共查询到20条相似文献,搜索用时 955 毫秒
1.
利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物具有G-CSF活性。 相似文献
2.
中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较 总被引:3,自引:0,他引:3
为研究中国人IL-12的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nPCR)从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了P35、P40两亚基cDNA基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中P35 cDNA编码219个氨基酸的多肽,P40 cDNA编码328个氨基酸的多肽,与国外序列(NKSF、CLMF)比较结果发现:所克隆序列P35同NKSF相比,第44aa密友子由GTC(Val)→GTG(Val),但未改 相似文献
3.
用逆转录病毒载体表达人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子 总被引:1,自引:1,他引:1
应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒(CMV)启动子的基因片段和人粒细胞-茂噬细胞集落刺激因子(hGM-GSF)的cDNA,克隆进逆转录病毒载体N2A,得到重组质粒N2QA/CMV/hGM-CSF。经脂质体包装并转染包装细胞,通过G418药物筛选,得到抗生克隆。经PCR和Southern blot检测证实,GM-CSF基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达10^4CFU/ml,克 相似文献
4.
LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaI片段的作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuI位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的cDNA含有可译框架的全 相似文献
5.
人绒毛膜促性腺激素α、β亚基cDNA的筛选与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
构建3周龄人胚cDNA 文库,用[α-32P]dCTP标记的一链cDNA 为探针从中筛选高度表达的克隆子并测序,得到人绒毛膜促性腺激素(HCG)的α和β亚基cDNA 克隆,序列同源性分析表明:α亚基编码区的cDNA 序列与已报道的完全同源,β亚基编码区第30位碱基G→A,该碱基的改变不引起氨基酸的改变.另外,在α和β亚基非编码区发现有多处碱基的改变. 相似文献
6.
利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaⅠ片段作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuⅠ位点是个限制性片段长度多态性位点。所克隆的cDNA含有可译框架的全部密码,因此可作为基因表达材料。 相似文献
7.
应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒(CMV)启动子的基因片段和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的cDNA,克隆进逆转录病毒载体N2A,得到重组质粒N2A/CMV/hGM-CSF.经脂质体包装并转染包装细胞,通过G418药物筛选,得到抗性克隆。经PCR和Southemblot检测证实,GM-CSF基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达10 ̄4CFU/ml,克隆细胞培养上清用TF-1细胞可检测到GM-CSF活性。 相似文献
8.
利用MPCR技术从乳腺组织分离到抑癌基因BRCA1的cDNA片段,将此914bp的片段克隆进质粒pUC118,并经全序列测定证实。序列分析表明,BRCAIcDNA编码的肽链NN2-末端有一锌指结构,抑癌基因BRCAI的产物可能是DNA结合蛋白,cDNA序列存在两个变异位点:一个是第409位的C→A(Asp→Glu):另一个是第879位的A→T(MIa同义突变)。以该片段为探针,检测6例乳腺癌组织中BRCAImIMA表达,一例表达明显下降,一例没检测到表达的mIMA产物,说明一些乳腺癌组织的BRCA1基因转录水平降低 相似文献
9.
研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF 150%以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐(mPEG-Mal)修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95%,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,Neulasta?),药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍。 相似文献
10.
番茄抗病基因Cf9的3′UTR区含有内含子序列 总被引:2,自引:0,他引:2
从番茄(LycopersiconesculentumMil.)抗病品种“中杂9号”基因组DNA中扩增并克隆了番茄抗叶霉病基因Cf9。序列分析结果表明,该基因全长2751bp,含有一个编码863个氨基酸的开放阅读框架。在该基因的3′UTR区发现了一段未曾报道的内含子序列,长115bp,它所处的位置与番茄另一个抗叶霉病基因Cf2内含子的位置相似,其5′和3′边界序列为一重复序列,TCCAGG(T)ATTC,并与Cf2基因内含子边界序列高度同源。与已报道的Cf9的cDNA序列相比,它的第371位的核苷酸T突变成了C,从而使其编码蛋白的LRR区第121位的亮氨酸突变为脯氨酸。 相似文献
11.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF()cDNA3'端非翻译区(3'UTR)中存在的DraI酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3'-UTR不同长度构建了四种hG-CSF cDNA瞬时重组表达质粒,转染COS-7细胞手,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3'-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3'-UTR对hG-CSF cDNA表达的 相似文献
12.
以人睾丸组织总RNA为材料,用RT-PCR方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽(ACAP)编码区(530bp)和全长cDNA(1930bp)片段.并分别将这些cDNA片段克隆入pUC18载体的SmaⅠ限制性内切酶位点.对重组质粒分别采用直接DNA双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶S1作用下连续缺失DNA后,相继克隆,构成一系列连续缺失的缺失体的方法,测定了全部核苷酸顺序.结果表明:ACAP编码区的cDNA顺序与已报道的有12处碱基的改变,其中11处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化,只有第385位的T→A后,才引起其编码的氨基酸由Ser→Thr,但由于Ser和Thr的理化性质极其相似,这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化.这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异. 相似文献
13.
人Nmi mRNA编码区存在变异形式 总被引:1,自引:0,他引:1
Nmi基因编码一种可与Myc相互作用的蛋白质.在人红白血病细胞系TF-1细胞去细胞因子GM-CSF后8h,发现NmiRNA表达水平升高.利用PCR方法从中扩增NmicDNA编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比公布核酸序列小约100~200bp的扩增片段.序列分析表明该片段为编码区第337~509位的碱基缺失,由GTTCCATTGCG11个碱基取代,形成一个开放读码框架,编码254个氨基酸,比野生型Nmi编码的307个氨基酸少53个氨基酸. 相似文献
14.
重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)带β-Galactosidase基因标记的非融合蛋白基因转移载体pBlueBac将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因成功地插入病毒AcNPV的基因组中.hGM-CSF基因在感染重组病毒的草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)培养细胞Sf9中得到表达,感染后的Sf9细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达2.7×1055CFU/ml。以hGM-CSF单抗所作的WesternBlotting表明,表达的hGM-CSF对是3种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为15kd,18kd和20kd。 相似文献
15.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 相似文献
16.
在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为BS-17。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λgt11cDNA表达库中克隆了编码BS-17的cDNA片段。序列分析表明BS-17cDNA片段长791bp,开放阅读框架558bp,可编码186个氨基酸。经数据库检索,该cDNA片段与人Calpastatin(Ca ̄(2+)依赖的半胱氨酸蛋白酶calpain抑制剂)基因3’端顺序具有99.7%的同源,与Calpastatin蛋白质羧基末端同源性为99.5%。用cRNA进行组织原位杂交结果表明,BS-17基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。 相似文献
17.
18.
本文采用血浆凝块、甲基纤维素半固体和液体培养体系结合流式细胞仪巨核细胞DNA双荧光分析,观察了4 ̄5个月胎肝和成人骨髓CFU-MK在体外的增殖和分化特点。结果表明,无论以基因重组白细胞介素3或再障狗血清(Meg-CSA)作为刺激因子,胎肝CFU-MK集落均较大(大于50个细胞/集落),而成人骨髓CFU-MK集落均较小(小于50个细胞/集落)。在以rIL3(2ng/ml)为刺激因子时,胎肝巨核细胞祖 相似文献
19.
人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达 总被引:1,自引:0,他引:1
构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白。PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pPIC9K连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α。抽提质粒,用SalI酶切重组质粒,电转化法导入毕赤酵母SMD1168中,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌。Western-blotting分析表明融合蛋白具有粒细胞集落刺激因子免疫原性。NFS-60细胞测活实验分析表明体外活性达到约4.0×10^7IU/mg。 相似文献
20.
将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人血清白蛋白第三功能区(HAS-D3)的基因串联后,在E.coli中获高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%.利用TF-1体外细胞活性测定表明,GM-HSA的活性单位为1.04×10~6U/mg,虽然其比活性低于GM-CSF,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性. 相似文献