氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β－珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT－PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm)对K562细胞中β－珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示：用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、48及72h后,不仅其γ－珠蛋白mRNA水平升高,其β－珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ→β珠蛋白基因的转换机制相关。     

氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素(Hm)对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示：用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、48及72h后,不仅其γ-珠蛋白mRNA水平升高,其β-珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ→β-珠蛋白基因的转换机制相关。 Abstract: The recombinant plasmid HG was constructed,in which the reporter gene encoding the enhanced green fluorescent protein (EGFP) was driven by the β-globin promoter and regulated under the HS2 element.The inductive effect of hemin on the expression of the β-globin gene and transiently transfected β-globin genes in K562 cells was analysed by FACS as well as RT-PCR method.The results showed that the level of γ and β-globin gene mRNA in K562 cells increased significantly after 24,48 and 72 hours induced with 30 μmol/LHm.And this inductive effect was sronger after 24 and 48 hours.Furthermore,the transient expression of plasmid HG in K562 cells increased significantly with hemin induction.These results indicated that the mechanism of inductive erythroid differentiation with hemin may be correlated with mechanism of γ→β-globin gene.     

去血红素细胞色素c的制备及其结构研究

在酸性条件下用硫酸银断裂马心细胞色素ｃ（以下简称ｃｙｔ．ｃ）的肽链与血红素相连的硫醚键,通过酸性丙酮抽提,巯基乙醇处理及超速离心等步骤纯化得去血红素的ｃｙｔ．ｃ（以下简称Ａｐｏ－ｃｙｔ．ｃ．）．Ａｐｏ－ｃｙｔ．ｃ与天然ｃｙｔ．ｃ相比,其酸性电泳迁移率明显降低,紫外－可见光谱在１９０￣２２０ｎｍ处吸收上升,荧光光谱的最大发射峰波长产生红移,同时ＣＤ谱中ａ螺旋的特征峰完全消失,这说明在ｃｙｔ．ｃ去血红     

触珠蛋白研究进展

触珠蛋白是一种酸性糖蛋白,属急性期反应蛋白之一,由于所含轻链类型的不同,触珠蛋白具有遗传多态性,触珠蛋白的合成和降解主要在肝脏进行,并受细胞因子、前列腺素、激素等的调节,触珠蛋白具有广泛的生物学功能,可能是一种重要的调节蛋白.     

细胞珠蛋白对肝星状细胞氧化损伤的保护作用

为揭示细胞珠蛋白对肝星状细胞氧化损伤的保护作用及相关机制,通过siRNA干扰内源性细胞珠蛋白基因,利用重组细胞珠蛋白作用于完全活化的人肝星状细胞系LX-2及大鼠原代肝星状细胞,并在LX-2细胞内过表达细胞珠蛋白,考察在过氧化氢及铁过载两种不同作用机制的氧化反应模型中细胞的增殖性及细胞内超氧化物水平。结果表明内源性细胞珠蛋白对于两种氧化反应导致的肝星状细胞损伤都具有显著性的保护作用,证明其在活化肝星状细胞内的表达上调是其应对氧化应激的保护性措施;重组细胞珠蛋白不仅能保护完全活化的LX-2细胞免受氧化应激损伤,并且能抑制未完全活化的原代肝星状细胞过度增殖以及保护其被过度损伤;重组细胞珠蛋白对细胞内的活性氧清除效果不理想,可能与其进出细胞缺乏相应的主动运输机制有关。进一步在LX-2细胞内过表达细胞珠蛋白对无论是铁过载或是过氧化氢引起的氧化反应均能发挥较好的保护性作用。为加速肝纤维化药物新靶点开发提供了理论依据。     

子宫珠蛋白的结构与功能

子宫珠蛋白(UG)是类固醇激素诱导的、进化保守的多功能蛋白,从其基因结构、蛋白质结构、分布调节、合成的机制及其功能等方面来看,UG通过其假定受体介导自分泌和旁分泌途径发挥作用,它可能属于细胞因子/趋化因子家族,关于UG结构、调节和功能的阐明将为揭示人类一般疾病、探索胚胎植入奥秘以及研究肿瘤发生机制提供新的认识.     

细胞因子受体超家族的结构保守性及生物学意义

细胞因子受体超家族是目前数量最大的受体家族,其成员在序列与空间结构上都有一定的保守性,并存在着共用链现象,说明此超家族各成员可能从同一始祖基因进化而来,研究其结构保守性,对于寻找此超家族新的成员,进行同源蛋白质结构预测,探讨其信号转导机制,都有重要意义。     

细胞凋亡的结构生物学研究进展

在多细胞生物体内,细胞会发生编程性死亡(即细胞凋亡),使得细胞数量得到精确调控。细胞凋亡调控的异常与癌症、自身免疫病、神经退行性疾病等疾病密切相关。在过去的二十年里,人们详细地研究了参与细胞凋亡调控的分子机制。该文综述了近年来利用结构生物学手段,对参与细胞凋亡调控的分子,主要是Caspase和与Caspase活性调控直接相关的蛋白功能的研究进展。     

聚乙二醇修饰重组细胞珠蛋白对小鼠急性肝损伤的保护作用

旨在探究聚乙二醇修饰重组细胞珠蛋白(PEG modified recombinant cytoglobin,PEG-rCygb)对小鼠急性肝损伤的保护作用。采用CCl4诱导KM小鼠急性肝损伤模型,尾静脉注射PEG-rCygb,收集血清及肝脏组织检测各项生化指标及组织病理学变化。结果表明,PEG-rCygb治疗组小鼠肝脏系数减小,血清中AST﹑ALT水平降低,肝组织匀浆中MDA含量减少,GSH含量增加,T-SOD、CAT活性升高。肝组织切片HE染色显示PEG-rCygb可以缓解肝细胞脂肪变性,减少炎症因子,减轻肝细胞损伤。体外细胞学实验表明rCygb经PEG修饰后对H2O2造成的肝星状细胞(HSC)氧化损伤发挥的保护作用增强。研究结果显示PEG-rCygb提高了机体对自由基的清除能力,对CCl4引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

脊椎动物球蛋白家族新成员--胞红蛋白

胞红蛋白(Cygb)是广泛存在于脊椎动物各类组织细胞中的球蛋白家族成员。Cygb为六配位体血红素单体蛋白质,能可逆结合O2、CO等气体配体,参与细胞内某些需氧酶反应。     

Intermediate Tyrosyl Radical and Amyloid Structure in Peroxide-Activated Cytoglobin

We characterized the peroxidase mechanism of recombinant rat brain cytoglobin (Cygb) challenged by hydrogen peroxide, tert-butylhydroperoxide and by cumene hydroperoxide. The peroxidase mechanism of Cygb is similar to that of myoglobin. Cygb challenged by hydrogen peroxide is converted to a Fe⁴⁺ oxoferryl π cation, which is converted to Fe⁴⁺ oxoferryl and tyrosyl radical detected by direct continuous wave-electron paramagnetic resonance and by 3,5-dibromo-4-nitrosobenzene sulfonate spin trapping. When organic peroxides are used as substrates at initial reaction times, and given an excess of peroxide present, the EPR signals of the corresponding peroxyl radicals precede those of the direct tyrosyl radical. This result is consistent with the use of peroxide as a reducing agent for the recycling of Cygb high-valence species. Furthermore, we found that the Cygb oxidation by peroxides leads to the formation of amyloid fibrils. This result suggests that Cygb possibly participates in the development of degenerative diseases; our findings also support the possible biological role of Cygb related to peroxidase activity.     

胞红蛋白研究进展

胞红蛋白(Cytoglobin,CYGB)是珠蛋白家族中的一员,在脊椎动物的器官,组织和细胞中有广泛表达。它具有一个紧密的双螺旋结构,不仅具有储存和运输氧气的功能,还参与胶原合成、酶促反应、清除细胞内活性氧、基因调控等过程。此外,胞红蛋白在体外能抑制癌细胞的生长,从而引起研究人员的高度关注。本文重点对CYGB的结构、分布、基因调控和功能、参与病理状态以及潜在的临床应用价值等方面展开综述。     

胞红蛋白在缺氧下的表达

胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)是新发现的第4种携氧球蛋白,具有典型的"three-over-three"-螺旋三明治折叠结构.CYGB体内分布广泛,主要以单倍体形式存在于成纤维细胞及神经元细胞中.CYGB在缺氧下表达明显增强并具有保护组织细胞免遭缺血损伤的作用,其机制与其蛋白结构及基因表达有关.本文综述了胞红蛋白在缺氧下的表达以及内在机理.     

胞红蛋白在调控细胞铁死亡中的作用

近年来,以细胞内氧化还原平衡失调为重要诱因,具有铁依赖性和以脂质过氧化物堆积引起细胞膜损伤为主要特征的细胞铁死亡备受关注。越来越多的研究表明,细胞铁死亡在疾病发生及防治方面具有重要作用。胞红蛋白(cytoglobin,CYGB),又名星状细胞激活蛋白 (stellate cell activating protein, STAP),是一种珠蛋白,不仅能可逆地结合氧分子,储存和传递氧气,同时在其氨基酸序列中含2个半胱氨酸残基,可形成分子内部的二硫键,在感受细胞内氧化还原状态变动时,改变自身空间结构,引起生物活性及下游信号通路的变化。同时,CYGB还具有一氧化氮双加氧酶活性,能够清除过量一氧化氮与活性氧物质超氧阴离子反应生成的有毒ONOO^-,防止其对线粒体功能的破坏。而细胞内活氧物质和线粒体是影响细胞铁死亡的重要因素。因此,本综述主要围绕CYGB清除活性氧物质及调控一氧化氮代谢等的作用机制,并结合我们最近有关CYGB通过p53-YAP1轴调控细胞内脂质代谢的研究进行阐述,提出CYGB通过参与细胞铁死亡调控来行使功能,为心血管功能,肝纤维化及癌症发生等相关疾病的预防和治疗提供重要的理论依据。     

Effects of Filipin on the Structure and Biological Activity of Enveloped Viruses

The interaction of the polyene antibiotic filipin with membrane-bound cholesterol in vesicular stomatitis (VS), influenza, and Rauscher leukemia virions was studied. Exposure of virions to filipin resulted in a series of depressions and ridges in the envelope of VS virions, with a periodicity of 15 to 20 nm perpendicular to the long axis of the particle; similar morphological alterations were observed in negatively stained preparations, in thin-sectioned virions, and in protease-treated virions that lack surface glycoproteins. This morphological effect was specific for filipin, since the envelopes of VS virions that had been treated with another polyene antibiotic, amphotericin B, exhibited markedly different morphology. Morphological alterations induced by filipin in influenza and Rauscher leukemia virions differed from those seen in VS virions. The infectivity of filipin-treated VS virions was reduced up to 500-fold, whereas influenza virions were resistant to filipin treatment. Incorporation of filipin into the virions was demonstrated, and no release of either lipids or proteins from virions was detected after filipin treatment. A stoichiometry of approximately 1 mol of bound filipin per mol of cholesterol was found in both intact and protease-treated VS virions. The equilibrium dissociation constant for filipin-cholesterol interaction was approximately 74-fold larger in intact than in protease-treated VS virions. The initial rate of association of filipin with cholesterol in intact virions was slower than that in protease-treated particles. The fluidity of lipids in VS viral membranes, as probed by a stearic acid derivative spin label, was markedly reduced when either intact or protease-treated virions were treated with filipin.     

胞红蛋白酵母双杂交载体的构建与表达

胞红蛋白（CGB）是一种新发现的分布于胞浆与胞核的携氧珠蛋白。为探讨CGB在体内的相互作用蛋白,从而促进对其分子调控网络的认识,根据CGB基因的开放阅读框架设计并合成PCR引物,从人胎肝cDNA文库中扩增得到该基因编码区.测序分析正确后将其定向克隆到酵母表达载体pGBKT7中,构建获得CGB的酵母表达载体pGBKT7-CGB,并在酵母菌AH109中表达。提取酵母总蛋白并利用标签蛋白（myc）的抗体进行免疫印迹检测。结果表明所构建的CGB酵母表达载体能够在酵母中高效表达,可用于后续的酵母双杂交文库的筛选工作。