箭叶淫羊藿与近缘种天平山淫羊藿花粉形态对比研究

该研究采用扫描电子显微镜(SEM,scanning electron microscope)对箭叶淫羊藿13个居群(含箭叶淫羊藿光叶变种1个居群)、天平山淫羊藿7个居群进行花粉形态和外壁纹饰的观察及对比研究。结果表明:两个类群的花粉均为近球形,具三孔沟,大小相近。箭叶淫羊藿的花粉大小为(18.21～21.66)μm×(19.55～23.63)μm,天平山淫羊藿的花粉大小为(18.32～21.43)μm×(19.73～23.48)μm。外壁纹饰是花粉形态的重要性状。不同居群间花粉外壁纹饰存在较大差异,主要分为网纹纹饰、条网纹纹饰和颗粒状纹饰三大类,继而根据网脊类型和网眼密度分为六亚类。其中,箭叶淫羊藿的花粉形态包含了全部的三大类六亚类,天平山淫羊藿包含其中的三大类四亚类。天平山淫羊藿花粉特征为箭叶淫羊藿花粉形态变异的子集。整体而言,外壁纹饰类型随纬度和海拔增加呈现出由网状纹饰向条网状纹饰过渡的趋势。花粉主要形态性状特征均与海拔存在密切相关性。在花粉形态及外壁纹饰特征上,天平山淫羊藿在箭叶淫羊藿变异范围之内,与其他宏观形态性状变异一致。花粉形态性状无法将两类群有效区分,未能提供天平山淫羊藿...     

不同海拔高度下淫羊藿的种群年龄结构

从3个海拔高度(568、643和790m)研究了淫羊藿种群年龄结构,并对各龄级根茎数量、根茎长度、根茎生物量、分株数量、分株生物量进行测定。结果表明:海拔643m淫羊藿根茎龄级最高达10龄,海拔568和790m根茎最高龄级有9龄;3个海拔分株龄级与根茎龄级一致;海拔643m各龄级根茎数量从1龄到10龄呈下降趋势;3个海拔各龄级根茎长度、根茎生物量、分株数量、分株生物量都是2龄占优势;海拔643m各龄级根茎数量、长度、生物量和分株数量、生物量最多。海拔643m的生境最适合淫羊藿克隆生长,可以对其进行适当的采集。     

盐胁迫对两种淫羊藿属植物生长及各器官总黄酮含量的影响

采用不同浓度NaCl(0、100、200、300和500 mmol/L)的Hoagland's培养液处理两种淫羊藿属植物--淫羊藿、箭叶淫羊藿幼苗,处理30 d后分别测定其株高、叶表面积、干物质生物量以及根、茎、叶的总黄酮含量,以明确淫羊藿属两种药用植物的抗盐特性.结果显示:(1)盐胁迫对淫羊藿和箭叶淫羊藿的生长均有影响,随着NaCl处理浓度的增加,淫羊藿、箭叶淫羊藿的株高和叶表面积均逐渐显著减小;各器官干物质生物量逐渐降低,但淫羊藿的干物质下降量较小(不显著),且同一处理下淫羊藿的生物量明显小于箭叶淫羊藿.(2)随着NaCl胁迫浓度的增加,除淫羊藿茎的总黄酮含量一直呈下降趋势外,淫羊藿根、叶和箭叶淫羊藿根、茎、叶均呈现在低浓度范围内总黄酮含量增加,且箭叶淫羊藿的含量高于淫羊藿;而在高浓度盐胁迫下,其总黄酮含量均呈下降的趋势,且淫羊藿的含量高于箭叶淫羊藿.研究表明,淫羊藿的抗盐性明显高于箭叶淫羊藿,适于高盐土壤环境种植,但在低盐环境条件下,种植箭叶淫羊藿可显著提高总黄酮产量并提高经济效益.     

六种贵州淫羊藿属植物的核型分析

用压片法对原产贵州的六种淫羊藿属植物的根尖有丝分裂中期染色体核型进行了比较研究。结果表明:这6种淫羊藿在核型上基本相同,都有1对中间随体染色体,而且都为对称核型。箭叶淫羊藿、粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿、黔北淫羊藿、四川淫羊藿的核型公式均为6m(2SAT)+6sm,而黔岭淫羊藿的为8m(2SAT)+4sm。     

淫羊藿属十二个种的核型

用细胞压片法对12个淫羊藿属(Epimedium)植物的根尖有丝分裂进行了观察,并对其核型进行了比较研究。结果表明:这12种淫羊藿在核型上基本相似,都有1对中间随体染色体,而且都为对称核型。粗毛淫羊藿(E.acuminatum)、印江淫羊藿(E.yinjiangense)、单叶淫羊藿(E.simplicifloum)、巫山淫羊藿(E.wushanense)、光叶淫羊藿(E.myrianthum)、宝兴淫羊藿(E.davidi)、罗甸淫羊藿(E.luodianense)、木鱼坪淫羊藿(E.franchetii)、箭叶淫羊藿(E.sagittatum)、E.pubigerum、高山淫羊藿(E.alpinum)等11个种的核型公式均为2n=2x=6m(2SAT) 6sm,而黔岭淫羊藿(E.leptorrhizum)的核型公式为2n=2x=8m(2SAT) 4sm。结果显示12种淫羊藿的体细胞染色体数目均为2n=12,基数X=6;都属于对称核型、都有1对中间随体;染色体均为m、sm两种类型。     

三种药用淫羊藿的地理分布与资源调查

淫羊藿属(Epimedium L.)植物为传统的中草药,也是新优地被观赏植物,具有悠久的药用历史和巨大的开发潜力.对3种重要的药用淫羊藿(朝鲜淫羊藿E.koreanum、心叶淫羊藿E.brevicornum和箭叶淫羊藿E.sagittatum)的地理分布、形态特征和资源现状进行了调查.调查发现,朝鲜淫羊藿分布于中国东北部,主要沿长白山脉分布,长期的过度采收使野生资源遭到严重破坏,保护工作迫在眉睫;心叶淫羊藿分布于西北各省以及山西、河南等省,野生资源丰富,但目前开发利用较少;箭叶淫羊藿广泛分布于华东、华南各省区,但野生资源蕴藏量并不丰富,且不同分布区形态变异较大,物种鉴定尚存诸多疑问.为保证野生资源的可持续利用,未来应控制朝鲜淫羊藿的过度采收,加强心叶淫羊藿的合理开发利用,不同地区的箭叶淫羊藿形态差异较大,质量不稳定,建议对其进行系统的质量评估之后择优开发利用.     

偏斜淫羊藿化学成分研究

采用70%乙醇超声波辅助提取偏斜淫羊藿（Epimedium truncatum H.R.Liang）叶片中的类黄酮化学成分,利用LC-MS联用技术鉴定其化合物组成,利用HPLC方法测定其主要活性成分的含量并与药典规定药材箭叶淫羊藿（Epimedium sagittatum）主要活性成分的含量进行比较。结果从偏斜淫羊藿叶片中鉴定出6个化合物：朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、3,5,7-三羟基4’-甲氧基-8-异戊烯基黄酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖甙、山奈苷。该6个化合物均为首次在该植物中发现。偏斜淫羊藿富含朝藿定C,其含量显著高于箭叶淫羊藿主要活性成分的总含量。结果表明LC-MS可以简单、快速地对淫羊藿化学成分进行定性和定量分析,偏斜淫羊藿富含朝藿定C,具有潜在的药用价值。     

淫羊藿属十二个种的核型

用细胞压片法对12 个淫羊藿属( Epimedium) 植物的根尖有丝分裂进行了观察, 并对其核型进行了比较研究。结果表明: 这12 种淫羊藿在核型上基本相似, 都有1 对中间随体染色体, 而且都为对称核型。粗毛淫羊藿( E. acuminatum) 、印江淫羊藿( E . yinjiangense )、单叶淫羊藿( E. simplicifloum) 、巫山淫羊藿( E. wushanense) 、光叶淫羊藿( E. myrianthum) 、宝兴淫羊藿( E. davidi) 、罗甸淫羊藿( E. luodianense) 、木鱼坪淫羊藿( E. franchetii ) 、箭叶淫羊藿( E. sagittatum) 、E. pubigerum、高山淫羊藿( E. alpinum) 等11 个种的核型公式均为2n = 2x= 6m (2SAT ) + 6sm, 而黔岭淫羊藿( E. leptorrhizum) 的核型公式为2n = 2x = 8m ( 2SAT ) + 4sm。结果显示12 种淫羊藿的体细胞染色体数目均为2n = 12 , 基数X = 6; 都属于对称核型、都有1 对中间随体; 染色体均为m、sm 两种类型。     

不同生境中淫羊藿克隆构型和分株种群特征

为探求淫羊藿资源的保护策略,通过野外样地调查、室内测定和统计分析等方法,对林缘旷地、林缘和林下三种不同生境中淫羊藿(Epimedium brevicornum)克隆构型及其分株种群特征进行了研究,并初步分析环境因子对淫羊藿克隆构型和分株种群特征的影响.结果表明:分枝强度、间隔子长度、分枝高度、根状茎长度及分株种群密度在3种生境中差异显著,且与生境相对光强和土壤含水量有较强的回归关系.群落相对光强、土壤含水量在淫羊藿的克隆生长过程中起着重要作用.淫羊藿以地下根茎为克隆器官进行克隆生长,有着较强的克隆构型可塑性.结合克隆植物对资源的利用策略,讨论不同生境中淫羊藿克隆构型和分株种群特征可塑性的生态适应意义及淫羊藿保护机制.     

不同居群箭叶淫羊藿叶片解剖结构研究

对4个不同居群的箭叶淫羊藿叶片进行了解剖学的研究．结果表明：不同居群箭叶淫羊藿在气孔密度、表皮细胞长度、表皮细胞宽度与厚度、叶片厚度、叶肉层厚度、维管束直径的大小等方面有一定的差异．在多数情况下,气孔密度的变幅是每平方毫米119．9～139．2个;下表皮细胞的变化范围是67．93～89．54μm;这些变化与不同居群的具体生活环境有直接的关系．     

Characteristics of the Ramet Population of Epimedium brevicornum and Analysis of Spatial Point Pattern for E. brevicornum and E. sagittatum

Epimedium brevicornum was sampled from Jinchengshan , a mountain of Nanchong , Sichuan province at altitudes of 560m, 653 m and 774m respectively for investigation of its ramet population variation. The results showed that the ramet population density decreased remarkably and its ratio of root to shoot increased with increasing elevation e. g, at 774 m the ratio of root to shoot was significantly higher than that at 560 m . The spatial distribution pattern of E . brevicornum at three different altitudes and E. sagittatum at the altitude 771 m were also investigated respectively with Congregation index (m*􊄯m) 、Clump index (I)、Cassie index (CA)、Dispersal index (C) and spatial point pattern analysis . The results revealed that the populations of E. brevicornum was clumped at all of the spatial scales , whereas the population of E. sagittatum was randomly distributed at the small spatial scales, and was clumped at the most spatial scales which ranged from 0. 1 m to 5 m . Finally , we discussed the protection of E . brevicornum and E. sagittatum and advantage to use point pattern analysis in the investigation of the spatial pattern of herb plant .     

淫羊藿花粉萌发及花粉管生长研究

运用方差分析、多重比较和正交实验方法对淫羊藿花粉的萌发和花粉管生长进行了研究.结果表明:培养基内硼酸、硝酸钙、蔗糖在一定浓度范围内,对花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定浓度时则起抑制作用;镁和钾对花粉萌发及花粉管生长影响不显著.在正交实验中蔗糖和H3BO3对淫羊藿花粉萌发有显著影响,而培养基组分间没有明显的交互作用.淫羊藿最适花粉液体培养基为15%蔗糖 40 mg/L H3BO3 40 mg/LCa(NO3)2·4H2O;在pH值为5.0、25℃和600 lx光照时淫羊藿花粉萌发和花粉管生长最好.     

淫羊藿嫩叶cDNA文库的构建

以淫羊藿嫩叶为实验材料,用Trizol方法提取植物总RNA,纯化出mRNA,用SMART(the Switch Mechanism At the5′end of RNA Templates)技术反转录成cDNA,同时使用CHROMA SPIN-400凝胶柱层析纯化cDNA,最后将片断连入λTriplEx2 vector,经包装得到500μL原始文库,文库的滴度为1.2×106Pfu/mL。经体内切割后,随机挑选文库的20个阳性克隆进行PCR鉴定,算出文库的重组率为80%,扩增出的片断主要集中在0.5~2kb之间。结果说明文库质量较好,可以用于基因筛选。     

Prevalence of HEp-2 cell-adherent Escherichia coli and characterisation of enteroaggregative E. coli and chain-like adherent E. coli isolated from children with and without diarrhoea, in Londrina, Brazil

A total of 919 Escherichia coli isolates from 125 children with diarrhoea (cases) and 98 controls were assayed for adherence to HEp-2 cells. Localised adherence was found only in isolates from cases. Diffuse, aggregative (AA), chain-like adherence (CLA) and variants of the AA pattern were found in both cases and controls. The AA isolates were tested for gene sequences associated with enteroaggregative E. coli (EAEC). Only 25% of the isolates hybridised with the EAEC probe, and the aafA, astA and pet gene sequences were found in 7.9%, 44.7% and 7.9% of the isolates, respectively. The aggA gene was not found, although 7.9% were positive for aggC. The CLA isolates reacted with the EAEC probe (55.6%), and the aggC, astA and pet gene sequences were found in 66.7%, 33.3% and 11.1%, respectively. The aggR (55.6%), aspU (55.6%), shf (33.3%) and she (22.2%) genes were also found in CLA isolates.     

Dihaploids of Elymus from the interspecific crosses E. dolichatherus x E. tibeticus and E. brevipes x E. panormitanus

Summary Dihaploids (n=2x=14, SY) of two Elymus species, i.e., E. dolichatherus (Keng) Löve (2n=4x=28, SSYY) and E. brevipes (Keng) Löve (2n=4x=28, SSYY), were obtained from the interspecific hybrid combinations E. dolichatherus () x E. tibeticus (Meld.) G. Singh () and E. brevipes () x E. panormitanus (Parl.) Tzvelev (). The dihaploids were probably formed through selective elimination of male parental chromosomes in early embryo development. Meiotic chromosome behavior was studied in E. dolichatherus, E. brevipes, and their dihaploids. The two parental Elymus species had regular meioses with predominantly ring bivalent formation. A low frequency of homoeologous chromosome pairing was observed, with an average of 0.81 bivalents and 0.03 trivalents in the dihaploid of E. dolichatherus, and 0.26 bivalents in the dihaploid of E. brevipes. Up to two chromatid bridges accompanied by small fragments were present at anaphase I of the E. dolichatherus dihaploid. It is concluded from this study that: (i) both E. dolichatherus and E. brevipes are allotetraploid species; (ii) a low affinity exists between the S and Y genomes of the two Elymus species.     

淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取及其 对HeLa细胞的抑制作用

建立了药用植物心叶淫羊藿(Epimedium brevicornum)生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 探讨了提取机理, 分析了生物碱的化学组成及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用。采用正交试验法优化得到了淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺: 浸泡时间为40分钟, 超声波-微波协同作用18分钟, 微波功率250 J∙s^-1, 液固比为30 mL∙g^-1, 乙醇溶液浓度为70%。超声波-微波协同提取法的提取率可达16.146 mg∙g^-1, 显著高于超声波提取法、微波提取法和加热提取法。扫描电子显微镜观察结果表明, 超声波-微波协同作用可使淫羊藿叶片样品表面出现大量裂隙。激光粒度分析显示, 超声波-微波协同提取后, 中、低粒度范围的样品量明显增多, 而高粒度范围的样品量明显减少。薄层色谱和高效液相色谱分析结果表明, 淫羊藿生物碱含有木兰花碱, 不含小檗碱或含量很低。淫羊藿生物碱对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用, 并且呈现出剂量依赖性。研究结果为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据。