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1.
为揭示G蛋白偶联受体激酶(G protein-coupled receptor kinases,GRKs)的N端结构域在该酶家族磷酸化受体以及催化反应中的作用,对GRK2的N端结构域进行了缺失突变研究。将N端结构域的GRK2(ΔN-GRK2)与谷城肽转硫酶融合表达。经过亲和纯化后,再用凝血酶酶切得到单独的ΔN-GRK2蛋白。对磷酸化小肽的活力检测表明,N端结构域的缺失基本上不影响GRK2的激酶催化 相似文献
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本综述从葡激酶的溶栓作用机制,包括与纤溶酶(原)等因子的结合与作用,葡激酶的高级结构,抗原性问题等方面概括了近年来有关葡激酶作为亲一代溶栓剂的研究成果,并指出进一步利用蛋白质工程,对葡激酶进行分子改造的设想。 相似文献
3.
用定位突变方法对人脑己糖激酶活性位点的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
陈丽蓉 《中国生物化学与分子生物学报》1998,14(6):742-745
哺乳动物己糖激酶Ⅰ的分子量是100kD.目前已经认为是由分子量50kD酵母型己糖激酶通过基因复制和融合进化来的.己糖激酶Ⅰ的C端半分子包含了底物葡萄糖的结合位点即催化位点.X射线衍射结构的结果已经推测在酵母型的己糖激酶分子中Ser-158、Asp-211是和葡萄糖的结合及催化活性有关,这些氨基酸残基相当于人脑己糖激酶Ⅰ分子中的Ser-603、Asp-657,它们正好位于该酶分子的C端半分子中.定位突变这两个氨基酸残基得到4个该酶的C端半分子酶(mini-HKⅠ)的突变体,它们是Ser-603→Cys,Ser-603→Thr,Asp-675→Glu,Asp-675→Val.实验结果指出4个突变体酶的Km值变化不大,但酶活性只保留野生型酶的0.28%~11%,园二色谱分析4个突变体的CD谱与野生型酶基本一致,因此说明二级结构没有变化.这些研究结果和X射线衍射结构的推断是一致的,显示了Ser-603和Asp-657氨基酸残基在该酶结合底物葡萄糖或催化作用上起了重要的作用. 相似文献
4.
人微小纤溶酶原基因在甲醇营养型酵母中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasminogen,mplg)cDNA,与分泌型酵母表达载体pHILD8重组,构成受醇氧化酶基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,然后转化GS115酵母菌,经表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆,然后以甲醇诱导表达,mplg分泌至培液,以酪蛋白琼脂糖平板溶圈法、发色底物法检测,mplg显示出纤溶活性。 相似文献
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本综述从葡激酶的溶栓作用机制,包括与纤溶酶(原)等因子的结合与作用,葡激酶的高级结构,抗原性问题等方面概括了近年来有关葡激酶作为亲一代溶栓剂的研究成果,并指出进一步利用蛋白质工程,对葡激酶进行分子改造的设想。 相似文献
6.
巨大芽孢杆菌(Bacilusmegaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68676kD。该淀粉酶属糖化型α淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α淀粉酶之间有833%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N端3/4的同源性为904%,而C端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。 相似文献
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3种人肿瘤坏死因子衍生物的研制 总被引:5,自引:0,他引:5
本文在详细分析肿瘤坏死因子(TNF)结构的基础上应用PCR技术和基因工程手段改造人TNF分子,构建了3种人TNF的衍生物。3种人TNF衍生物是;N端缺失7个氨基酸且8、9、10位的ProSerAsp改为ArgLysArg的TNF(简写为hTNFD1):C端157位Leu改为Phe的TNF(简写为hTNFD2);N端和C端同时作上述改变的TNF(简写为hTNFD3)。这3种衍生物在大肠杆菌中均获得较高表述,它们对L929细胞的细胞毒活性较重组天然人TNF有很大升高,尤其是hTNFD1和hTNFD3,升高达3个数量级。文中对3种衍生物活性升高的原因作了分析。 相似文献
8.
与白细胞介素-2(IL-2)受体γ(IL-2Rγ)结合的非受体型酪氨酸激酶Jak3在IL-2发挥生理作用过程中起着重要作用。为了寻找它的下游分子,利用酵母双杂合系统以Jak3的N端JH3-JH7区域筛选cDNA库。 相似文献
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硫代反义寡核苷酸在细胞培养内抗甲型流感病毒活性 总被引:5,自引:0,他引:5
为了研究抗流感病毒特异性反义核酸药物,针对A型流感病毒基因组3'和5'端保守序列,设计并合成了4条硫代寡核苷酸(ODN):3'端反义ODN(IV3^#)与3'端正义ODN(IV3S),5'端反义ODN(IV4^#)与5'端正交ODN(IV4S)。以流感病毒血凝滴度和致细胞病变作用为指标,测定了ODNs在MDCK细胞中对A型流感病毒A/京防/86-1(H1N1)复制的影响。结果表明,与流感病毒基因组 相似文献
10.
P61蛋白质是从水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)雄性不育突变体农垦58S(NK58S)叶绿体中发现的一个蛋白质,微序列分析结果表明它的N端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体ATP酶β亚基的一致。免疫印迹分析证明P61与玉米叶绿体ATP酶β亚基抗体有特异性的交叉反应。P61与常规水稻“农垦58”(NK58)的β亚基的分子量基本相同,但其等电点偏碱性端,与β相差约0.3个pH 相似文献
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核因子—kB的研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
机体对损伤及微生物和侵进入防御反应时,活化的核因子-kB(NF-kB)可诱导细胞合成各种生物大分子。细胞处于静息状态时,NF-kB与kB抑制蛋白(IkBs)结合形成三聚体存在于细胞质内。当细胞受到外界因素刺激时,NF-kB与IkBs分离,NF-kB进入细胞核内,其亚基形成环状结构与DNA接触,启动基因转录。随后,新合成的IkBs又与NF-kB结合返回细胞质,不同IkBs亚型发挥不同的生理功能,同时 相似文献
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蒲桃Svzygium jambos (L.)Alston叶上的类葡柄菌属Stemphyliomma Saccardo &Traverso-一新种定名为异色类葡柄菌Stemphyliomma hetreochomum N.Li&Zhao sp.nov。,地该种形态作了汉、拉文描述,并绘图示之。模式标本保存在西南林学院(HSFC)森林病理标本室。 相似文献
14.
目的:利用N端缺失10个氨基酸的葡激酶(recombinant staphylokinase,rSaK)重组质粒,构建了表达可溶性rSaK126蛋白的工程菌,并研究不同条件下工程菌诱导表达目的蛋白含量的差异及纯化途径。 方法:采用细菌活化和培养方法诱导目的蛋白,并用SDS-PAGE测其含量,应用层析技术纯化蛋白。 结果:成功构建表达重组葡激酶的工程菌,表达的重组葡激酶蛋白约占菌体总蛋白的50%,经纯化后回收率为60%,纯度达99%以上。结论:成功构建高效表达重组葡激酶的工程菌,并获得了高含量、高纯度的目的蛋白。 相似文献
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JNK/SAPK信号传递途径与细胞应激反应 总被引:2,自引:0,他引:2
c-JunNH2-末端激酶(JNK)又称为应激活化蛋白激酶(SAPK),是有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员之一。大量研究证实,JNK/SAPK信号传递途径在细胞应激反应中起重要作用。JNK/SAPK信号传递途径的激活促进细胞凋亡发生,其机制与诱导FasL表达、调控凋亡相关基因差异表达和改变细胞内Ca^2+环境与激活caspases家族在关。在某些情况下,JNK/SAPK信号传递途径的激活 相似文献
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葡萄球菌激酶作为新型溶栓剂的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
近年来对溶栓剂的研究取得了很好的成果,主要集中在单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scuPA),组织型纤溶酶原激活剂(tPA),葡萄球菌激酶(SaK)等。葡萄球菌激酶(SaK)是一种激活溶纤维蛋白的制剂,它与纤溶酶原(Plg)形成1∶1的复合体,使后者转变为纤溶酶(Pli)后激活其他分子变为Pli。从葡激酶的溶栓作用机制,包括与纤溶酶(原)等因子的结合作用,葡激酶的高级结构,抗原性等问题以及近年来有关葡激酶作为新一代溶栓的研究进展进行了综述,并指出进一步利用蛋白质工程,对葡激酶进行分子改造的设想。 相似文献
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采用基于神经网络的算法预测了我们自行克隆的新的白血病相关蛋白EEN(extra elevennineteen, EEN)全长分子的二级结构,结果表明:EEN 蛋白可能有三个结构域,N 端由三段α螺旋和短β折叠组成,中间为四段α螺旋组成的四螺旋结构,C端为SH3结构域,类似于在受体酪氨酸激酶信号传导途径中起重要作用的SEM-5/GRB2 C端SH3结构域;利用同源蛋白结构模拟的方法,模拟了EEN SH3结构域的三维结构,结果表明:EEN SH3结构域与SEM-5/GRB2 SH3结构域具有相近的结构,构成脯氨酸结合区的氨基酸非常保守.上述结果提示:EEN 蛋白可能为新的信号蛋白,可能涉及新的信号传导途径或新的信号传导旁路,SH3结构域是其功能区域. 相似文献
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核因子-κB的研究进展 总被引:5,自引:0,他引:5
机体对损伤及微生物入侵进行防御反应时,活化的核因子-κB(NF-κΒ)可诱导细胞合成各种生物大分子。细胞处于静息状态时,NF-κB与κB抑制蛋白(IκBs)结合形成三聚体存在于细胞质内。当细胞受到外界因素刺激时,NF-κB与IκBs分离,NF-κB进入细胞核内,其亚基形成环状结构与DNA接触,启动基因转录。随后,新合成的IκBs又与NF-κB结合返回细胞质。不同的IκBs亚型发挥不同的生理功能。同时,对NF-κB的生理功能也作了介绍。 相似文献
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10种卫矛科植物次生韧皮部的比较解剖 总被引:6,自引:0,他引:6
研究了卫矛科(Celastraceae)5 属10 种植物次生韧皮部的结构。根据筛管分子、韧皮射线及厚壁组织的结构特征,将这10 种植物次生韧皮部分为3 种类型。类型Ⅰ:筛管分子端壁倾斜,筛域数多,都为复筛板,韧皮射线大多为单列。卫矛属(Euonym us)的5 种植物属于这一类型;类型Ⅱ:包括南蛇藤属(Celastrus)和雷公藤属(Tripterygium ),其特征是筛管分子短,端壁倾斜度小,筛域数少,纤维不木质化,射线多列;类型Ⅲ:筛管分子多为单筛板,端壁接近水平,在不具功能韧皮部出现成簇的石细胞和纤维,射线单列或两列。属于此类型的有十齿花属(Dipentodon)和核子木属(Perrottetia) 相似文献
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利用聚合酶链式反应(PCR)获得了萝卜(Raqhanus sativus L.)抗真菌蛋白1(Rs-AFP1)基因编码区核苷酸序列。将整个阅读框架片段和云除了N-端信号肽序列的片段分别装入原核表达载体pET-32g(+)中,在大肠杆菌中表达,发现带有信号 的Rs-AFP1不能在大肠杆菌中表达,而当这一序列去除后,表达出约27kD的Rs-AFP1的融合蛋白。用凝血酶处理融合蛋白以云除N-端His.t 相似文献