分泌抗芜菁花叶病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用经芜菁花叶病毒(TuMV)免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2／0－Agl4)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,建立了5类分泌抗TuMV的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4类分别对TuMV－CI株系、TuMV—C3株系、TuMV—C4株系和TuMV－c5株系具有特异性反应,第5类对TuMV 5个株系均有反应。以双抗体夹心ELISA和间接ELISA检测,上述McAb同CaMV、CMV、TMV、PVX和PVY等均不产生交叉反应,小鼠腹水McAb的滴度在1：256000--2048000之间,多为1：1024000,比常规多抗血清高400倍左右。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化性质进行了鉴定。用SDS—PAGE、Western—blotting对TuMV外壳蛋白亚基、McAb识别位点进行了分析,并就McAb区分TuMV株系进行了讨。     

芜菁花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用

先以芜菁花叶病毒（TuMV）免疫BAL B/C小鼠,然后取其脾细胞使之与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗TuMV单克隆抗体（Mab）的杂交瘤细胞,并以之制备腹水单抗。4株单克隆抗体腹水ELISA效价在10-5～10-6之间,仅对TuMV起特异性反应。Western blot分析表明,4株单抗都能与TuMV 34kD的外壳蛋白亚基起特异反应。利用TuMV的多抗兔血清和单抗腹水建立了三抗体夹心ELISA检测TuMV的方法,检测病叶的灵敏度为1∶5120倍,检测提纯TuMV病毒绝对量为21.9 ng。利用三抗体夹心ELISA测定出7种作物上有TuMV侵染。      

分泌抗马铃薯X病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用马铃薯x病毒(Pvx)免疫的BALB／c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2／0)融合,经3次克隆化后,筛选出3类分泌抗PVx株系特异性的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,该细胞株经传代20代以上,并经液氮冻存一年以后仍表现稳定。3个杂交瘤细胞株染色体数目集中在92—102条之间,其免疫球蛋白亚类均为IgG3,用ELlsA间接法测定细胞培养上清滴度为1：320—1：640,小鼠腹水抗体滴度为1：102400—1：204800,后者比兔抗血清滴度(1：320)高300倍以上。McAb对抗原具有中和作用,中和滴度为1：102。经反复冻融、硫铵沉淀和冻干后,抗体活性无明显变化。     

烟草花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用TMV免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代並分泌抗烟草花叶病毒(TMV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中T73McAb滴度最高,ELISA滴度高达1/655,360,能被TMV兔免疫血清所阻断,能中和TMV的感染性。但与其它植物病毒无交叉反应,与TMV不同毒株均有反应。     

侵染菠菜的芜菁花叶病毒鉴定

菠菜病毒分离物Ta-1可侵染甘蓝等8科25种植物,但不侵染心叶烟。病汁液和芜菁花叶病毒抗血清呈阳性反应。光学显微镜下观察到受病毒侵染的细胞内有不定形内含体。从超薄切片见到细胞质中有风轮状内含体存在。电镜观察其粒子形态为均一的线状病毒,大小为700—760×10—12.5nm。部分提纯病毒紫外吸收呈典型核蛋白吸收曲线。SDS—PAGE法测得病毒外壳蛋白亚基分子量为35,500。     

分泌抗加压素单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立(之一)

基于深入研究加压素在体内的作用的需要,特制备其单克隆抗体。以赖氨酸加压素为抗原免疫小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出两株特异性高的杂交瘤细胞,产生的抗体对赖氨酸加压素有强的结合反应,对精氨酸压素有一定的交叉反应,对催产素基本无反应。鉴定证明,此抗体属IgG1亚类,为纯的、均一性的单克隆抗体。     

研制确定特异性兔单克隆抗体的稳定的兔-鼠杂交瘤

<正> 杂交瘤技术现已达到可制备抗大多数抗原的单克隆抗体的程度。可是,某些免疫原在小鼠体内免疫应答较差,并且通常很难得到具有确定表位特异性的高亲和力鼠单克隆抗体。这些问题通过曾报道的为数不多的分泌抗A群链霉菌(GAS)特异单克隆抗体的鼠杂交瘤而有所反映。     

芜菁花叶病毒分子生物学研究进展

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的一个重要成员, 在世界上分布广泛,主要危害十字花科植物。本文对芜菁花叶病毒的分子生物学相关研究,如基因组结构和功能、株系变异与进化、寄主植物抗性以及抗病毒转基因工程等的研究进展作一阐述。     

芜菁花叶病毒(TuMV)特性的研究进展

芜菁花叶病毒(TuMV)是世界范围内广泛分布的重要病毒。从生物学和理化特性、基因组结构、侵染和繁殖、变异及利用转基因技术提高病毒抗性等方面对TuMV的国内外研究现状进行了阐述。     

抗黄瓜花叶病毒单克隆抗体细胞株的建立及其抗体鉴定

用黄瓜花叶病毒(CMV)免疫的BALB／C小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14,经5次细胞融合,6次有限稀释,获得1株6个稳定分泌cMV单克隆抗体的杂交瘤细胞培养物,所分泌的单克隆抗体均属IgM亚类。试验结果证明,6个单克隆抗体对cMV是特异的,对CMV-Q、CMV—P和cMv—B呈阳性反应,对cMV一6和番茄不孕病毒(TAV)呈阴性反应,对所用的其他8种植物病毒：南瓜花叶病毒(0qMV)、绒毛烟斑驳病毒(VT№V)、大毒条纹花叶病毒(BsMv)、马铃薯病毒x(PVx)、马铃薯病毒Y(PVY)、玉米矮箍花叶病毒(MDMV)、大豆花叶 病毒(sMV)和烟草花叶病毒(TMV)均无交叉反应。     

芜菁花叶病毒（广州油菜株）生化性质的研究

我们对芜菁花叶病毒广州油菜株(TuMV—G.Z)进行了生化性质的研究。结果表明,纯化的病毒外壳蛋白经10％SDS-聚丙烯胺酰胶电泳出,现一个组份,其分子量为1.4×10~4d;氨基酸组份分析表明,TuMV—G.Z外壳蛋白亚基由约107个氨基酸残基组成,其中包括1个色氨酸和5个酩氨酸;DNS—C1末端法测其N端,结果显示为苏氨酸,且其氨基是游离的。     

芜菁花叶病毒（TUMV）核酸cDNA的合成与克隆

从接种芜菁花叶病毒后发病芥菜(Brassica Juneaen)中提取病毒,然后提取其核酸(TuMV-RNA)。以纯化的TuMV-RNA为模板,以Oligo(dT)_(12-18)及小牛胸腺DNA水解物为引物,合成双链cDNA,双链cDNA长度约500—4300bp。将双链cDNA补齐后,钝端连接到pUC19质粒的Smal位点,转化E.coli DH,获得500多个白色克隆。菌落原位杂交及酶切分析表明,重组质粒中的插入片段大多数为芜菁花叶病毒RNA的互补DNA,长度为500—4000bp。     

抗卵清蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备

为制备分泌抗卵清蛋白的杂交瘤细胞,以高纯度的卵清蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得杂交瘤细胞,用ELISA间接法检测上清液中的抗卵清蛋白抗体效价,经3次单克隆化筛选,获得5株分泌抗卵清蛋白抗体的杂交瘤细胞株。     

抗芜菁花叶病毒转基因甘蓝型油菜的研究

以子叶柄为材料,建立了甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）双低品种的再生体系。通过子叶柄与农杆菌（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＬＢＡ４４０４）共培养,将表达载体ｐＢＴｕ中芜菁花叶病毒外壳蛋白（ＴｕＭＶ－ＣＰ）基因以整合方式导入甘蓝型油菜,然后用卡那霉素进行筛选,获得了油菜再生植株。经ＰＣＲ特异性扩增、点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析,证明再生植株基因组ＤＮＡ中整合了ＴｕＭＶ－ＣＰ基因。攻毒实验表明,有ＴｕＭＶ－ＣＰ基因插入的工程油菜对ＴｕＭＶ均有不同程度的抗性。