血清岩藻糖测定方法学研究

本文对血清岩藻糖测定方法进行了系统研究。血清用量由200μL减至50μL,显色反应4h内稳定。吸收峰在396nm。岩藻糖浓度40μg/mL内线性良好,批间CV=2.1％。以Sephadex-G200层析,血清岩藻糖主要存在于分子量为500kD的组分中。以本法测得30例健康人血清岩藻糖浓度为588.1±172.0μmol/L。     

尿中游离L-岩藻糖测定的临床应用

采用日本宝酒造公司生产的L-岩藻糖监测试剂盒及质控标准品,用酶分析法在自动生化分析仪上对86例正常健康者和205例不同肿瘤患者尿中的UFC水平进行检测,结果显示,健康组尿中UFC水平：x＝177.7,s＝56.6,95％,可信限范围是63.8～290.2 μmol/g.cr;肝癌、肝硬化、急慢性肝炎、胰腺癌、食管癌、胃癌、肠癌、肺癌患者尿中UFC均值大于290 μmol/g.cr.与正常健康组对照,有非常显著性差异;乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌患者的UFC与健康组比较,有显著性差异.尿中游离L-岩藻糖测定方法简便、快速、能自动化、取样方便,并提示尿中UFC水平的变化可视为肝癌、急慢性肝炎癌变的特异性指标之一,也是消化系统癌症病人肿瘤标记物试验之一.     

用凝集素和非同位素标记底物测定核心α－1，6－岩藻糖转移酶及其应用

报道了一个不需同位素和ＨＰＬＣ的α－１,６－岩藻糖转移酶（α１,６ＦｕＴ,又称核心岩藻糖转移酶）的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺（Ａｓｎ）的二天线Ｎ－糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Ａｓｎ,并以此生物素衍生物标记的Ａｓｎ－七糖的Ｎ－糖链为受体底物,ＧＤＰ－Ｌ－岩藻糖为供体底物,用ＬＣＡ柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用ＨＲｐ－Ａｖｉｄｉｎ交联物与柱上带有生物素的产物结合,此ＨＲＰ－Ａｖｉｄｉｎ－生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定ＨＲＰ活力可代表α１,６ＦｕＴ活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比．人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯（ＰＭＡ）处理人肝癌细胞后,α１,６ＦｕＴ增高,而用视黄酸或ｄｂ－ｃＡＭＰ处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。     

岩藻糖糖链与肝癌细胞的迁移作用

通过凝集素印迹转移电泳和亲和层析技术,对岩藻糖糖基化蛋白在肝癌细胞中的作用进行了研究.在化学诱发的大鼠肝癌过程中, 分子质量在23 ku到40 ku范围内与荆豆凝集素(UEA)及扁豆凝集素(LCA)结合的岩藻糖糖基化蛋白显著减少, 诱癌至17～20周这些条带重新恢复,而分子质量为80 ku的条带却在诱癌过程中逐周增加.比较高、低转移性肝癌细胞的岩藻糖糖基化蛋白, 发现高转移性肝癌细胞具有多种增强的条带.利用橘果粉胞凝集素(AAL)和LCA亲和层析柱分离了这些岩藻糖基化糖蛋白, 并用这些糖蛋白直接作用于肝癌细胞,发现AAL-糖蛋白具有显著抑制肝癌细胞迁移的作用,迁移细胞数从对照的(100±4.9)%下降到(48.1±2.5)% (P＜0.01), LCA-糖蛋白也有类似作用.用胰酶和木瓜蛋白酶水解蛋白质部分后,形成的糖肽抑制肝癌细胞迁移的作用并不改变,甚至增强.此外直接用肝癌转移灶的组织测定了岩藻糖转移酶活性,发现α1,6岩藻糖基转移酶活性显著比正常肝组织高,而α1,3岩藻糖基转移酶活性没有显著的改变.用系列凝集素分析发现这些糖链主要能结合伴刀豆凝集素A, 也能结合E-型及L-型植物凝集素, 显示这种糖蛋白的糖链可能含有较多的高甘露糖型.这些结果提示糖链在诱癌过程中结构有了改变,使之在肝癌细胞的迁移和转移中起重要作用.     

小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶基因的比较

利用RT-PCR方法克隆小鼠3种GDP岩藻糖：β-半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶（α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT）基因编码区MFUT-Ⅰ、MHJT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,序列分析结果表明MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ间具有相当的同源性,且分别与人类H基因（78．4％）、Se基因（79．0％）和Secl基因（74．9％）具有序列同源性。将3种基因编码区分别插入表达载体pcDNA3．1的多克隆位点,并将其分别转染于COS-7细胞,结果显示MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,但在MFUT-Ⅲ基因转染后的COS-7细胞中检测不到这种活性。应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况。证实MRJT-Ⅱ可在多种组织中产生3．5kb大小的mRNA转录产物,然而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ分别只在附睾和睾丸中显著表达。Southern印迹杂交分析结果显示：基因MFUT-Ⅱ仅为一个拷贝,而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ可能存在2个拷贝。因此,MHJT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ分别为鼠的H基因、Se基因和Sec1基因。     

中国人ABO血型分泌型岩藻糖转移酶基因多态性研究

编码分泌型α（1,2）－岩藻糖转移酶（FUT2）的基因（Se)具有广泛的多态性和种族特异性,因而目前成为人类群体遗传学研究的重要指标,对191个满族和208个蒙古族两个人群融合突变基因的分布频率进行了调查,同时对90个蒙古族及90个山东荣成汉族样本的FUT2基因的多态性进行了分析。结果表明,满族和蒙古族两个人群近400名个体中没有发现FUT2融合突变基因（fusion gene),山东荣成汉族及内蒙古族人群中G849A点突变的分布频率极低,仅为0．0055。     

测定血清中白喉抗毒素含量的Vero细胞试验的改进

<正>Vero细胞试验已经被应用在测定人血清中白喉抗毒素的保护力或者通过测定免疫小鼠血清中抗毒素滴度评价白喉类毒素的效力。 白喉毒素能抑制培养物中Vero细胞的新陈代谢和存活,这种毒素效应可以被血清样品中的白喉抗毒素中和。在Vero细胞上,血清样品的滴度在有固定量的白喉毒素存在时被测出。Vero试验是根据在微     

血清中血管紧张素转换酶活性测定与临床应用

1　试剂和材料电泳缓冲液 :2 0ｍｍｏｌ/ＬｐＨ 9 0硼酸 硼酸盐溶液 (含5 0ｍｍｏｌ/ＬＳＤＳ) .底物反应液 :8 7ｍｍｏｌ/Ｌ马尿酸 组氨酸 亮氨酸溶液(ＨＨＬ ,Ｓｉｇｍａ公司 .以含 5 0 0ｍｍｏｌ/ＬＮａＣｌ、 10 0ｍｍｏｌ/ＬｐＨ 8 3硼酸 硼酸盐溶液溶解ＨＨＬ) .马尿酸标准液 :3 0ｍｍｏｌ/Ｌ (Ｈｉｐ ,Ｓｉｇｍａ公司 .以蒸馏水溶解Ｈｉｐ) .病人血清 .2　仪器Ｐ/ＡＣＥ5 0 10毛细管电泳仪 (Ｂｅｃｋｍａｎ公司 ) ,石英毛细管 75 μｍ× 37ｃｍ ,ｐＨＳ 3Ｃ酸度计 ,电热恒温水箱 .3　实验方法压力进样 3Ｓ ,电压 16ｋＶ ,电泳时间…     

细胞表面糖链末端唾液酸和岩藻糖与某些细胞生物学行为的关系

用神经氨酸酶和a-L-岩藻糖苷酶分别切除人肝癌细胞株7721细胞表面糖链中的末端唾液酸(SA)和岩藻糖(Fuc)残基来研究表面聚糖结构和某些细胞生物学行为之间的关系.选择细胞对纤连蛋白(Fn)、层黏蛋白(Ln)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附能力、细胞趋化性迁移以及趋化性侵袭作为细胞行为的指标.结果表明表面糖链末端SA对细胞黏附至Fn并不必需,对细胞黏附至Ln和细胞的趋化性侵袭却至为重要,而对细胞黏附至HUVEC以及趋化性迁移则为关键性残基.与SA相比,Fuc可能参与细胞Fn、Ln和HUVEC的黏附,但对趋化性迁移以及趋化性侵袭并不重要.细胞对HUVEC的黏附以及趋化性迁移和侵袭可被唾液酸化Lewis X(SLex)的单抗抑制,但不被未唾液酸化的Lewis X(Lex)单抗抑制,这一结果支持SA在上述三种细胞过程中较Fuc残基重要.     

血清钠、钾离子的均相直接测定方法研究进展

血清钠离子和钾离子的测定在临床诊断上意义重大,其常规检测方法火焰光度法和离子选择性电极法都需要昂贵的仪器且操作复杂,因此近年来开发了一些均相直接测定方法。本文综述了近年研制出的血清中钠、钾离子的各种均相直接测定方法,评述了各种直接测定方法的优、缺点。血清中钠、钾离子进行均相直接测定有着准确度高、重复性好等优点,可在临床生化自动化分析仪上应用。     

α1，2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞生物学行为的影响

为探讨α1,2-岩藻糖转移酶（α1,2-fucosyhransferase,α1,2-FT）基因转染对卵巢癌细胞RMG—I生物学特性的影响．利用PCR方法克隆人α1,2-FT基因的编码区HFUT—H,构建表达载体pcDNA3．1-HFUT—H．利用磷酸钙法将其转染入卵巢癌细胞系RMG—I,建立α1,2-FT基因稳定高表达细胞株RMG—I—H。采用RT—PCR及α1,2-FT活性测定检测转染前后细胞系α1,2-FT基因表达及α1,2-FT活性的变化,利用免疫细胞化学方法测定细胞表面Lewis y抗原表达变化,利用MTT法、流式细胞仪细胞增殖周期检测方法测定转染前后细胞系生物学特性的变化。分别以转染前细胞RMG—I和转染空载体细胞RMG—I-C为对照组。结果显示转染后细胞α1,2-FT mRNA表达增高,α1,2-FT活性增加20—30倍。转染后的细胞易复层生长,生长速度加快,细胞克隆边缘呈树突状延伸生长。转染后细胞RMG—I—H软琼脂克隆形成率（35％）明显高于对照组RMG—I（13％）及RMG—I—C（12％）,为对照组的2．6倍。RMG—I—H细胞G1期比例从对照组的74．14％下降到59．46％,G2-M期和S期比例分别从对照组的2．05％和23．95％上升到7.32％和33．27％（P〈0．05）。这些结果充分说明。α1,2-FT及Lewisv抗原具有促进RMG—I细胞增殖,提高RMG—I细胞生存能力,促进肿瘤发生、发展的作用。     

细胞生长和表面精蛋白的N－糖链中核心岩藻糖的关系

细胞生长和表面精蛋白的Ｎ－糖链中核心岩藻糖的关系董素才,杨小平,陈惠黎（上海医科大学生物化学教研室,２０００３２）关键词精蛋白Ｎ—糖链,核心岩藻糖,小扁豆凝集素,细胞生长细胞表面精蛋白Ｎ一糖链的结构与细胞生长、分化、恶变有密切关系,除糖链的类型和天线...     

人和牛血清白蛋白的极谱测定

人或牛血清白蛋白溶液调至ＰＨ１０并在４℃左右放置３０小时,诱导出重复性良好的极谱峰,然后把试样溶液调至适当ＰＨ妆记录极谱电流,在浓度低于１．０×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ时,峰电流对浓度作图是直线,试样浓度可从图上直接读出,对影响白蛋白测定的诸因素作了详细研究和讨论,结果对富含硫的蛋白质极谱研究有参考价值。     

测定糖尿病患者血清LDL-C 水平的方法学比较

目的:比较不同方法检测糖尿病患者血清LDL-C水平,为临床诊疗提供准确可行的检验方法。方法:采用沉淀法、匀相法、电泳法及超速离心法对233例糖尿病患者和102例健康人群的血清LDL-C水平进行测定,比较各方法之间的相关性,同时分析导致结果差异的因素。结果:四种方法检测健康人群LDL-C水平,结果间无统计学差异(P>0.05);糖尿病组,当TG≤2.26mmol/L时,四种方法检测LDL-C结果间相关性良好。高胆红素、血红蛋白、高TG及乳糜等干扰因素存在时,与其他方法相比,电泳法和超速离心法检测血清LDL-C结果受影响较小(P>0.05)。结论:超速离心法虽耗时、价格贵,但仍为检测LDL-C的经典方法,电泳法受高胆红素、血红蛋白、高三酰甘油等干扰因素的影响相对较小,适用于糖尿病合并高血脂患者血清LDL-C水平检测。     

测定糖尿病患者血清LDL-C水平的方法学比较

目的：比较不同方法检测糖尿病患者血清LDL-C水平,为临床诊疗提供准确可行的检验方法。方法：采用沉淀法、匀相法、电泳法及超速离心法对233例糖尿病患者和102例健康人群的血清LDL-C水平进行测定,比较各方法之间的相关性,同时分析导致结果差异的因素。结果：四种方法检测健康人群LDL-C水平,结果间无统计学差异（P〉0.05）;糖尿病组,当TG≤2.26mmol/L时,四种方法检测LDL-C结果间相关性良好。高胆红素、血红蛋白、高TG及乳糜等干扰因素存在时,与其他方法相比,电泳法和超速离心法检测血清LDL-C结果受影响较小（P〉0.05）。结论：超速离心法虽耗时、价格贵,但仍为检测LDL-C的经典方法,电泳法受高胆红素、血红蛋白、高三酰甘油等干扰因素的影响相对较小,适用于糖尿病合并高血脂患者血清LDL-C水平检测。