Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Ｍｎ－ＳＯＤ与抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因（Ｓｃ－Ｆｖ ｇｅｎｅ）融合,重组到含Ｔ７启动子的表达载体ｐＥＴ－２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＭｎ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质和迹图谱显示表达物分子量为４５ｋＤ与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为泌型表达有利于纯化。ＲＩＡ测定表     

人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达

用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）,以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤ）的ｃＤＮＡ,并进行序列分析,将该ｈＣｕ,ＺｎＳＯＤｃＤＮＡ重组到Ｔ７启动子控制下的分泌型表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＳＯＤ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明,经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代βＤ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后,可高效表达一分子量为１９ｋＤ的蛋白质,与抗人ＳＯＤ多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的３０％,具有特异性ＳＯＤ酶活性,酶活力可达１７９７ｕ／ｍｌ培基。     

一种简便快速的蛋白质免疫印渍法介绍

一种简便快速的蛋白质免疫印渍法介绍骆爱玲,王继伟,李佳格（中国科学院植物研究所,北京１０００４４）ＡＳＩＭＰＬＥＭＥＴＨＯＤＦＯＲＰＲＯＴＥＩＮＢＬＯＴＴＩＮＧＡＮＤＬＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹＬｕｏＡｉ－ｌｉｎｇ;ＷａｎｇＪｉ－ｗｅｉ;Ｌｉｊｉａ－ｇｅ（...     

丙型肝炎病毒非结构区NS4b基因片段的克隆和表达

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和ＤＮＡ体外重组方法,克隆出５７９ｂｐ的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ４ｂ基因片段,插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－２８ａ中,构建重组质粒ｐＥＴ／ＮＳ４ｂ,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株,经ＩＰＴＧ诱导培养后,获得了目的蛋白的高效表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在３０ｋＤ处有一条表达的目的蛋白区带。通过固定化金属配体亲和层析（ＩＭＡＣ）纯化目的的蛋白,ＥＬＥＳＡ检测结果表     

植物胚胎发育后期富集(LEA)蛋白的研究进展

植物胚胎发育后期富集（ＬＥＡ）蛋白的研究进展汤学军傅家瑞（中山大学生命科学学院,广州５１０２７５）ＰＲＯＧＲＥＳＳＯＦＴＨＥＳＴＵＤＹＯＮＬＡＴＥＥＭＢＲＹＯＧＥＮＥＳＩＳＡＢＵＮＤＡＮＴ（ＬＥＡ）ＰＲＯＴＥＩＮＳＩＮＰＬＡＮＴＳＴａｎｇＸｕｅ－Ｊ...     

甲基单胞菌Methylomonassp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的…

Ｍｅｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌ ＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明的酶由     

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法＊王台（中国科学院植物研究所,北京１０００９３）ＡＭＥＴＨＯＤＴＯＳＴＡＩＮＴＨＥＧＥＬＯＦＴＷＯ－ＤＩＭＥＮＳＩＯＮＡＬＧＥＬＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＳＩＳＷａｎｇＴａｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,Ａｃａｄ...     

霍乱弧菌zot基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从霍乱疫苗菌中抽提基因组ＤＮＡ,用ＰＣＲ的方法扩增ｚｏｔ基因。序列分析表明,ｚｏｔ基因编码３９９个氨基酸,其中４个氨基酸与文献报道有差异。将ｚｏｔ基因插入含Ｔ７启动子的质粒ｐＥＴ－２８（ａ＋）构建表达质粒ｐＥＴ－ＺＯＴ,转化大肠檑菌ＢＬ２１（ＤＥ３）筛有达菌株ＢＬＺＯＴ。表达菌株经１ｍｍｏｌ／ＬＴ ＩＰＴＧ诱导表达３－５ｈ后,表达大量ＺＯＴ蛋白,并形成包涵体,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析重组ＺＯＴ蛋白分     

人血小板生成素受体c—MPL膜内部分的聚合作用

血小板生成素（ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－ＭＰＬ介导。利用酵母双杂合系统研究ｃ－ＭＰＬ膜内部分在ＴＰＯ信号转导途径中的功能。首先用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从人红白血病ＨＥＬ细胞系总ＲＮＡ中扩增并克隆Ｐ型ｃ－ＭＰＬ（ＭＰＬＰ）膜内部分ｃＤＮＡ,经测序验证后克隆至双杂合载体ｐＡＳ２和ｐＧＡＤ４２４中,重组质粒命名为ｐＡＳＭＭ和ｐＧＡＤＭＭ。将ｐＡＳＭＭ与ｐ     

多胺和精氨酸对苹果实生根系的影响

多胺和精氨酸对苹果实生根系的影响杨洪强黄天栋（山东农业大学园艺系,泰安２７１０１８）ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＰＯＬＹＡＭＩＮＥＳＡＮＤＡＲＧＩＮＩＮＥＯＮＳＥＥＤＬＩＮＧＲＯＯＴＯＦＡＰＰＬＥＹａｎｇＨｏｎｇ－ｑｉａｎｇＨｕａｎｇＴｉａｎ－ｄｏｎｇ（Ｄｅｐ...     

Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统

 Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用 ,同时也为基因治疗提供了一种理想的基因载体系统     

Characterization of a rice gene family encoding root-specific proteins

Two cDNA clones (RCc2 and RCc3) corresponding to mRNAs highly expressed only in root tissues of rice (Oryza sativa L.) seedlings were characterized. Respectively, they encode polypeptides of 146 (14.5 kDa) and 133 amino acids (13.4 kDa) that share high (<70%) sequence similarity with a polypeptide encoded by a cDNA (ZRP3) encoding an mRNA preferentially expressed in young maize roots. Genomic DNA blot analysis revealed that they are members of a small gene family and RCg2, the gene corresponding to RCc2, was isolated. A 1656 bp 5-upstream sequence of RCg2 was translationally fused to a -glucuronidase (GUS) reporter gene and stable introduction of the chimeric construct into rice was confirmed by PCR and genomic DNA blot analyses. Histochemical analysis of transgenic rice plants containing the full-length chimeric gene showed high levels of GUS activity in mature cells and the elongation and maturation zones of primary and secondary roots, and in the root caps, but no GUS activity was detected in root meristematic regions. Surprisingly, high GUS activity was also detected in leaves of the same plants. This raises the possibility that the RCg2 5-upstream element may not be sufficient for the proper spatial control of root specificity in transgenic rice.     

Rapid divergence in expression between duplicate genes inferred from microarray data

For more than 30 years, expression divergence has been considered as a major reason for retaining duplicated genes in a genome, but how often and how fast duplicate genes diverge in expression has not been studied at the genomic level. Using yeast microarray data, we show that expression divergence between duplicate genes is significantly correlated with their synonymous divergence (K_S) and also with their nonsynonymous divergence (K_A) if K_A ≤ 0.3. Thus, expression divergence increases with evolutionary time, and K_A is initially coupled with expression divergence. More interestingly, a large proportion of duplicate genes have diverged quickly in expression and the vast majority of gene pairs eventually become divergent in expression. Indeed, more than 40% of gene pairs show expression divergence even when K_S is ≤ 0.10, and this proportion becomes >80% for K_S > 1.5. Only a small fraction of ancient gene pairs do not show expression divergence.     

通用真核质粒表达载体的构建

利用真核基因表达调控的原理,以pSV2-dhfr为起始材料,构建了两个通用的真核质粒表达载体pMAML1-dhfr和pMAML2-dhfr,它们包含人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子调控元件,由两个转录方向相同或相反的表达单元组成.以荧火虫荧光素酶基因为报道基因,β-半乳苷酶基因为内对照,借助COS-7短暂表达系统,研究了它们对荧光素酶表达的影响,并比较了它们与出发载体pSV2-dhfr的相对强弱.     

表达谱基因芯片

表达谱基因芯片具有高通量、缩微、多参数、平行化等优点.在功能基因组学研究中正发挥越来越重要的作用.就其原理、应用、存在问题及解决策略等进行了综述.     

基因表达系列分析技术的新进展

作为新近建立的研究基因表达的有效工具 ,基因表达系列分析 (SAGE)技术能同时对大量的转录物进行定性和定量分析。它不仅可以显示低丰度的转录物 ,提供基因组表达的完整信息 ,而且可以通过不同状态下基因表达图谱的比较 ,深入了解基因表达的时空性和有序性 ,从而寻找和发现新基因。本文介绍了SAGE的工作原理和方法 ,并着重对其最新的应用与研究进展进行了综述。     

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx26作为目的基因,通过T-A载体介导,构建真核表达重组载体pcDNA3.1( ) /Cx26,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx26间隙连接蛋白。     

植物实时荧光定量PCR内参基因的特点及选择

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)具有灵敏度高、特异性强、重复的动态定量范围和高通量等优点,是进行植物基因表达和转录分析最常用的技术手段之一.选择合适的内参基因是正确运用实时荧光定量PCR分析目标基因表达变化的前提.近年来,大量研究表明,内参基因的选择应取决于研究者的实验条件;随着实验条件的变化,内参基因的选择也随之变化.因此,实时荧光定量PCR结果分析的准确性在很大程度上依赖于所选择的内参基因是否适合.该文从内参基因的选择、常用内参基因的特点、新内参基因的挖掘、应用内参基因组合的优点和内参基因的稳定性评价等几方面进行综述,以期为研究者在实验中选择合适的内参基因提供参考和理论依据.     

囊胚形成的基因表达与调控(英文)

囊胚形成是胚胎早期发育过程中一个重要阶段 ,涉及几个重要的生理事件 ,即细胞融合 (compaction ,亦称致密化作用 )、囊胚腔出现、囊胚腔扩张及滋养层和内细胞团的分化。在细胞间连接蛋白的作用下 ,各种细胞间连接方式逐步建立起来 ,在合子型基因组表达调控下 ,促进了最终囊胚的形成。细胞间连接蛋白和细胞粘附相关蛋白参与组建各种细胞间连接 ,参与细胞融合、囊胚腔形成、滋养层分化和囊胚扩张等过程。通过顶部的紧密连接、侧部的缝隙连接和桥粒 ,建立起细胞的连接复合体。在人胚胎 8 细胞之前 ,卵裂球细胞界限明显 ,可能以中间连接方式相互作用 ;8 细胞期发生致密化作用 ,通过紧密连接将细胞分成顶部和基部 ,使得胚胎处于半封闭状态 ,促进胚胎内部积液 ,形成囊胚腔。细胞融合的同时也产生缝隙连接。桥粒最初出现在人胚胎达到 3 2 细胞阶段 ,桥粒连接参与囊胚腔形成以及在囊胚扩张时维持滋养层的稳定性。桥粒由一些跨膜粘蛋白组成 ,包括参与细胞内粘附的桥粒子和桥粒球以及一些细胞质内蛋白 (如desmoplakins,plakoglobin ,plakophilin) ,由细胞内蛋白质形成空斑结构并介导细胞角蛋白丝固定。对植入前牛胚胎的研究表明 ,只有DcII,DcIII和plako三种桥粒蛋白参与桥粒组建。在鼠囊胚中DcII的表达部位位于