应用双水相萃取技术提取香菇多糖的研究

利用聚乙二醇(PEG)-硫酸铵双水相体系提取香菇多糖,研究了不同PEG-硫酸铵组成的双水相体系对香菇多糖分配比和收率的影响。结果表明:PEG分子量在6000时对香菇多糖的提取效果较好;PEG6000浓度在24%时、硫酸铵浓度在30%时组成的双水相体系提取香菇多糖的效果最好,此时香菇多糖的分配系数(K)可达到1.90,收率(Y)可达到57.42%。     

牛血清白蛋白在聚乙二醇/葡聚糖双水相体系中分配特性的研究

采用考马斯亮蓝G250染色法测得室温下BSA在PEG/dextran双水相体系中的分配系数。以BSA在PEG/dextran体系的下相富集为目标,研究了PEG的分子量、浓度、dextran浓度以及所加入中性盐的种类与浓度、体系pH诸因素对其分配特性的影响。实验结果表明,在PEG4000/dextran体系中,采用PEG质量分数9%-dextran质量分数9%的浓度组成,同时在pH=7.0,NaC l浓度为0.2 mol.L-1或pH6.0,NaC l浓度为0.34 mol.L-1的工艺条件下萃取BSA均可达最小分配系数,其值为0.014。     

硫酸铵与盐酸胍对鸡肝二氢叶酸还原酶的激活和失活作用

在５℃、２０℃、３０℃,鸡肝二氢叶酸还原酶的活力随盐酸胍浓度增加,先经历一个激活区,以后则为失活区。温度升高,使最大激活幅度变小,激活区变窄,所需盐酸胍浓度减小,硫酸铵在浓度低于０．２ｍｏｌ／Ｌ时,对天然酶有较小的激活作用,更高浓度的硫酸铵使酶活力下降;胍激活酶的活力随硫酸铵浓度的增加,由天然酶的２１０％单调下降;对失活酶,增加硫酸铵的浓度,则使酶活力逐渐恢复;三种情形的终活力均为天然酶的４０％。     

用聚乙二醇(PEG)／无机盐双水相体系从枯草杆菌发酵液中提取a-淀粉酶的研究

本文报道分别用聚乙二醇(PEG)／磷酸盐和PEG／(NH·)2SO4双水相体系从枯草轩菌发酵液中提取a-淀粉酶。研究了PEG的平均分子量、PEG浓度,成相的盐的浓度和Nacl的浓度对a-淀粉酶和蛋白质的分配系数以及相比的影响,确定了最佳的操作条件。实验表明在180%PEG 1500／10％磷酸盐／0．05M NaCl的体系中,a-淀粉酶的分配系数为6.62,蛋白质分配系数为1．14,相比为2．5,a-淀粉酶总收率为94．3％,在16％PEG 1500／12％(NH₄)₂SO₄／O．05M NaCl体系中,a-淀粉酶分配系数为82,蛋白质分配系数为5．2,相比为O．92,酶收率为99％,结果表明用PEG／无机盐双水相体系直接从含有菌体的发酵液中提取a-淀粉酶是可行的。     

乙醇-磷酸氢二钾双水相体系萃取L-精氨酸

采用乙醇-磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系萃取L-精氨酸。实验考察了乙醇浓度、K2HPO4浓度、pH、萃取温度对萃取分离L-精氨酸的影响。结果表明,L-精氨酸在该双水相体系的分配系数K随体系乙醇浓度、K2HPO4浓度的增大、萃取温度的升高而增大,随着体系pH的增大而减小;L-精氨酸在该双水相体系的萃取率随体系乙醇浓度和pH的增大而减小,随着体系K2HPO4浓度增大、萃取温度的升高而增大。     

pH调控双水相萃取色素蛋白复合体及其分配行为研究

为发展色素蛋白复合体分离纯化新方法,探究pH调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离纯化色素蛋白复合体。优化萃取条件,光谱法研究其分配行为,检测产物纯度和生物活性。结果表明,最佳萃取条件为调节pH9.0,相组成CPEG100019.0%/C柠檬酸钾20.0%,蛋白质加量3.42 mg/g,K和萃取率达到最大,分别为8.8及86.0%。响应面分析法揭示,PEG1000和柠檬酸钾质量浓度及pH对分配系数和萃取率影响显著。调节pH7.0,反萃取分配系数和反萃取率最小为0.15及86.6%。蛋白质总回收率为74.2%。pH对色素蛋白复合体分配行为具有调控作用,pH大于8.5体系,色素蛋白趋于分配上相,反之分配于下相,PEG1000/柠檬酸钾以及蛋白质加入量不影响色素蛋白复合体分配于上相。电泳表征发现,萃取(pH9.0)上相存在2个蛋白质组分,相对分子量(MW)为7.0 kD及14.0 kD。反萃取(pH7.0)使相对分子量7.0 kD蛋白质组分分配于下相,该组分为LH2β亚基,经萃取和反萃取产物生物活性稳定。pH可调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离色素蛋白复合体,产物纯度高,生物活性稳定。     

K~ 营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬生长及叶片液泡膜V-H~ -ATPase和V-H~ -PPase活性的影响(英文)

对溶液培养的盐地碱蓬 (SuaedasalsaL .)幼苗进行不同浓度NaCl胁迫并改变培养液中K 浓度 ,以了解K 营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬幼苗生长及叶片液泡膜V_H _ATPase、V_H _PPase活性的影响。提高培养液K 浓度可明显增加盐胁迫下碱蓬植株的鲜重、干重 ,促进盐地碱蓬叶片及根部组织K 积累。盐地碱蓬叶片液泡膜V_H _ATPase至少由A、B、C、D、E及c亚基组成 ,其表达量在缺K 处理 (12 μmol/LK )下随盐胁迫浓度的增加而减小 ,而在正常K (6mmol/L)培养下则随盐胁迫浓度的增加而增加 ;盐地碱蓬叶片液泡膜V_H _PPase分子量为 72kD ,在缺K 和正常K 供应情况下 ,V_H _PPase均有较高表达。V_H _ATPase及V_H _PPase活性变化与其亚基表达量变化基本成正相关。结果表明 :K 对盐生植物碱蓬的耐盐性有重要作用 ,盐胁迫下 ,K 可能参与了V_H _ATPase和V_H _PPase活性调控     

双水相体系/溶剂反萃取法制备高纯天然烟碱

在探讨了硫酸铵对三种不同分子量聚乙二醇双水相体系的分相能力基础上,研究了聚乙二醇/盐双水相体系中烟碱的分配行为,同时考查了含盐量、pH值等因素的影响,并采用此体系处理废次烟草中烟碱提取液,利用溶剂反萃取法回收天然烟碱,结果显示:体系中含盐量、pH值对烟碱的回收率影响较大,确定含盐量25%、pH=9为体系的最佳分离萃取条件,回收率为96.7,纯度为99.87%.     

K+营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬生长及叶片液泡膜V-H+-ATPase和V-H+-PPase活性的影响

对溶液培养的盐地碱蓬(Suaeda salsa L.)幼苗进行不同浓度NaCl胁迫并改变培养液中K+浓度,以了解K+营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬幼苗生长及叶片液泡膜V-H+-ATPase、V-H+-PPase活性的影响.提高培养液K+浓度可明显增加盐胁迫下碱蓬植株的鲜重、干重,促进盐地碱蓬叶片及根部组织K+积累.盐地碱蓬叶片液泡膜V-H+-ATPase至少由A、B、C、D、E及c亚基组成,其表达量在缺K+处理(12 μmol/L K+)下随盐胁迫浓度的增加而减小,而在正常K+(6 mmol/L)培养下则随盐胁迫浓度的增加而增加;盐地碱蓬叶片液泡膜V-H+-PPase分子量为72 kD,在缺K+和正常K+供应情况下,V-H+-PPase均有较高表达.V-H+-ATPase及V-H+-PPase活性变化与其亚基表达量变化基本成正相关.结果表明: K+对盐生植物碱蓬的耐盐性有重要作用,盐胁迫下,K+可能参与了V-H+-ATPase和V-H+-PPase活性调控.     

Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的双水相萃取和酶学性质

初步研究双水相体系对Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶的萃取分离效果,选用PEC4000／NaH2 PO4作为戍相系统进行系统研究,考察影响脂肪酶萃取的各种因素（如PEG相对分子质量及质量分数、NaH2PO4质量浓度、pH）,并采用正交实验进一步优化实验条件,确定双水相萃取体系为PEG质量分数为30％、NaH2PO4质量分数为20％、体系pH为6,在此条件下Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶经硫酸铵沉淀和双水相萃取两步纯化的纯化倍数达到最大,较Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶粗酶纯化了22倍。Geotrichum sp．SYBC WU-3脂肪酶纯酶为低温碱性脂肪酶,最适反应温度为15oC,最适pH为9．5,相对分子质量为3．58×10^4。     

苹果多酚氧化酶的纯化与表征

运用丙酮浸漬干燥、磷酸盐缓冲液提取、低温离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex(A-50)、Sephadex(G-75) 和DEAE-celluse(DE-52)层析等方法从苹果中分离获得一种新的含铜酶蛋白,该酶被命名为多酚氧化酶Ⅱ(polyphenol oxidase Ⅱ, PPOⅡ),纯化倍数是215,纯化收率是23%.PAGE、SDS-PAGE和MALDI-TOF 等技术用于测定所获的酶的纯度和分子量.在PAGE和SDS-PAGE 均显示一条带,表明PPOⅡ只由一个亚基组成,且已达到单一组分(MALDI-TOF的结果更证实了这一点).SDS-PAGE 和 MALDI-TOF 的结果都表明PPO的分子量为 38204 Da.pH值对酶活性和稳定性研究的结果显示,从pH值4.0～7.0随着pH值的增加,酶活性也不断增加;从pH值 7.0～11.0, 酶活性不断降低.PPOⅡ的最适pH值为6.6最适温度为30℃.     

昆虫来源的几丁质酶的分离纯化及酶学性质

几丁质酶在真菌和昆虫的生理和发育过程中起着关键作用,该酶本身及其酶抑制剂是获取生物农药的重要途径。本研究从蚕蛹体内提取几丁质粗酶,经硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-150分离得到几丁质酶。用SDS-PAGE测得该酶的分子量为88kDa。水解胶体几丁质的Km值为22.3μmol/L。酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为6.0,金属离子和有机试剂对几丁质酶活性都有影响,其中高浓度的Mn2+对酶有较强的激活作用,而Cu2+、SDS则有较强的抑制作用。研究结果为基于几丁质酶的生物农药筛选研究奠定了基础。     

膜蛋白嵌入脂质体的研究 Ⅵ.金属离子对猪心线粒体细胞色素氧化酶在脂质体重组的影响

用胆酸盐增溶和硫酸铵分级沉淀方法从猪心线粒体分离得到光谱鉴定较纯的细胞色素氧化酶。酶由8个亚基组成,在低浓度去垢剂环境中以二聚体或四聚体存在,分子量分别为270,000和540,000。通过胆酸盐透析法将细胞色素氧化酶组装到大豆磷脂制备的脂质体上,研究了重组过程中蛋白/磷脂比例,介质pH范围等条件,从而使所得脂酶体活力较高,呼吸控制率达2～3。在透析过程中Mg~(2 )的存在能明显改善重组效果,使呼吸控制率与对照相比增加100%左右。也比较了其他金属离子的影响。在相同浓度下,二价金属离子促进作用的顺序为:Ca~(2 )>Mg~(2 )>Mn~(2 )。对金属离子的作用机理进行了探讨。     

膜蛋白嵌入脂质体的研究——Ⅵ.金属离子对猪心线粒体细胞色素氧化酶在脂质体重组的影响

用胆酸盐增溶和硫酸铵分级沉淀方法从猪心线粒体分离得到光谱鉴定较纯的细胞色素氧化酶。酶由8个亚基组成,在低浓度去垢剂环境中以二聚体或四聚体存在,分子量分别为270,000和540,000。通过胆酸盐透析法将细胞色素氧化酶组装到大豆磷脂制备的脂质体上,研究了重组过程中蛋白/磷脂比例,介质pH范围等条件,从而使所得脂酶体活力较高,呼吸控制率达2～3。在透析过程中Mg~(2 )的存在能明显改善重组效果,使呼吸控制率与对照相比增加100%左右。也比较了其他金属离子的影响。在相同浓度下,二价金属离子促进作用的顺序为:Ca~(2 )>Mg~(2 )>Mn~(2 )。对金属离子的作用机理进行了探讨。     

铜对三叶草-土壤酶系统的影响

通过盆栽实验研究了重金属Cu污染对植物(三叶草)-土壤酶(脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和多酚氧化酶)系统的影响.结果表明,随着Cu浓度增加,脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和多酚氧化酶活性均逐渐减小,与Cu浓度有高度相关性,蔗糖酶>多酚氧化酶>脲酶>过氧化氢酶.在处理浓度不变情况下,酶活性随时间而变化,且呈现低Cu浓度(<00 mg·kg^-1)时4种酶活性均有所上升,而Cu浓度增高(00～3 000 mg·kg^-1)时各酶活性逐渐下降的趋势.统计分析表明,在每一梯度浓度上,4种酶在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组内均存在显著差异性(P<0.01),与植物受重金属Cu污染时的生长情况一致.随着Cu浓度增加,土壤pH值逐渐下降,而电导率上升;同一Cu浓度下的pH值和电导率均随时间呈缓慢上升趋势,统计分析显示,二者在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组内均存在显著差异性(P<0.01).土壤pH值和电导率与4种土壤酶活性有高度相关性,多酚氧化酶>蔗糖酶>过氧化氢酶>脲酶.这4种酶同时可作为检测土壤环境质量的指标.     

产气肠杆菌几丁质酶的分离纯化及性质研究

从自然罹病死亡的草原毛虫(Gynephorap ruoergnesis)体内分离到一株产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶。发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析分离出几丁质酶。用SDSPAGE测得该酶的分子量为425kD。水解几丁质的Km值为2.88mg/mL-1。酶反应的最适温度为55℃,最适pH值为60,金属离子对几丁质酶活性影响较大,其中Zn2+、Ba2+、Ca2+和Mn2+对酶有较强的激活作用,而Hg2+、Co2+和Mg2+则有较强的抑制作用。     

盐分和水分胁迫对芦荟幼苗渗透调节和渗调物质积累的影响

用不同浓度NaCl和等渗聚乙二醇(PEG 6000)处理芦荟(Aloe vera L.)幼苗,10 d后测定叶片相对生长速率和厚度、叶片中主要有机溶质、无机离子含量及渗透调节能力.结果表明,-0.44、-0.88 MPa NaCl和PEG处理使芦荟叶片的相对生长速率和叶片厚度明显下降,且盐胁迫对幼苗生长的抑制和叶片含水量降低的效应明显高于等渗的水分胁迫,其叶片渗透调节能力随处理渗透势的降低而增加, -0.88 MPa PEG胁迫的芦荟幼苗的渗透调节能力高于等渗盐分胁迫.在主要渗透调节物质可溶性糖、有机酸、K 、Ca2 和Cl-中,-0.88 MPa PEG处理下含量比相同渗透势的NaCl处理下显著增加的是有机溶质,因此推断有机溶质含量高是PEG胁迫下渗透调节能力较强的主要因素.     

苹果多酚氧化酶的纯化与表征（英文）

运用丙酮浸漬干燥、磷酸盐缓冲液提取、低温离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex（A-50）、Sephadex（G-75）和DEAE-celluse（DE-52）层析等方法从苹果中分离获得一种新的含铜酶蛋白,该酶被命名为多酚氧化酶Ⅱ（polyphenoloxidaseⅡ,PPOⅡ）,纯化倍数是215,纯化收率是23%。PAGE、SDS-PAGE和MALDI-TOF等技术用于测定所获的酶的纯度和分子量。在PAGE和SDS-PAGE均显示一条带,表明PPOⅡ只由一个亚基组成,且已达到单一组分（MALDI-TOF的结果更证实了这一点）。SDS-PAGE和MALDI-TOF的结果都表明PPO的分子量为38204Da。pH值对酶活性和稳定性研究的结果显示,从pH值4.0～7.0随着pH值的增加,酶活性也不断增加;从pH值7.0～11.0,酶活性不断降低。PPOⅡ的最适pH值为6.6最适温度为30℃。     

黑木耳漆酶纯化及部分漆酶特性的研究

黑木耳漆酶研究可为漆酶的进一步分离纯化、基因克隆表达和大规模生产应用奠定基础。对黑木耳"黑29"菌株漆酶粗酶液进行硫酸铵分级沉淀后,通过Native SDS-PAGE电泳检测,存在3种漆酶LacA、LacB、LacC,分子量分别为60,34,19 kD。经硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel柱层析技术分离得一纯化成分LacC,纯化倍数7.60,酶活性回收4.28%。对LacC的pH、温度、金属离子和Km值等部分酶学性质进行研究发现,该酶氧化ABTS的Km值为1.18×10-6mol/L,催化氧化底物ABTS的最适pH为3.8,在pH 3.0~4.6表现出较强的稳定性;最适反应温度为55℃,低于50℃时有较好的热稳定性;金属离子Ag+对漆酶有激活作用,而Fe3+、Mn2+、Co2+则有抑制作用。     

盐胁迫对高羊茅(Festuca arundinacea)幼苗生长和离子分布的影响

盐胁迫环境抑制植物的生长，影响植物组织的离子分布，不同的盐分组成对植物的抑制伤害存在差异，为了研究上海市临港新城滨海盐渍土的生态恢复和重建，模拟该地区的盐分组成，进行了高羊茅（Festuca arundinacea）幼苗的盐胁迫试验。高羊茅种子在非盐胁迫条件下萌发，出苗5d后，进行了不同浓度NaCl：0、50、100、150、200、300、400mmol／L处理，15d后测定生长情况、组织含水量和Na^＋、K^＋、Ca^2＋、Mg^2＋等离子含量。研究结果表明：盐分对高羊茅幼苗的抑制作用随NaCl浓度增加而加剧，低盐胁迫环境下，幼苗地上部分和根系的鲜重、干重和含水量都与对照没有显著性差异，但是高盐环境严重影响了高羊茅幼苗的生长，而且对地上部分的抑制作用大于根部；盐胁迫影响植物组织的离子分布，Na^＋浓度持续增加，Ca^2＋和K^＋浓度下降，Mg^2＋含量的影响不大；各组织中K／Na、Ca／Na和Mg／Na随盐胁迫增加而下降。