芝麻病毒病病原研究——Ⅰ.芝麻矮化坏死病害的鉴定

在湖北武昌芝麻上分离到的矮化坏死分离物(DNe-I)侵染芝麻引起严重矮化,叶片皱缩坏死。它能够摩擦接种侵染7科14种植物。在苋色藜、千日红上引起局部坏死斑,侵染油菜和百日菊引起系统花叶和黄化。DNe-I能够被桃蚜、花生蚜以非持久性方式进行传播。病毒体外稳定性状:存活期4天,钝化温度60～65℃,稀释限点4×10~(-4)。提纯病毒为线状粒体,长度为770nm。病毒外壳蛋自为单一亚基组成,分子量为30,700±600D。制备抗血清微量沉淀法测定其效价为1:256。在油菜病组织中,观察到风轮状及长直片层叠聚体类型的胞质内含体。在血清学性质上,该分离物与芜菁花叶病毒密切相关,与花生轻斑驳病毒和花生斑驳病毒弱相关,与大豆花叶病毒和西瓜花叶病毒不相关。基于上述性质,DNe-I被鉴定为芜菁花叶病毒。这是国内芜菁花叶病毒自然侵染芝麻的首次报道。     

芝麻花叶病的病毒病原鉴定

从患芝麻花叶病的病叶中提纯了一种线条状病毒颗粒,长700～800nm,宽13nm。经汁液摩擦接种可感染心叶烟、大豆,甜菜等9种植物,不感染西瓜,苋色藜、豇豆等。主要传毒介体是发生在芝麻田的桃蚜。病土、病种均不传病。该病毒与西瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒及马铃薯Y病毒的抗血清无反应。超薄切片中可见到风轮形和纸卷形的圆柱状内含体以及结晶状内含体。结晶状内含体分布在细胞质和叶绿体中,其它内含体均见于细胞质中。同时,细胞质中还可见到大量聚集的线状病毒颗粒。初步认为此病毒可能是马铃薯Y病毒群中的一个新成员,暂称为芝麻花叶病毒。国内外均未见报道。     

新疆伊犁地区侵染蚕豆和三叶草的豌豆花叶病毒的鉴定

从伊犁地区采集的蚕豆花叶病和三叶草花叶病植株获得的病毒分离物,经接种子鉴别寄主,可系统侵染蚕豆、三叶草、豌豆,局部侵染苋色藜和菜豆。可通过蚕豆蚜进行非持久性传播,不通过种子传播。电镜下,病毒粒体呈线条状,平均长度为756nm。在汁液中的热钝化温度是55℃。体外存活期3天。在感病蚕豆叶超簿切片中,可观察到风轮状内含体。血清反应结果证明,该病毒与马铃薯Y病毒、菜豆黄色花叶病毒和菜豆普通花叶病毒有一定相关性。根据上述特性认为,从伊黎地区蚕豆花叶和三叶草花叶植株得到的病毒分离物,为豌豆花叶病毒(PMV)。     

侵染扁豆的三叶草黄脉病毒的鉴定

1987年从泰安表现系统花叶的扁豆上分离到一个分离物B_2,汁液摩擦接种9科38种植物,它可侵染5科10种植物,在扁豆和昆诺藜上引起系统花叶,在苋色藜上引起局部枯斑。该分离物钝化温度为60—65℃,稀释限点为10~(-3)—10~(-4),体外存活期为3—5天。可由桃蚜传播;病毒粒体线条状,大小为700—760×12nm病叶细胞内有风轮状内含体,该分离物与三叶草黄脉病毒的抗血清有明显的-阳性反应。根据这些特性,该病毒属于马铃薯丫病毒组的三叶草黄脉病毒。     

侵染长豇豆的豇豆蚜传花叶病毒的鉴定

长豇豆花叶病是辽宁省长豇豆的一种严重病害,1983年我们在沈阳地区获得一个花叶病分离物(CpV-2),在长豇豆上表现为花叶、脉带,黄斑,叶面皱缩、叶缘缺刻及叶尖下卷等症状,人工摩擦接种可侵染豆科、藜科、茄科、胡麻科中的15种植物,在苋色藜、昆诺藜、芝麻和蒙若豆的接种叶上仅产生局部褪绿斑或坏死斑,该病毒的钝化温度为60～65℃(10分钟),稀释限点10~(-3)～10~(-4),体外存活期1～3天(19～20℃),可由桃蚜、豆蚜、大豆蚜以非持久性方式传毒,种子传毒率为4.5～10.5％,病毒仅存在于种胚内,提纯的病毒有侵染性,具有典型的核蛋白紫外吸收光谱,A260nm/280hm为1.910,病毒粒体为线条状,平均长747.4nm,宽13nm,该病毒仅与豇豆蚜传花叶病毒的抗血清呈阳性反应,因此认为,该分离物(CpV-2)系豇豆蚜传花叶病毒(Cowpea aphidborne mosaic virus,CAMV)。     

花生条纹病毒外壳蛋白基因在烟草中的表达与抗性

在印度、中国及东南亚地区,花生条纹病毒(PStV)是侵染花生及其它豆科作物的一种重要的马铃薯Y病毒组病毒。1984年在美国道次报道。目前人们正致力于应用分子学方法培育抗PStV的花生栽培品种。 以Nicotiana benthamiana作为PStV的繁殖提纯材料并按常规程序提取病毒RNA。用逆转录酶和DNA聚合酶合成病毒RNA的互补DNA(cDNA)。并采取几种策略以得到PStV的全基因组序列。     

新疆石河子地区印度麻花叶病植株病毒分离物的鉴定

1984年,从新疆石河子农学院实验站印度麻花叶病植株上,分离到一株病毒分离物Sc-1,经汁液摩擦接种试验表明,它可以侵染10种豆科植物和2种藜科植物。在印度麻、蚕豆、豌豆、箭舌豌豆、扁豆、山藜豆、田菁和红三叶草上引起系统花叶,在豇豆上产生局部枯斑和系统花叶,在苋色藜、昆诺藜上表现为系统黄斑。失毒温度为55～60℃,稀释限点10~(-3)～10~(-4),体外保毒期3～4天。可经汁液和蚜虫传播,不通过种子传毒。病毒粒体为线条状,大小为13～15×750nm。光学显微镜检查可见,病叶表皮细胞内形成不定形的内含体。电镜下可见风轮状、环状内含体。分离物Sc-1与菜豆黄色花叶病毒(BYMV)抗血清呈阳性反应。我们将Sc-1归为菜豆黄色花叶病毒(BYMV),且为豇豆株系。     

豇豆病毒病病原的分子鉴定

为澄清浙江省豇豆病毒病病原及其分类,采用马铃薯Y病毒属通用引物Sprimer扩增了浙江豇豆线状病毒基因组3′－末端序列。同时又根据已知CMV RNA3序列设计引物pCMV-44-63/1200-1181,扩增了混合的CMV－ZJ运动蛋白基因全序列。外壳蛋白氨基酸序列分析表明,产中仅存在一种线状病毒（CV－ZJ）,该病毒与一泰国豇豆蚜传花叶病毒（CABMV）具有最高的同源性（98.6%）,与花生条纹病毒（PStV）、石斛花叶病毒（DeMV0．）、赤豆花叶病毒（AZMV）、黑眼豆豆花叶病毒（BICMV）和菜豆普通花叶病毒（BCMV）分离物间的同源性为88.5%－94.4%,而与其它CABMV分离物的同源性均低于70％。进化树分析表明,PStV、AZMV、DeMV、BlCMV和BCMV为同种异名,应统称为BCMV,而CABMV为另一种病毒;CV－ZJ和泰国CABMV分离物应分类为BCMV豇豆株系。CMV－ZJ的运动蛋白序列分析表明,该分离物属于CMV亚组Ⅰ,与其它分离物氨基酸序列同源性为93.1%－97.8%。     

侵染菠菜的芜菁花叶病毒鉴定

菠菜病毒分离物Ta-1可侵染甘蓝等8科25种植物,但不侵染心叶烟。病汁液和芜菁花叶病毒抗血清呈阳性反应。光学显微镜下观察到受病毒侵染的细胞内有不定形内含体。从超薄切片见到细胞质中有风轮状内含体存在。电镜观察其粒子形态为均一的线状病毒,大小为700—760×10—12.5nm。部分提纯病毒紫外吸收呈典型核蛋白吸收曲线。SDS—PAGE法测得病毒外壳蛋白亚基分子量为35,500。     

浸染豇豆的一种病毒分离物的鉴定

在合肥地区从豇豆带毒实生苗中分离到一株病毒分离物Cp—2.侵染豇豆表现为卷叶、花叶,并使叶片革质化.易经汁液摩擦接种.可经桃蚜、棉蚜、蚕豆好及豆蚜以非持久性方式传播.其寄主范围广泛,能侵染测试的7科20种植物中的11种。稀释限点为10~(-3)～10~(-4),钝化温度为60～65℃,体外存活期7～8天。纯化病毒悬液A260/280为1.523.病毒粒体为杆状,宽约18～20nm,多种长度,优势长度分别为58,98,150nm。在琼脂双扩散试验中不与烟草脆裂病毒(TRV)、豌豆早枯病毒(PEBV)苜蓿花叶病毒(ALMV)、烟草花叶病毒(TMV)的抗血清发生反应。病毒外壳蛋白为单一电泳组分.其分子量为34 800,氨基酸组成中缺精所酸和脯氨酸。根据上述特征,认为Cp—2分离物为一种不隶属于目前确认病毒组群的单一病毒,且在国内外尚未见类似的报道,故暂定名为豇豆蚜传碎裂病毒(Cowpea aphid-borne breakage virus,CABV)。     

菜豆黄色花叶病毒(BYMV)—新疆苜蓿分离株的鉴定

从新疆苜蓿黄斑花叶病株上分离到病毒分离物M-4,该分离物能引起多种豆科值物系统花叶,并在藜科植物上产生局部褪绿斑,易经汁液摩擦接种和蚜虫传毒,不经菜豆种子传毒。病毒致死温度60—65℃,体外保毒期4—5天,稀释限点10~(-3)—10~(-4)。病毒粒体线状,长约660—740nm,宽15nm;在感病的寄主叶片细胞中,电镜观察到风轮状、带状和环状内含体。免疫电镜法测定,该分离物与菜豆黄色花叶病毒(BYMV)抗血清有血清反应。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸自动分析仪分析分别测得该病毒的衣壳蛋白亚基分子量为16,200道尔顿,氨基酸残基数128个。鉴定结果认为,分离物M-4是BYMV的一个株系。     

几种常见花生病毒血清学关系的研究

花生是世界上重要的经济作物,中国也是个花生消费大国,但是常有8种重要的花生病毒危害,包括花生斑驳病毒(PMV)、花生条纹病毒(PStV)、花生丛簇病毒(GRV)、花生丛矮病毒(PCV)、蕃茄斑萎病毒(TSWV)、花生芽枯病毒(BNN)、花生矮化病毒(PSV)和黄瓜花叶病毒(CMV).70年代以来在全国各地多次爆发花生病毒病,并引起大面积减产,经济损失巨大,因而花生病毒的检测和转基因花生抗毒株的选育变得尤为重要[1～3].本研究应用免疫双扩散和酶联免疫法(ELISA)对几种花生病毒的血清学关系进行了研究.     

大豆花叶病毒半夏分离物侵染性克隆构建及鉴定

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)作为半夏(Pinellia ternata (Thunb.) Breit.)主要病毒病害之一,已对其产量和品质造成严重影响。构建病毒侵染性克隆是反向遗传学研究病毒基因功能、病毒与宿主相互作用的有力工具,为明确SMV侵染半夏的分子机制,开展SMV全长cDNA侵染性克隆的构建特别重要。因此文中利用Gibson体外重组系统对大豆花叶病毒山西半夏分离物(SMV-SXBX)侵染性克隆进行组装,通过农杆菌浸润法接种健康半夏;进一步通过机械传代、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)证实SMV-SXBX侵染性克隆3′末端含有poly(A)尾56 nt时具有稳定侵染性。该方法便捷、高效,且避免了SMV侵染性克隆在大肠杆菌中的不稳定问题。SMV全长侵染性cDNA克隆的构建,为进一步研究SMV复制和发病的分子机制奠定了基础。     

植物病毒病的风轮状内含体

在目前公认的34个植物病毒组中,有25个病毒组的病毒能在寄主植物中产生内含体。能否产生内含体及内含体的形态结构是病毒组的主要特征之一。植物病毒内含体最早由steere williams于1953年在感染烟草花叶病毒(TMV)的烟草叶片中观察到,呈晶板状(Crystalline plates)。以后人们渐渐认识到内含体与病毒病害密切相关,但从发现至今近40年内,对内含体的产生及其功能仍不很清楚。     

小苍兰褪绿条纹花叶病毒的分离鉴定

从表现褪绿条纹花叶症状的小苍兰(Freesia hybrida)上分离得到一种棒状病毒,能感染茄科、藜科、苋科、玄参科和葫芦科的部分植物。病毒粒子长500—575nm,直径13nm。外壳蛋白由一种分子量17500dalton的蛋白亚基组成。纯化的病毒制剂具有典型的核蛋白紫外吸收,A260/A280为1.39。稀释终点10~(-7),致死温度约为95℃,在4℃下体外保毒期大于6个月。排蚜不能传毒。病毒与PVX有血清学关系。实验表明,该病毒属于马铃薯X病毒群,不同于已报道的感染小苍兰的其它病毒。本文还讨论了小苍兰褪绿条纹花叶病毒的控制和检测问题。     

抗黄瓜花叶病毒单克隆抗体细胞株的建立及其抗体鉴定

用黄瓜花叶病毒(CMV)免疫的BALB／C小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14,经5次细胞融合,6次有限稀释,获得1株6个稳定分泌cMV单克隆抗体的杂交瘤细胞培养物,所分泌的单克隆抗体均属IgM亚类。试验结果证明,6个单克隆抗体对cMV是特异的,对CMV-Q、CMV—P和cMv—B呈阳性反应,对cMV一6和番茄不孕病毒(TAV)呈阴性反应,对所用的其他8种植物病毒：南瓜花叶病毒(0qMV)、绒毛烟斑驳病毒(VT№V)、大毒条纹花叶病毒(BsMv)、马铃薯病毒x(PVx)、马铃薯病毒Y(PVY)、玉米矮箍花叶病毒(MDMV)、大豆花叶 病毒(sMV)和烟草花叶病毒(TMV)均无交叉反应。     

SMV对大豆花粉表面的污染及对花粉活力的影响

应用PALLAS将病毒粒体转化为乳胶颗粒通过扫描电镜直接观察,成功地检测到了大豆花粉表面污染的大豆花叶病毒(SMV)。田间春大豆宁镇1号的重花叶、轻花叶及无症状植株花粉所吸附的乳胶颗粒依次递减,而健株花粉上极少观测到乳胶颗粒,花粉数量测定及萌发试验表明,SMV的侵染对大豆花粉形成及活力都有明显的影响。     

杭州地区发生的玉米花叶病由甘蔗花叶病毒引起

从杭州地区呈现玉米矮花叶典型症状的玉米病组织中提纯得到大量线状病毒粒子,大多数长度为750?nm。病组织中含有大量风轮状内含体和板状集结体。病毒外壳蛋白为33.6 kD。病毒RNA13’端序列(1.8 kb)与甘蔗花叶病毒(SCMV)同源性最高,达71.5%～99.1%,与高梁花叶病毒(SrMV)同源性次之,为67.8%～68.5%,与玉米矮花叶病毒(MDMV)同源性最低,仅为38.4%～48.4%,从而初步认为此病害由SCMV引起。根据已发表的SCMV外壳蛋白氨基酸序列作亲缘性分析,表明SCMV可分为美国、南非、澳大利亚;德国和中国三大类。     

菜蚜对白菜孤丁病传毒效能差异的研究

白菜孤丁(芜菁花叶)是京、津秋菜上的重要病毒病害,以蚜虫为主要传毒介体。以白菜为寄主的桃蚜(Myzus persicae(Sulz))和菜缢管蚜(Hyadaphis erysimi pseudobrassicae(Davi))(=Rhopalosiphum pseudobrassicae Davis)都能传毒(裘维蕃1957,Kennedy 1962)。由于芜菁花叶病毒是口针系病毒(即“非持久性”病毒)(Kennedy 1962),蚜虫的得毒与传     

马铃薯X病毒分子生物学研究进展及其作为表达载体的应用

马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)又称马铃薯潜隐病毒(Potato latent virus)或马铃薯轻花叶病毒(Potato mild mosaic virus),是马铃薯X病毒属(Potexvirus)的模式成员,遍布于全世界马铃薯种植区.受侵染叶片呈花叶症状,田间常与其他病毒混合感染导致马铃薯的毁灭性减产.