺基因及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-sulⅠ)及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法自临床分离40株Pa,采用聚合酶链反应(PCR)检测qacE△1-sulⅠ基因及12种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2)。结果40株中qacE△1-sulⅠ基因阳性19株(47.5%),CARB基因阳性18株(45.0%),oprD2基因缺失35株(87.5%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,qacE△1-sulⅠ基因及CARB基因携带率高,oprD2基因缺失严重。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因(12种)研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因（12种）存在状况。方法自临床分离40株对铜绿假单胞菌。采用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2）。结果40株中CARB阳性18株（45．0％）、35株oprD2基因缺失（87．5％）．其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌CARB基因携带率高。     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药相关基因

目的明确杭州地区临床分离的耐药铜绿假单胞菌各种β-内酰胺酶编码基因、外膜通道蛋白oprD2基因存在状况。方法采用MicroScan微生物鉴定系统微量肉汤法测定临床分离的20株铜绿假单胞菌对12种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应的方法分析β-内酰胺酶基因及外膜通道蛋白oprD2基因的携带情况。结果20株菌呈现多重耐药,对氨基糖苷类抗生素的耐药率在50.0%-72.2%,对其他抗铜绿假单胞菌药物耐药率在16.7%-83.3%;13株(72.2%)检出β-内酰胺酶编码基因,TEM、DHA、IMP和OXA基因阳性率分别为55.6%、27.8%、22.2%和11.1%,SHV、PER、VEP、GES和VIM基因阴性,oprD2基因缺失。结论杭州地区临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,β-内酰胺酶编码基因携带率很高。     

呼吸监护室下呼吸道铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的了解呼吸监护室下呼吸道分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法自呼吸监护室下呼吸道感染患者的痰标本中分离37株铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、OXA-1群、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA和oprD2)。结果37株铜绿假单胞菌中CARB阳性15株(40.5%),oprD2基因缺失33株(89.2%),其余基因均阴性。结论呼吸监护室下呼吸道分离的铜绿假单胞菌CARB基因携带率高,oprD2基因缺失严重。     

1株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法 聚合酶链反应(RCR)法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacEΔ1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记(整合酶基因)、Tn21/Tn501转座子遗传标记(汞离子还原酶基因)检测。结果 TEM、SHV型β-内酰胺酶基因, DHA型质粒AmpC酶基因,aac(6′)-1型氮基糖苷类修饰酶基因,qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因,整合子遗传标记(intI1整合酶基因),Tn21/Tn501转座子遗传标记(merA汞离子还原酶基因)检测阳性。结论 多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和Ⅰ类整合子、Tn21/Tn501转座子。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测分析

目的探讨呼吸内科病房分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行体外药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对其中32株多重耐药铜绿假单胞菌进行相关基因TEM、SHV、CTX-M-9、DHA、VIM、PER、OXA、IMP和OprD2检测,并对耐药基因进行测序。结果 32株多重耐药铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是3.1%,对其余抗菌药物耐药率为53%～100%,β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为46.9%、21.9%、15.6%、12.5%和31.3%,未检出SHV基因、CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达68.8%。结论呼吸内科病房多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,应引起高度重视。     

碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药机制研究

目的研究碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的的耐药机制。方法收集本院2011年8月至2012年8月的碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,采用琼脂稀释法进行药敏试验;改良Hodge试验筛查菌株是否产碳青霉烯酶;利用聚合酶链反应扩增KPC、IMP、VIM、NDM、SHV、TEM、CTX-M-1组、CTX-M-9组耐药基因,并对扩增产物进行测序。结果 21株实验菌均为多重耐药菌,对17种抗菌药物中耐药率60%的有11种,其中耐药率90%的有5种,分别为头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、环丙沙星和氨曲南。耐药率最低的为多粘菌素B,均表现为敏感。9株改良Hodge试验阳性。6株携带碳青霉烯类耐药基因(3株NDM-1阳性、3株IMP阳性)。共有18株检出β-内酰胺类耐药基因。结论该院碳青霉烯类耐药大肠埃希菌携带的碳青霉烯酶基因以NDM-1和IMP基因较常见。     

对一株铜绿假单胞菌22种耐药基因的研究

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因（qacE△1-sul1）和整合酶基因检测,并对VIM基因进行了测序。结果PCR扩增结果显示该菌株aac（6′）-Ⅰb、blaCARB、gyrA、oprD2、ant（2″）-Ⅰ、qacE△1-sul1、blaIMP-I、blaTEM、blaVEB、aac（3）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、intⅠ1、blaVIM基因均为阳性,而aac（3）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、blaGES、blaGIM、blaOXA-10群、blaPER、blaSPM、blaSHV、blaDHA基因均为阴性,VIM基因扩增产物测序后经BLAST同源性分析表明为VIM-2型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的II代导管的抑菌效果需重新评价。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关耐药基因的检测

目的对耐亚胺培南（IMP）的铜绿假单胞菌（IRPa）相关耐药基因进行检测。方法 2003年至2009年从临床标本中分离到（P.aeruginosa）共220株,采用三维试验筛选产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌,应用普通PCR和多重PCR分别检测碳青霉烯酶基因和质粒携带的C类头孢菌素酶（AmpC酶）耐药基因,应用荧光定量RT-PCR的方法检测oprD2基因的表达情况。结果共检出43株产β-内酰胺酶的菌株,其中产AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属β-内酰胺酶（MBLs）和未知酶菌株的构成比分别58.14%（25/43）、18.60%（8/43）、4.65%（2/43）和16.28%（7/43）。74株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中,有2株菌携带IMP-9基因,1株菌携带DHA质粒型AmpC酶基因,其他碳青霉烯酶基因检测为阴性。40株菌株oprD2基因表达蛋白量降低,34株oprD2基因表达蛋白量正常。结论 oprD2基因的突变或蛋白表达量降低是IRPa对亚胺培南耐药的主要原因,AmpC酶可水解亚胺培南可能与铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药有一定的关系,而KPC-1酶和MBLs在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制中不是主要因素。     

多重耐药伤寒沙门菌耐药基因的研究

目的 检测多重耐药伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因定位。方法 随机选取实验室保存的5株耐药菌和1株敏感菌,用纸片扩散法检测对12种抗菌药物的敏感性。用利舍平抑制试验检测菌株是否存在药物外排系统。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、aac(6′)-Ⅰb和aac3-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因、catA和catB氯霉素乙酰基转移酶基因以及cmlA氯霉素外排泵蛋白基因等7种耐药基因。结果 5株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲噁唑及氯霉素等8种抗菌药物全部耐药,对美罗培南、头孢哌酮、头孢吡肟全部敏感;对头孢噻吩中度敏感。1株无质粒pRST98的菌株对上述药物全部敏感。利舍平抑制试验均为阴性。4株耐药菌TEM型β-内酰胺酶基因检测为阳性。全部耐药菌株aac3-Ⅱ、qacEΔ1-sul1、catA基因均为阳性,而aac(6′)-Ⅰb、catB和cmlA基因均为阴性。 结论 多重耐药伤寒沙门菌质粒pRST98上同时存在多种耐药基因, 是导致菌株同时对多种结构各异的抗生素耐药的原因。     

多重耐药鲍曼不动杆菌消毒剂耐药基因检测及同源性分析

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）临床分离株对医院常用消毒剂苯扎溴铵和醋酸氯已定的耐药表型与qacE△1-sul1基因型的相关性并分析菌株的同源性。方法用微量肉汤稀释法检测菌株的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）,用PCR方法检测qacE△1-sul1基因,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性。结果20株MDRAB中,18株（90％）qacE△l-sul1阳性,2株（10％）qacE△1-sul1阴性。qacE△1-sul1阳性株对苯扎溴铵的MIC50、MIC90、MBC50和MBC90分别是qacE△1-sul1阴性株的2倍、2倍、8倍和8倍。而qacE△1-sul1阳性株对醋酸氯已定的MIC50、MIC90、MBC50和MBC90分别是qacE△1-sul1阴性株的2倍、2倍、4倍和8倍。PF-GE显示：18株qacE△1-sul1阳性MDRAB可分为A～F6个PFGE克隆。2株qacE△1-sul1阴性MDRAB均为B克隆。结论MDRAB对消毒剂耐药性升高与qacE△1-sul1基因相关,临床存在多个克隆株的传播。     

Association of qacE and qacEDelta1 with multiple resistance to antibiotics and antiseptics in clinical isolates of Gram-negative bacteria

Clinical isolates of Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa, and Stenotrophomonas maltophilia were tested for resistance to antibiotics and to the antiseptics benzalkonium chloride and cetyltrimethylammonium bromide. Furthermore, they were examined for the presence of the resistance genes qacE and qacEDelta1. qacEDelta1 was detected by PCR in 10% of all (n=103) and in 81% of multiply antibiotic-resistant strains (n=15). qacE was found in only one of 37 P. aeruginosa strains. The minimum inhibitory concentrations of benzalkonium chloride, cetyltrimethylammonium bromide, and ethidium bromide were not significantly different for qacEDelta1/qacE-positive or -negative strains. Our data indicate that multiply antibiotic-resistant Gram-negative bacteria are not necessarily more resistant to quaternary ammonium compounds than antibiotic-sensitive strains even though qacE or qacEDelta1 is present.     

肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布检测与耐药特性的相关性研究

目的研究肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布与耐药特性的相关性。方法收集2008年1月至2013年12月临床分离的100株肺炎克雷伯菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,采用聚合酶链式反应进行ESBLs酶及AmpC酶基因的检测。结果60株检测出ESBLs酶,其中60株内检出ESBLs基因阳性56株,主要为SHV型基因;检出AmpC酶的检测6株,主要为DHA型基因。其中两种基因同时阳性者1株。除哌拉西林/他唑巴坦,单产AmpC酶、ESBLs及两种基因同时阳性菌（SSBLs）对其他17种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株。结论医院肺炎克雷伯菌的主要耐药机制为ESBLs酶及AmpC酶基因。ESBLs耐药基因检出率高,ESBLs阳性株耐药率明显高于ESBLs基因阴性株。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

blacCTX-M基因与氨基糖苷类抗生素耐药水平的相关性

目的分析β-内酰胺类耐药基因在肺炎克雷伯菌中的分布并评估这些基因对抗生素耐药水平的影响。方法选择76株肺炎克雷伯菌临床分离菌株,用K—B纸片法和MIC法检测抗生素的耐药性;用PCR法检测肺炎克雷伯菌株中β－内酰胺类抗生素的相关基因,RT—PCR的方法检测13-内酰胺类基因的表达。结果76株肺炎克雷伯菌中,ESBLs相关基因主要为SHV（45／76,59．21％）、TEM（27／76,35．53％）和CTX—M（38／76,50．00％）;携带SHV基因菌株对阿米卡星的耐药率（37．78％）明屁高于非携带SHV基因菌株（16．13％）（P〈0．05）。携带CTX—M基因（76．32％）和TEM基因（70．37％）的菌株对庆大霉素的耐药率明显高于不携带CTX—M基因（34．21％）和TEM基因（46．94％）的菌株（P〈0．05）。RT—PCR的结果显示,阿米卡星和庆大霉素耐药株的CTX—M基因mRNA的表达率均明显高于敏感株。结论β-内酰胺类基凶与氨基糖苷类抗生素的耐药相关,CTX—M基因与肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药水平相关。     

鲍曼不动杆菌老年人分离株耐药性与qacE△1-sul1基因检测

目的了解鲍曼不动杆菌老年人分离株耐药性与qacE△1-sul1基因存在情况,并讨论其临床意义。方法自老年人分离的20抹鲍曼不动杆菌按CLSI做药敏试验,采用聚合酶链反应法检测qacE△1-sul1基因。结果鲍曼不动杆菌qacE△1-sul1基因阳性15株,阳性率为75％。结论鲍曼不动杆菌老年人分离株qacE△1-sul1基因携带率较高,现行的消毒剂或消毒方法的有效性,应引起我国医院消毒界的广泛重视。     

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的存在状况。方法测定临床分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果60株大肠埃希菌呈现多重耐药,氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（3′′）-Ⅰ、ant（2′′）-Ⅰ的阳性率分别为36.7%、18.3%、0%、10%、1.6%。携带1种或1种以上基因的菌株有33株（55%）。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。