肺组织切片的取材和固定新方法

应用在体气管灌注固定法固定肺组织,探索肺组织切片制作的新方法。在体气管灌注固定法操作简便实用,灌注量容易掌握,固定效果好,切片完整连续,组织结构无人为假象。     

用猪肺制作铸型标本

现介绍一种用猪肺制成铸型标本的方法。1　材料硅玻璃胶一筒、过氯乙烯、丙酮、红色和蓝色颜料、5ml注射器、玻璃导管及缝线、50 0 ml量杯 ,新鲜猪肺。2　方法1)调配好灌注液。称适量的过氯乙烯溶解在丙酮里 ,分成两杯 ,分别加入红色和蓝色颜料、搅伴。量杯里溶液浓度与市面上的合成胶水浓度相当。2 )从气管里直接灌注市场上出售的硅玻璃胶 50 ml左右 ,视情况而定 ,直到肺表面触摸起来有硬结感。3)把肺动脉和肺静脉分别插上玻璃导管、结扎。用红色和蓝色灌注液分别注入肺静脉和肺动脉 ,直看到肺表面和周围的毛细血管充满红色和蓝色液体。这…     

NDRG2在大鼠肺缺血再灌注损伤中的表达

目的:通过建立大鼠肺缺血再灌注损伤(Lung ischemia-reperfusion injury,LIRI)模型,观察肺缺血再灌注损伤后,肺组织中N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene,NDRG2)表达水平的变化.方法:将70只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(C)、缺血组(I)、缺血再灌注组(I/R)(后两组各含3个亚组),每组10只.麻醉固定大鼠,颈部切口行气管插管.右侧开胸,肺缺血组依次分别选择游离夹闭右肺门(即右主支气管,右肺动、静脉)缺血30 min、60 min、120 min后,麻醉处死大鼠获取肺组织.肺缺血再灌注组同样选择游离夹闭右肺门,于夹闭右肺门60 min后松开,分别取再灌注30 min、60 min、120m in后麻醉处死大鼠获取肺组织样本.采用免疫组化对肺组织NDRG2进行蛋白定位检测、RT-PCR对肺组织NDRG2 mRNA含量进行检测、Western-blot对肺组织NDRG2蛋白含量进行检测.结果:肺缺血组与对照组比较,肺组织NDRG2的表达无明显变化(P＞0.05);肺缺血再灌注组与对照组比较,NDRG2蛋白含量和mRNA表达量逐渐下降,在60 min时达最低,之后又有所回升,但仍低于对照组(P＜0.05).结论:肺缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDR G2的表达含量,NDRG2可能是肺缺血再灌注损伤的靶向调控位点.     

胆酸诱导急性肺损伤小鼠模型的建立和评价

目的构建胆酸诱导急性肺损伤(ALI)的小鼠模型,筛选给药方式,探讨胆酸致肺损伤的可行性。方法按照给药方法×药物(3×3)析因设计分组小鼠,给药方法包括气管切开、鼻滴1 d和鼻滴6 d,药物为胆酸及其溶解对照DMSO和空白对照PBS,故共计9组小鼠。给药期间监测体重变化,给药结束后对胸部行X线平片检查、组织学观察肺组织的病理学变化、取动脉血分析血氧分压(PO_2),ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的含量。结果气管切开再灌注胆酸组的X线平片呈现肺组织弥散性浸润,肺大体样本有明显的出血表现,组织学病理显示出大量的炎细胞浸润和肺泡壁增厚,血氧分压降低,TNF-α和IL-1β显著高于其它各组。鼻滴1 d胆酸组和鼻滴6 d胆酸组的各指标较变化不及气管切开再灌注胆酸组。结论气管切开并灌注胆酸可以成功构建小鼠急性肺损伤模型。     

三种兔单肺通气模型的比较

目的采用三种方法建立兔单肺通气模型并比较其效果。方法日本大耳白兔30只,随机分为3组(即A、B、C组)各10个,分别采用自制双腔气管导管法、左主支气管结扎法和插管过深法。呼吸机通气参数为:FiO21.0,RR 40/min,VT 10 mL/kg。单肺通气2 h后恢复双肺通气。记录各组单肺通气实施的一次成功率、总成功率、从气管切开开始到单肺通气实施所需要的时间、动物失血量。实验结束后开胸测量兔气管、左主支气管、右主支气管的长度和内径。结果各组进入实验的动物数分别为10、6、8只。与B、C组比较,A组一次成功率和总成功率高,所需时间明显较少(P<0.01),且出血量明显少于B组(P<0.01)。结论采用自制双腔气管导管能迅速有效的建立单肺通气模型,是用于研究与单肺通气相关病理生理机制的理想模型。     

制备大鼠心肌顿抑实验模型的改进和建模死亡原因分析

目的改进心肌缺血再灌注模型制备,提高制模成功率。方法采用成年SD大鼠制作心肌缺血再灌注模型,对传统造模方法进行了改进,经口直视下气管插管,同步心电图监测,改良的微创切口,自制的乳胶管垫片阻断LAD,结合心电图、肉眼观及HE检查作为判断结扎成功指标。结果建模48只,成功率81.5%。结论本方法造模成功率高,心脏暴露好、阻断可靠,创伤小,操作简单、方便。     

N-myc 下游调节基因-2 过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响

目的:研究N-myc下游调节基因-2(NDRG2)过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:以肺缺血再灌注损伤为模型,将已转染的过表达NDRG2重组腺病毒经气管滴注的方法使大鼠肺泡上皮细胞NDRG2过表达。用Western-blot法检测大鼠肺组织内目的蛋白过表达情况。用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,肺组织湿干重比值(W/D)检测肺组织的水肿,双荧光素酶报告系统检测核转录因子kappa B(NF-κB)的活性,HE染色检测肺组织病理变化。结果:在肺缺血再灌注损伤中,过表达NDRG2可抑制炎症因子l L-1β、TNF-α以及IL-6的表达,明显减轻肺水肿,抑制NF-κB的活性和病理组织的炎性改变。结论:NDRG2过表达可减轻缺血再灌注所致急性肺损伤,这可能与其抑制炎症反应有关。     

海水淹溺致大鼠急性肺损伤模型的建立

目的：建立海水淹溺肺损伤（SWD-ALl）的大鼠模型,为SWD—ALl的基础及救治研究提供平台。方法：128只健康SD大鼠随机分为4组,即对照（CG）组和海水灌注（SGI、SG2、SG4）组（分别气管内注入1、2、4mL／kg海水）。观察大鼠气管内海水灌注后症状以及各组呼吸频率、心率、动脉血气、肺湿／干重r~（W／D）,留取肺组织病理标本观察病变。结果：与对照组比较,海水灌注组大鼠心率、呼吸频率明显加快,气道有白色泡沫渗出物,口唇发绀,肺部满布湿罗音。动脉血气分析氧分压（PaO2）和二氧化碳分压（Pa—CO2）显著降低（P〈0．01）;SGl、SG2组30min测氧合指数（Pa02／FiO2）低于300mmHg,之后逐渐升高至接近正常,SG4组各时间点测PaOJFi02得均在300mmHg以下;各组间比较,SG4组肺组织湿／干重比（W／D）明显高于其他组（P〈0．01）。肺组织病理观察,光镜下肺间质水肿,肺泡隔断裂,大量的红细胞及炎性细胞浸润。结论：经气管内灌注海水4mL／kg,可成功建立海水淹溺急性肺损伤的动物模型。     

兔在体心脏缺血再灌注模型的制作方法的改进

目的建立兔在体心脏缺血再灌注模型的新方法。方法40只新西兰大白兔随机分为缺血再灌注组（25只）,假手术组（15只）。缺血再灌注组采用＂二线二结＂法结扎心脏左前降支30 min,然后恢复心肌灌注3h;假手术组仅将线从左前降支周围心肌中穿过,但并不结扎。实验中连续描记心电图。两组分别于结扎（穿线）前和再灌注（穿线）后1 h从股静脉取血1 mL测定血清肌钙蛋白。实验结束时取心肌行2,3,5-氯化三苯基四氮唑和苏木精-伊红染色。结果缺血再灌注组心电图存在ST-T的动态演变,再灌注1 h后血清肌钙蛋白浓度明显高于术前（0.47±0.35 vs.0.33±0.31,P=0.002）。两种染色方法均证明存在心肌坏死。结论＂二线二结＂法能够既方便又成功地建立兔在体心脏缺血再灌注模型。     

滚压泵在乳猪肺灌注模型建立中的应用

目的通过滚压泵建立一种操作简单的猪隔离肺持续灌注和缺血再灌注模型,并比较两种灌注方法对肺的损伤。方法12只乳猪随机分为缺血再灌注组（对照组）和持续灌注组（实验组）。分别在左、右心耳以及肺动脉插管。滚压泵将贮血器中的灌注液泵入肺动脉,灌注双肺后再通过左心耳将灌注液引流回贮血器,建立猪肺灌注模型。对照组双肺停止灌注90min后灌注30min,实验组双肺持续灌注120min,灌注流量均为80mL/kg.min。测定实验前后的肺静态顺应性以及灌注液中TNF-α、IL-6变化。测定肺组织湿干比并进行电镜观察。结果实验组肺静态顺应性（实验组6.14±1.17mL/cmH2O,对照组7.89±0.94mL/cmH2O,p=0.017）、湿干比（对照组5.18±0.97,实验组3.84±1.08,P=0.048）、TNF-α指标均优于对照组（实验组0.80±0.26ng/mL,对照组0.52±0.15ng/mL,P=0.044）（P〈0.05）,电镜下的肺损伤程度轻于对照组。结论通过滚压泵建立猪肺持续灌注和缺血再灌注模型具有操作简便的特点。持续性非搏动灌注较之缺血再灌注对肺的损伤更轻。     

鹤的气管及胸骨

解剖了丹顶鹤及灰鹤各一只,发现它们的胸骨龙骨突中间是空的,腹缘宽达1.5厘米左右。胸骨的胸腔面不像鸡等家禽那样光滑,而可见到气管在其中盘曲隆起所形成的纵脊。气管自颈部下行,先入龙骨突起空腔的腹侧,然后作复杂的盘曲,并为骨松质所固定,最后向上转入胸腔分叉而入肺(见图1)。气管直     

粉防己碱对大鼠心肌缺血再灌注时心肌ATP酶活性的影响

实验旨在观察在体大鼠短暂缺血后心肌膜ＡＴＰ酶活性的变化及粉防己碱（Ｔｅｔ）的作用。分离缺血１５ｍｉｎ、再灌注２ｈ后及在缺血再灌注前给Ｔｅｔ的大鼠心肌粗制质膜和内质网,测定质膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果表明,心肌缺血１５ｍｉｎ后二酶活性均明显降低,分别为假结扎组的６３．６％和７２．６％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性有所恢复,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的７２．１％（Ｐ＜０．０１）,而Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性则进一步下降,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的５０．４％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后２ｈ二酶活性分别升高至假结扎组的８０．９％和６５．３％（Ｐ＜０．０１）。在缺血前２０ｍｉｎ分别给予Ｔｅｔ６４．２和９６．３μｍｏｌ／ｋｇ及硝苯啶（０．２３μｍｏｌ／ｋｇ）,能明显减少内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性的降低。结果提示心肌膜ＡＴＰ酶活性的降低可能参与了短暂心肌缺血所致再灌注损伤的发生机制,Ｔｅｔ可减少缺血和／或再灌注时内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性降低。     

立体型经口气管固定法对ICU患者非计划性拔管的影响

目的探讨改良方法立体型经口气管固定法固定经口气管插管的安全性和舒适性。方法将我院2014年1月~2015年12月收治的489例经口气管插管意识清醒患者进行分组,其中对照组237例采用传统方法固定经口气管插管,实验组252例采用立体型经口气管固定法固定经口气管插管,观察比较两组非计划性拔管发生率、气管导管的牢固度以及并发症发生情况。结果实验组非计划性拔管发生率、气管导管的牢固度均优于对照组(P0.05);并发症发生率低于对照组,且口腔护理效果优于对照组,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论立体型经口气管固定法能有效降低非计划性拔管发生率,固定气管导管更牢固,并发症的发生率明显降低,且方便口腔护理,具有一定的临床应用价值。     

RNA干扰NF-κB p65对缺血再灌注损伤鼠肺NF-κB和TNF-α的影响

为了研究RNA干扰NF-κBp65对鼠肺缺血再灌注损伤肺组织中NF-κB、TNF-α表达的影响,并探讨减轻鼠肺损伤的保护机制。本研究构建了体外靶向NF-κBp65的短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)重组表达载体,并采用QPCR检测NF-κBp65的沉默结果。供试的16只SD大鼠随机分为4组:假手术组4只、缺血再灌注+生理盐水组4只,缺血再灌注+NF-κBp65 sh RNA组4只,缺血再灌注+空载组4只,假手术组无缺血再灌注损伤,开胸游离左肺门180 min,缺血再灌注+生理盐水组左肺门阻断前术前24 h给予生理盐水处理,开胸游离左肺门,左肺缺血60 min,再灌注120 min,缺血再灌注+NF-κBp65 shRNA组左肺门阻断前术前24 h滴鼻给予NF-κB shRNA腺病毒(1×1010pfu, 100μL/只),开胸游离左肺门,左肺缺血60 min,再灌注120 min,缺血再灌注+空载组左肺门阻断前术前24 h滴鼻给予空载shRNA腺病毒(1×10~(10)pfu, 100μL/只),开胸游离左肺门,左肺缺血60 min,再灌注120 min。实验结束后每组分别留取左肺组织,留取左肺上叶肺组织测定肺湿/干重比(W/D),部分肺组织光镜下观察病理变化,ELISA法测量NF-κB和TNF-α的表达含量。研究结果表明:成功构建重组NF-κBp65载体,并获得稳定转染的NF-κBp65 shRNA细胞,与转染空载体的阴性对照组(negative control, NC)比较,NF-κBp65 sh RNA能明显使NF-κBp65基因沉默(p0.05),肺组织NF-κB、TNF-α的表达量及W/D值与假手术组比较,缺血再灌注+生理盐水组和缺血再灌注+空载组有明显升高(p0.05);而与缺血再和灌注+生理盐水组和缺血再灌注+空载组比较,缺血再灌注+NF-κBp65 shRNA组明显降低(p0.05),病理学检查表明:假手术组肺组织无明显的炎症损伤;缺血再灌注+NF-κBp65 shRNA组肺炎性损伤较缺血再灌注+生理盐水组和缺血再灌注+空载组明显减轻。本研究结果初步说明,RNA干扰NF-κBp65能明显减轻早期肺移植损伤,其机制可能与抑制NF-κB和TNF-α的表达从而减轻肺组织炎症损伤有关。     

水通道蛋白AQP1,3,4,5在双峰驼肺中的表达

目的研究水通道蛋白AQPs在双峰驼肺中的表达情况,探讨双峰驼适应极干旱荒漠环境的呼吸生理机制。方法运用常规形态学统计方法和石蜡切片HE染色法对双峰驼肺组织形态结构进行统计与分析,免疫组化方法对双峰驼肺中AQPs的表达进行定位分析。结果双峰驼气管长且弯曲,肺较致密且含水量较黄牛高。免疫组化检测显示,在双峰驼肺中有AQP1、AQP3、AQP4和AQP5四种AQPs表达。其中,AQP1主要表达于肺毛细血管网、淋巴管以及气管上皮细胞顶膜面;AQP3主要表达于气管上皮基底细胞质膜上;AQP4主要分布于整个气管上皮杯状细胞基底侧细胞膜和肺泡Ⅱ型上皮细胞;AQP5表达于气管粘膜下腺腺体细胞管腔面和肺泡Ⅰ型上皮细胞膜上。结论呼吸道和肺组织形态学特征表明双峰驼对干旱沙漠环境具有很好的适应性,AQPs在双峰驼肺中的强烈表达,与气道润化、气道水平衡、气道表面液体层、肺内液体转运和肺内水平衡等生理过程有关,为其适应极干旱荒漠环境提供了分子生物学依据。     

吗啡和可待因在外周影响咳嗽反射

多年来普遍认为,支气管收缩参与咳嗽反射。吗啡和可待因具有中枢性镇咳作用,但它们对伴随咳嗽发生的支气管收缩究竟有何影响尚不清楚。最近Yanaura等采用狗的在体气管上段灌注装置研究了吗啡和可待因对咳嗽反射的外周作用。利用这种装置可以应用小剂量吗啡和可待因(低于静脉注射产生镇咳作用的剂量)在接近气管动脉处做动脉注射或灌注,使药物在气管粘膜周围的气管血管床达到较高浓度,并观察对电极刺激该部位气管粘膜诱发咳嗽及支气管收缩的影响。普鲁卡因、利多卡因及退嗽等具有外周性镇咳作用的药物均能明显抑制电刺激气管粘膜引起的咳嗽反应及伴随产生的支气管收缩。动脉注射吗啡(0.1mg)和可待因(1.0mg)     

硬膜外注射吗啡对兔急性缺血再灌注后左心功能的影响

目的在兔急性心梗再灌注模型中通过硬膜外给予吗啡,探讨其对兔心肌急性缺血再灌注损伤的保护作用。方法采取开胸结扎LAD(left anterior descending,左前降支)的急性心肌梗死模型,结扎冠状动脉LAD 30min后,松开结扎线,再灌注4 h。新西兰兔22只随机分成2组:①硬膜外吗啡组:经硬膜外注入吗啡(0.25 mg/kg,配成0.5 mL溶液);②对照组:经硬膜外注入生理盐水0.5 mL。缺血再灌注后逐层关胸,4周后行超声心动图检查。结果缺血再灌注后4周,两组LVEDD和LVESD均明显增大,但以对照组为甚,组间比较差异有显著性(P<0.05);而LVEF和LVFS,在缺血再灌注后4周硬膜外吗啡组分别降低了9.36%和8.24%,对照组分别降低了13.53%和12.18%,对照组比硬膜外组更显著(P<0.05),左室心功能硬膜外吗啡组好于对照组(LVEF:69.73%vs.62.99%;LVFS:31.39%vs.26.59%;LVEDD:14.35 vs.16.96;LVESD:9.52 vs.12.01),差异有统计学意义(P<0.05)。结论硬膜外注射吗啡能改善缺血再灌注后左心功能,并对缺血再灌注心肌有明显的保护作用。     

三种鼠尾草注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

本文研究了云南产鼠尾草属药物滇丹参、甘西鼠尾、褐毛甘西鼠尾对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ,并与丹参进行对比其疗效的相似性。结扎大鼠冠脉左前降支 ,30分钟后剪断结扎线造成心肌缺血再灌注模型 ,经股静脉给药。测定再灌注 6 0分钟后血清中CK、LDH、SOD、GSH -Px和MDA含量。结果滇丹参、甘西鼠尾、褐毛甘西鼠尾可以显著降低心肌缺血再灌注后血清CK、LDH和MDA含量 ,升高血清SOD和GSH -Px活力 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,与丹参有相似的抗心肌缺血再灌注损伤作用。     

持续灌注和静态保存对中性粒细胞凋亡的影响

为研究体外循环机持续灌注、间断压力灌注、单纯低温保存犬离体肺对支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞凋亡变化以及对肺泡巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的影响,探索最佳的离体肺保存方式,将30只Mongrel犬随机分成3组,为体外循环组、压力灌注组和低温保存组,每组10只。在保持机械通气的条件下,完整摘取双肺,3种不同方式保存离体肺,并按时间点留取支气管肺泡灌洗液标本。流式细胞仪检测犬离体肺支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞凋亡,免疫组织化学法检测犬离体肺肺泡巨噬细胞对凋亡中性粒细胞吞噬。随着犬肺离体时间的推移,各实验组离体肺支气管肺泡灌洗液中凋亡的中性粒细胞明显减少,在每个时间点上,体外循环组中性粒细胞的凋亡最多,压力灌注组中次之,低温保存组中最少。各实验组吞噬凋亡中性粒细胞的巨噬细胞随着离体时间的延长呈逐渐减少的趋势,在肺离体各时间点上,体外循环组中巨噬细胞对凋亡中性粒细胞的吞噬清除优于间断压力灌注组和单纯低温保存组。采用体外循环机持续灌注犬离体肺,能增加中性粒细胞凋亡,促使吞噬细胞吞噬凋亡的中性粒细胞,避免发生凋亡延迟,从而减轻离体肺组织的缺血再灌注损伤,具有较好的肺保护作用。     

改良线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立

目的对大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型进行改良,通过比较再灌注24h时大鼠神经功能评分、梗死率、模型制作时间、成功率和死亡率等指标评价改良线栓法大鼠MCAO再灌注模型的有效性。方法12只SD大鼠随机分为对照和模型两组,对照组采用分离结扎翼腭动脉,从颈外动脉插入线栓至大脑中动脉。模型组采用不分离结扎翼腭动脉,从颈总动脉分叉处插入线栓至大脑中动脉。阻断大脑中动脉血供2h后将线栓拔出实现再灌注。于再灌注24h时观察脑组织组织病理学改变,计算比较两组大鼠神经功能评分、模型制作时间、模型成功率和死亡率以及鼠脑切片TTC染色测量脑梗死率。结果两组MCAO模型在再灌注24h后大鼠神经功能评分、梗死率、模型成功率和死亡率等方面没有显著差异;模型组的模型制作时间显著少于对照组（P〈0．05）。结论采用不分离结扎翼腭动脉,由颈总动脉插入线栓的改良线栓法是稳定和可靠的MCAO造模方法。