用底物类似物抗性法选育海因酶高产菌种

以底物类似物抗性作为选择性标记来筛选高产海因酶的突变菌种。假单胞菌(Pscudomonas sp. )J43通过紫外光、亚硝基胍、亚硝基胍加5-氟尿嘧啶三次诱变处理后,测定了161株有5-氟尿嘧啶抗性的突变株的产海因酶活力,得到的突变株M39产海因酶活力比出发株提高了13.7倍。此法对选育其他酶或其催化产物的高产菌种可能也有意义。     

1株产单宁酶细菌的分离鉴定及产酶条件研究

从富含单宁酸的土壤中分离筛选出1株产单宁酶的细菌,经过菌落形态观察和16S rDNA分子生物学鉴定,该细菌为肺炎克雷伯菌。对该菌所产胞外单宁酶的发酵条件进行了初步研究,得出最佳产酶条件：培养温度37℃,培养时间36 h,培养转速180 r/min,单宁酸含量2 g/L,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为氯化铵,此时所产单宁酶活力为0.8 U/mL。     

节杆菌K1108乙内酰脲酶产酶条件研究

研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1108的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶,存在于细胞内,乙内酰脲水解酶和N氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5苄基乙内酰脲,而5吲哚甲基乙内酰脲和5苯基乙内酰脲等不能诱导其酶的产生。筛选到一种安慰诱导物,诱导活性提高了2倍多。对产酶培养基进行了筛选和优化,在最适条件下,K1108产酶能力可达108U/mL。     

α-葡萄糖苷酶高产菌株HB-9-5的选育及产酶条件的优化

从土壤中筛选出一株高产α-葡萄糖苷酶的细菌HB-09-5,对其粗酶液进行研究发现,最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃,pH在4.0-7.0,温度在55℃以下保持酶活力相对稳定。通过对产酶条件进行优化,单因素试验表明,最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为牛肉膏,Mg2+和Ca2+对产酶有促进作用。优化发酵条件后,菌株HB-09-5产酶水平可达到20.95U/mL,比出发菌酶活提高了2.3倍。     

链霉菌产木聚糖酶条件和酶学性质以及重离子诱变对产酶的影响研究

以一株由青藏高原牦牛粪中分离出的链霉菌为出发菌株,对其培养特性、产酶条件和酶学性质进行初步研究.通过重离子诱变,筛选出遗传稳定的高产菌株.结果表明,该菌以玉米芯和麸皮(1∶1)为碳源能高效地诱导木聚糖酶的胞外分泌,其最适培养基和培养条件氮源为酵母膏、初始pH7、培养温度为25℃,在此条件下,第4天酶活力达到峰值3480.25 U/mL.说明该酶能够利用农业废弃物高效生产木聚糖酶.该菌株所产木聚糖酶的最适反应温度为15℃、pH4,属低温酸性木聚糖酶.经重离子诱变后,筛选出一株高产菌株SZ10-7,其酶活力可达5 338.42 U/mL.     

木霉LaTr 01菌株产漆酶发酵的条件

从华南地区采集土样,采用愈创木酚平板筛选产漆酶菌株,获得了一株短周期产漆酶的小型丝状真菌。通过观察菌落特征、生长情况以及显微镜下菌丝和孢子的形态,初步鉴定该菌株为木霉属的一个种（Trichodermaspp、）,命名为木霉LaTr01菌株。通过单因素方法研究该菌产漆酶的发酵条件,结果表明：LaTr01的产酶培养基以麦芽糖为最佳碳源;以酵母提取物为最适氮源;培养24h后加入Cu“比培养开始加入Cu ^2＋LaTr01产酶活高出约1倍。采用麦芽糖、酵母提取物、Cu^2＋浓度L9（3^3）的正交试验优化漆酶发酵条件,结果表明,氮源是影响该菌产漆酶的最重要因素,碳源次之,Cu^＋浓度影响较小;LaTr01菌株产生漆酶的最佳条件为：5g／L酵母提取物、20g/L麦芽糖、1．5mmol／LCu^2＋,Cu^2＋加入时间为培养24h后。在优化的培养条件下,该菌酶活可达480．556U／L。     

脂肪酶产生菌的筛选及一株黑曲霉产脂肪酶最适条件研究

通过固体平板筛选,从520株真菌中分离得到194株产脂肪酶菌。再选择其中透明圈较大的43株菌进行液体复筛,得到产酶活力最高的一株菌为黑曲霉L_1。最后,确定了此菌的最适产酶条件为:橄榄油作碳源,酵母膏作氮源,pH5.8,28℃培养4天。     

一组纤维素分解菌的分离、筛选及其产酶条件的研究

从堆肥中筛选得到两株分解纤维素的菌株,一株为高温单孢菌Q-0,另一株为芽孢杆菌Q-3,对Q-0、Q-3及这两株菌组成的混合菌产纤维素酶条件进行了研究。结果表明,混合菌分解棉花和滤纸纤维素的分解率均比单一菌株高,其分解率分别为69％和62％。混合菌产酶最适温度为50℃,pH7．5。在以棉花纤维为惟一碳源时,混合菌产生的纤维素酶可达101个酶活单位,比菌Q-0高近40个酶活单位。Q-0、Q-3和混合菌利用有机氮源优于无机氮源。     

顺式环氧琥珀酸水解酶产生菌的筛选及产酶条件

从65株诺卡氏菌中,筛选到一株产顺式环氧琥珀酸水解酶(ESH)的菌株,经鉴定为酒石酸诺卡氏菌(Nocardia tartaricans)SW13-57。在14L发酵罐中通过诱导培养,能在细胞内产生ESH酶活力达120u/g。产酶条件研究表明用丙二醇作碳源,硫酸铵作氮源,顺式环氧琥珀酸作诱导剂,初始pH7.0,温度30℃,通过培养24～30h,产酶量最高。该产酶菌株已被用于固定化细胞方法连续生产L(+)酒石酸。     

一株产纤维素酶菌株的分离、鉴定及产酶特性

【目的】筛选并鉴定一株产纤维素酶的菌株,初步探究该菌的产酶特性,为综合利用纤维素筛选菌源。【方法】在常温条件下,采用滤纸培养基对菌种富集,采用CMC-Na初筛纤维素降解菌,采用LB培养基分离纯化菌株,经形态学、生理生化特征试验、16S r RNA基因序列测定等分析筛选菌株的系统分类地位。单因素试验确定培养时间、培养温度、初始p H及Na Cl浓度对筛选菌株产酶活力的影响。【结果】从腐烂的玉米秸秆中分离出一株在常温下产纤维素酶细菌KZ-2,根据菌落形态特征、生理生化特征鉴定以及16S r RNA基因序列分析,初步鉴定KZ-2为肠杆菌(Enterobacter sp.),为潜在新种。产酶条件实验显示:该菌使用产酶发酵培养基120 h产酶量达到最大值,在25–35°C、初始p H 4.5–5.5、Na Cl浓度1.0%–2.0%范围内为最佳产酶条件,在最适条件下酶活可达80.93 U/m L。该菌株所产纤维素酶最适反应p H为7.0,最适反应温度为50°C。【结论】KZ-2是一株具有降解纤维素能力的细菌,在常温下即可分泌纤维素酶,并且该菌株为潜在新种,具有潜在的开发价值。     

产碱性蛋白酶嗜碱芽孢杆菌的筛选及其研究

利用造纸黑液对土样进行富集,筛选出3株碱性蛋白酶酶活力较高的嗜碱芽孢杆菌X1、X2、X3。对它们的生长曲线,产酶曲线,在不同C、N源、pH值、盐浓度下的产酶活力进行的研究表明:3株嗜碱芽孢杆菌(Bacillussp.JBX1、X2、X5)酶活力较高(达到100U/mL),X2最高酶活可达140U/mL。最适pH值为9.5,碳源中的蔗糖,氮源中的酵母浸提物和硝酸钠均利于产酶。X1、X5两株嗜碱芽孢杆菌均表现出较强的耐盐耐高渗透压的能力。X1在11%的NaCl浓度下生长良好,酶活仍然达到80U/mL以上。而X2和X5对温度的耐受性比较强,在经70℃处理15min后依然保持了80%以上的酶活力,所产蛋白酶为高温碱性蛋白酶,从而为进一步的应用和研究奠定了基础。     

小麦全蚀病菌胞外β-1,3-葡聚糖酶的产生和部分特性的研究*

本文就小麦全蚀病菌胞外-1,3-葡聚糖酶的产生和部分酶学特性进行了研究。结果表明,小麦全蚀病菌能够产生胞外-1,3-葡聚糖酶。在供试的三种培养基中,最佳产酶培养基为改进的MS培养基。当以改进的MS为基础培养基时,最佳碳源为麦麸皮;最佳氮源为牛肉浸膏;产酶的最适条件为培养基初始pH为6,培养温度为26℃,250ml三角瓶中装培养基量为50ml时接菌量为4块菌饼(直径5mm)。另外,对酶的部分性质的研究结果表明,酶最适作用温度和pH分别为60℃和7.0,在50℃以下以及pH 5.5～7.5范围内稳定。     

Hydantoin racemase from Arthrobacter aurescens DSM 3747: heterologous expression, purification and characterization

In Arthrobacter aurescens DSM 3747 three enzymes are involved in the complete conversion of slowly racemizing 5'-monosubstituted D,L-hydantoins to L-amino acids, a stereoselective hydantoinase, a stereospecific L-N-carbamoylase and a hydantoin racemase. The gene encoding the hydantoin racemase, designated hyuA, was identified upstream of the previously described L-N-carbamoylase gene in the plasmid pAW16 containing genomic DNA of A. aurescens. The gene hyuA which encodes a polypeptide of 25.1 kDa, was expressed in Escherichia coli and the recombinant protein purified to homogeneity and further characterized. The optimal condition for racemase activity were pH 8.5 and 55 degrees C with L-5-benzylhydantoin as substrate. The enzyme was completely inhibited by HgCL2 and iodoacetamide and stimulated by addition of dithiothreitol. No effect on enzyme activity was seen with EDTA. The enzyme showed preference for hydantoins with arylalkyl side chains. Kinetic studies revealed substrate inhibition towards the aliphatic substrate L-5-methylthioethylhydantoin. Enzymatic racemization of D-5-indolylmethylenehydantoin in D2O and NMR analysis showed that the hydrogen at the chiral center of the hydantoin is exchanged against solvent deuterium during the racemization.     

Arthrobacter K1108乙内酰脲酶反应条件和立体选择性研究

研究了Arthrobacter K1108乙内酰脲酶的反应条件,结果表明,K1108乙内酰脲酶的最适反应温度为55℃,最适pH为7.0,Co^2 和Fe^2 对该酶有激活作用,而Ca^2 有严重抑制作用。K1108乙内酰脲酶的底物专一性较强,其最适底物为5－苄基乙内酰脲,5－苯基乙内酰脲和5－吲哚甲基乙内酰脲均不能作为其有效底物。对K1108乙内酰脲酶立体反应机制研究结果表明,其乙内酰脲水解酶不具立体选择性,决定产物立体构型的酶是N－氨甲酰氨基酸水解酶。     

乙醇脱氢酶（ADH）产酶菌株的选育

从食醋生产企业的醋醅中采集样品,以乙醇为唯一碳源,用碳酸钙透明圈平板法分离出185株菌株,然后以产酸量和耐乙醇能力为标准,瓶发酵选育出20株ADH产酶菌株;A5-2产酸量为49.85 g/L,耐乙醇能力强,A5-2的菌种形态学和16S rDNA序列分析初步鉴定为巴斯德醋酸杆菌（ Acetobacter pasteurianus）;A5-2乙醇脱氢酶酶学性质研究表明：最适作用温度和pH分别为45℃和pH 4.0,具有一定的耐热性和良好的耐酸碱性;A5-2乙醇脱氢酶粗酶制备条件为硫酸铵饱和度70%~80%,回收率84%。     

嗜热菌Anoxybacillus sp．DL3产蛋白酶条件及其酶学性质研究

目的：对Anoxybacillussp．DL3的产蛋白酶条件及其酶学性质进行研究,为下一步进行蛋白酶基因的克隆、表达提供依据。方法：应用常规方法液体培养细菌,研究温度、pH、培养基中碳源、氮源对菌株产蛋白酶的影响,硫酸铵盐析的方法提取酶液,并采用Folin法测酶活性。用紫外分光光度计在OD680hi／1测吸光值。并对提取的蛋白酶液进行酶的最适温度、pH以及酶的热稳定性和pH稳定性研究,向酶液中添加金属离子和EDTA、PMSF,研究其对酶活性的影响。结果：在培养基初始pH是6．5,培养温度为40℃时菌株产酶酶活性最大;培养基中以乳糖为碳源,酵母膏和硫酸铵为氮源,碳源与氮源的比例为1：2时,酶活最大。酶学性质研究结果显示：该酶的最适反应温度是55℃,最适反应pH是7．0;在50℃保温20min-80min内,酶活力下降幅度较小。60℃保温60min后,仍保持约60％的酶活。70℃保温60min后,残余酶活为30％。该酶在pH为6．0～8．0范围内,相对酶活差别不是很大,下降趋势大致相同。在强碱条件下,相对酶活下降很明显。Fe2＋、Cu2＋和Hg2＋对酶活性有明显的抑制作用;Ca2＋、Mg^2＋、Mn2＋等金属离子对酶活性有明显的促进作用;乙二胺四乙酸（EDTA）和苯甲基磺酰氟（PMSF）对酶活性也有一定抑制作用。结论：Anoxybacillussp．DL3所产的蛋白酶为嗜热中性蛋白酶,此酶具有较好的热稳定性和pH耐受性,该菌株具有进一步开发、利用的价值。     

里氏木霉GXC木聚糖酶的研究

研究了里氏木霉GXC产木聚糖酶的条件和酶学性质。结果表明,适宜产酶碳源为乳糖、甘露糖、棉子糖、木聚糖和麸皮,氮源为牛肉膏和酵母膏;产酶的最适初始pH为4.0,30℃培养60h。对以麸皮为碳源的培养液进行纯化的酶特性研究表明,木聚糖酶的最适反应温度为50℃,pH为5.5,该酶在pH5.0(7.0和40℃以下相对稳定。Fe3+和Mn2+对木聚糖酶有较大的促进作用,Cu～2+、Fe～2+和Ca～2+ 具有抑制作用。     

Cellulase from Bacillus licheniformis and Brucella sp. isolated from mangrove soils of Mahanadi river delta,Odisha, India

In the present study, two cellulose-degrading bacteria (CDB-5 and CDB-12) were isolated from mangrove soils of Mahanadi river delta, based on halo zone formation in Congo red agar medium and evaluation for cellulase production in CMC broth medium. Based on morphological, biochemical and 16S rRNA gene sequencing, the two strains, CDB-5 and CDB-12, were identified as Brucella sp. and Bacillus licheniformis, respectively. The gene bank accession number of the strains CDB-5 and CDB-12 are KR632646 and KR632645, respectively. The strain Brucella sp. and B. licheniformis showed an enzyme activity of 96.37?U/ml and 98.25?U/ml, respectively, after 72?h of incubation period. Enzyme production was optimized under different growth conditions such as pH, temperature, agitation rate, carbon source, sodium chloride (NaCl), and nitrogen sources. Maximum cellulase production by both the strains was obtained in the same parameter condition such as pH (7.0), rpm (150), and NaCl (2%, w/v) which varies for other parameters. The strain, CDB-5, produced maximum cellulase at 35?°C temperature, maltose as a carbon source, and yeast extract as a nitrogen source where as the strain CDB-12 produces maximum cellulase at 45?°C temperature, carboxyl methyl cellulose (CMC) as carbon source and trypton as a nitrogen source. The bacterial crude enzyme was purified by ammonium sulfate precipitation followed by overnight dialysis. SDS-PAGE analysis of the partially purified cellulase enzyme exhibited band sizes of approximately 55 and 72?kDa.     

一组厌氧真菌菌系产阿魏酸酯酶的初步研究

利用玉米秸秆粉为唯一碳源的筛选培养基,从肉牛瘤胃液中筛选构建了一组厌氧真菌菌系,研究了该菌系产阿魏酸酯酶的特征.阿魏酸酯酶的最适pH为8.0,最适温度为40℃,最高酶活力为19.1 mU/mL,在pH 6.0 ～8.0及35～45℃之间,酶活性保持相对稳定.Mg2+对酶活力具有激活作用,Fe2、Cu2+、Fe3+等均抑制酶活力.