粘细菌STXZ54的分离鉴定及其抗肿瘤活性

【目的】从广东省土样中分离并鉴定获得粘细菌,以丰富资源微生物库,并对其进行抗肿瘤活性的初步研究,为寻找新的抗肿瘤药物及其开发应用奠定基础。【方法】用灭活大肠杆菌诱导法,从广东土样中分离得到粘细菌,通过菌落形态观察、扫描电镜、生理生化特征、以及16s rRNA基因序列同源性分析,鉴定并归类细菌。测定不同生长时期代谢产物的抗肿瘤活性,分离纯化次级代谢产物得到抗肿瘤活性组分,测定抗肿瘤活性组分抗肿瘤谱及其对应的半致死浓度。利用激光共聚焦显微镜观察抗肿瘤活性组分作用B16后的亚细胞结构变化。【结果】分离并鉴定了粘细菌STXZ54新菌株,命名为Myxococcus macrosporus STXZ54,该粘细菌产生的抗肿瘤活性代谢产物能够较好地抑制B16、Hela、HCT-116、4T1、Hep-3B等多种肿瘤细胞,初步分离其代谢产物得到活性组分SGF5。经MTT实验算出SGF5对B16、Hela、Hep-3B、4T1细胞的IC50均在10μg/mL左右,对HCT-116细胞的IC50是70μg/mL。利用激光共聚焦显微镜观察到活性组分SGF5作用B16后亚细胞结构出现了明显的变化,结合细胞坏死与凋亡的检测初步判断SGF5能引起B16细胞的凋亡。【结论】从土样中分离得到粘细菌STXZ54,对分离到的活性组分进行了细胞毒性试验,证实其具有较好的抗肿瘤活性,有开发成抗肿瘤药物的潜在价值。     

粘细菌Myxococcus macrosporus STXZ54抗肿瘤活性物质的分离制备及其活性测定

粘细菌作为第三大类次级代谢产物产生菌,是挖掘抗肿瘤新药物的重要资源。将本实验室保藏的粘细菌菌株Myxococcus macrosporus STXZ54进行发酵培养后,通过对发酵液进行硫酸铵沉淀、丙酮沉淀等,分析了该菌株发酵液中抗肿瘤活性物质的性质,采用高效液相色谱技术对发酵液中的抗肿瘤活性物质进行了分离,并对该物质进行了肿瘤细胞毒性的测定,利用激光共聚焦显微镜观察该物质作用B16后的亚细胞结构变化。实验结果表明该物质可能为常温下性质较稳定的蛋白质类化合物,纯化到的单一组分WGF5对B16,Hela,MCF-7,Hep-3B肿瘤细胞均具有较强的抑制作用,其作用48 h的IC_(50)(最低半抑制浓度)分别为2.767μg/ml、2.204μg/ml、3.758μg/ml、3.073μg/ml。MTT实验以及激光共聚焦显微镜下观察分析发现,蛋白WGF5能够明显改变细胞形态并最终导致肿瘤细胞死亡。从粘细菌Myxococcus macrosporus STXZ54分离到的活性物质具有广谱高效的抗肿瘤效果,有开发成抗肿瘤新药物的潜在价值。     

粘细菌So ce cpu-1的鉴定及其抗肿瘤活性研究

目的:从土壤中筛选分离粘细菌并研究其抗肿瘤活性。方法:通过对菌的形态和生理生化特征分析确定其种属。通过MTT法研究粘细菌次级代谢物的抗肿瘤活性。结果:分离得到的粘细菌嗜纤维素属Socecpu-1,次级代谢产物具有很好的抗肿瘤活性。结论:该粘细菌的细胞毒作用呈时间依赖性,是潜在的抗肿瘤药物。     

鬼臼多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性

鬼臼经乙醚脱脂后用热水抽提,用蛋白酶法和Sevag法相结合除去蛋白质,乙醇分级沉淀,经DEAE－Sepharose和Superdex G-75或Sephacryl S-200HR柱层析纯化得到两种多糖组分EPS－A和EPS－B。经分析该两种多糖均为单一组分,用分子筛层析法测定了EPS－A和EPS－B的分子量分别为15kD和175kD。纸层析和气相层析分析得知,EPS－B含有木糖,阿拉伯糖,鼠李糖,葡萄糖,甘露糖和半乳糖,其摩尔比为0．37：2．20：0．57：9．83：1．0：3．42,而EPS－A中仅含葡萄糖,体内试验结果表明,EPS－B多糖对小鼠腹水肝癌细胞生长有一定的抑制作用。     

罗汉果根多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究

采用水提醇沉法提取、DEAE-52纤维素柱粗分离罗汉果根粗多糖(CPS),纸层析结合高效液相色谱分析CPS的单糖组成;同时研究CPS对小鼠H22皮下种植性肿瘤的影响。结果表明:采用DEAE-52纤维素柱粗分离得到5个多糖组分;CPS的单糖组成为:葡萄糖、阿拉伯糖、木糖,其中以葡萄糖为主;与模型对照组比较,CPS各剂量组无明显的抑制肿瘤生长作用(抑瘤率均低于50%);与模型对照组比较,CPS各剂量组小鼠的胸腺指数显著提高,差异极显著(P<0.01);而脾脏指数显著降低,差异极显著(P<0.01)。     

粘细菌的分离筛选方法及其应用前景

由于粘细菌自身生长特性的限制,分离纯化的困难和耗时,极大地限制了菌种资源的开发.该文简要介绍了粘枯细菌的生物生理学特性,探讨了基于纯培养技术筛选粘细菌的常用方法,以及运用宏基因组技术来获得未培养或无子实体克隆菌株的流程,指出了当前在菌种筛选方面存在的主要问题,对进一步的研究开发给出了一些见解,并展望了其在医药、农业、生态环境和工业生产中的应用前景,使粘细菌得到更多研究者的重视,弥补其应用研究的不足.     

骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定

骆驼蓬种子经浸提、硫酸铵沉淀、CM阳离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化得到一种具有抗肿瘤细胞增殖活性的蛋白(命名为PhLTP),经Tricine-SDS-PAGE检测为单一蛋白条带,高效液相色谱检测其表观分子量为14.8 kDa左右,表明PhLTP是由两条相同的亚基组成的蛋白.采用Edman降解法对该纯化蛋白的N-末端进行氨基酸测序,其N-末端序列与其他植物非特异性脂转移蛋白相似.对PhLTP抗肿瘤活性进行研究,结果表明其对HeLa、Eca-109、MGC-9和BEL-7404细胞都有增殖抑制活性,其中对HeLa细胞增殖的抑制作用较好,并具有浓度和时间依赖性,其IC50为45 μg/mL.通过Hoechst33258染色观察细胞形态,发现PhLTP能诱导HeLa细胞发生凋亡.     

新疆阿克苏地区盐碱地粘细菌分离鉴定

【目的】采用传统的纯培养技术,分离新疆阿克苏地区典型的盐碱地中的粘细菌,并初步分析盐碱地土壤中可培养粘细菌资源的多样性。【方法】采用传统的水琼脂法、滤纸法和改良的土壤浸出液法分离新疆阿克苏地区25份盐碱地的粘细菌。结合分析土样的酸碱度、含盐量、地理位置及其植被分布情况分析新疆阿克苏地区盐碱地粘细菌资源多样性。【结果】共分离到58株粘细菌,它们被鉴定为:粘球菌属(Myxococcus)33株;珊瑚球菌属(Corallococcus)14株;孢囊杆菌属(Cystobacter)6株;堆囊菌属(Sorangium)2株;侏囊菌属(Nannocystis)2株;多囊菌属(Polyangium)1株。其中粘球菌抗逆性强,分离的菌株数最多,在pH值7.5-8.5范围的盐碱地中普遍存在;其次为珊瑚球菌属;而侏囊菌属、多囊菌属的菌株较少见。【结论】新疆阿克苏地区盐碱地粘细菌多样性不高,可能受分离纯化方法、含盐量以及土壤性质影响较大。     

越南原始森林粘细菌的分离与鉴定

为了探讨越南热带原始森林环境中可培养粘细菌的多样性,以原始森林的土壤、腐木及树皮样品为研究对象,采用大肠杆菌法和滤纸法从中分离纯化粘细菌,将形态鉴定与16S rRNA基因测序分析相结合,对分离到的纯培养物进行分类鉴定,确定其分类地位。结果显示,从越南16个土样和22个腐木、树皮样品中共分离到70株粘细菌,经纯化后获得了32株。这些菌株分属于6个属,分别是粘球菌属（Myxococcus）14株、珊瑚球菌属（Corallococcus）7株、侏囊菌属（Nanncystis）6株、蜂窝囊菌属（Melittangium）3株、原囊菌属（Archangium）1株、软骨霉状菌属（Chondromyces）1株。这表明粘细菌在越南原始森林环境中分布广泛,并存在较为罕见的粘细菌类群。     

一株中度嗜盐细菌whb45的鉴定及其抗菌与抗肿瘤活性筛选

从盐场中分离鉴定中度嗜盐细菌并对其潜在的抗菌和抗肿瘤活性进行评价。从山东威海的鹿道口盐场分离嗜盐细菌,对菌株whb45进行形态学和生理生化特性研究,测定其16SrRNA序列并通过同源性比对进行系统发育分析,采用抗菌和细胞毒模型进行活性筛选。试验结果表明,菌株whb45为中度嗜盐细菌,whb45与Halobacillus trueperi在形态和生理生化特征方面最接近,16SrRNA序列相似性为99%。whb45的粗提物对多种细菌、真菌和肿瘤细胞的生长都具有较强的抑制作用,可以作为发现生物活性物质的潜在的新来源。     

四种植物内生真菌的分离及其抗肿瘤活性的筛选

从银杏、合欢、臭椿和苦楝的树皮中分离到61株内生真菌。MTT法检测显示在45.9%的菌株发酵液粗提物在200 μg/mL时对人食道癌细胞EC109的生长抑制率大于50%。其中6株内生真菌(YX5, YX17, YX36, KL1, CC1, CC5)在50 μg/mL时仍具有较高的细胞毒活性, 且活性成分主要分布在菌株的发酵液中。合欢内生真菌中的活性菌株比例最小, 在50 μg/mL时均未显示任何对EC109细胞的抑制作用。银杏中的高活性菌株比例最大, 占银杏内生真菌的15.8%。银杏分离菌株YX5的活性最为突出, 其发酵液粗提物对3种肿瘤细胞EC109, HONE1和HeLa的抑制率IC50分别是18.3 μg/mL、3.6 μg/mL和6.5 μg/mL。研究结果表明, 作为抗肿瘤药物的潜在来源银杏内生真菌值得关注。     

不同生境具有抗肿瘤活性的海洋真菌筛选

目的:为了测定海口沿海海域不同生境的海洋真菌抗肿瘤状况。方法:我们从海口西海岸沿线、南渡江入海口处以及演丰红树林三个不同生境分离到162株海洋真菌,通过MTT比色法测定海洋真菌代谢产物对黑色素瘤B16的抑制活性。结果:其中75.93%的海洋真菌代谢产物对B16细胞增殖有不同的抑制作用,来自西海岸沿线生境的真菌有77.36%具有抑制B16生长作用,来自入海口生境的真菌为77.27%,来自红树林的真菌为70.58%,并且不同生境的真菌代谢物的细胞毒性强弱也有明显的区别。结论:不同生境的真菌具有不同的抗肿瘤作用,筛选具有某种活性海洋真菌菌株时,可以选择容易产某种活性成分的目的生境。     

一株来源于海洋的抗肿瘤放线菌的分离鉴定

从福建东海海滩土样品中分离到一株海洋放线菌FIM02-523, 该菌株的发酵产物具有抗肿瘤活性。菌株FIM02-523在多数培养基上生长良好, 橙色-暗棕色, 无气生菌丝, 不产生可溶性色素。系统发育、化学分类特征、形态特征、生理生化特性等分析表明菌株FIM02-523是小单孢菌属(Micromonospora), 可能是模式菌种青铜小单孢菌(Micromonospora chalcea)的一个菌株。     

一株具有抗肿瘤活性的海洋放线菌的分离和鉴定

海洋放线菌ACMA006的发酵产物具有很强的抗肿瘤活性和较好的抑菌效果, 但对人正常细胞毒性较弱。该菌株在大多数培养基上生长良好, 产生可溶性色素;基质菌丝在培养早期出现横隔, 随后发生断裂;最适生长温度为28°C。基于16S rDNA序列的系统发育分析表明, 菌株ACMA006属于链霉菌属(Streptomyces)的成员, 与该属的合格发表种卡伍尔链霉菌华盛顿亚种(S.cavourensis subsp. washingtonensis)的16S rDNA序列相似性最高, 同源性达100%, 但在部分形态特征和理化特性上存在较大差异。初步确定ACMA006属于卡伍尔链霉菌华盛顿亚种的一个海洋变种。     

Biological properties of the phage-tail-like particles from Myxococcus coralloides D

Abstract Electron microscopy of preparations of the Myxocococcus coralloides D autolytic supernatants revealed the presence of phage-tail-like particles. The particles consisted of a core, a contractile sheath and a baseplate with fibers. The induction of the defective prophage occurred when the cultures reached the stationary phase, but the events occurring during induction did not lead to cell lysis. Particles nerver appeared during exponential growth. They were not observed when M. coralloides D grew on solid media, either. Purified samples of phage tails were able to inhibit most of the myxobacterial strains which were tested when the particles were in the extended state, but they were unable to multiply on the sensitive strains.     

婴儿双歧杆菌对小鼠肉瘤S180的抑制作用

本文主要观察婴儿双歧杆菌(Bif. 189—3)对小鼠皮下移植肉瘤180(S180)的抑制作用。结果发现,该菌无论在S180移植前或移植后经皮下注射,均能明显抑制皮下移植S180的增长,并使带瘤鼠存活期显著延长。病理检查见实验组肿瘤坏死明显,肿瘤周围有大量炎症细胞浸润。提示该菌能非特异性增强肿瘤局部的免疫反应。     

杀线虫海洋放线菌的筛选及菌株HA07011的鉴定

从海南、湛江等海洋环境样品中分离到256株放线菌,运用松材线虫筛选模型进行杀线虫活性菌株的筛选,得到23株对线虫有较高校正击倒率的放线菌。其中菌株HA07011的发酵滤液稀释10倍后对线虫校正击倒率仍达到68.9%,且具有较好的遗传稳定性。根据形态观察、生理生化特征和16S rDNA序列的对比分析,将HA07011归为链霉菌属。