PFOS对东亚三角涡虫HSP70蛋白及基因表达的影响

全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)是一种持续的有机污染物,是全氟化合物(Perfluorinated chemicals,PFCs)在环境中的代表性物质。以低等三胚层动物涡虫作为试验材料,使用Western blot及RT-PCR技术探究PFOS对涡虫HSP70蛋白及基因表达的影响。结果表明,PFOS短时间处理能诱导涡虫hsp70 mRNA表达量升高,涡虫再生10 d mRNA表达受到抑制,HSP70蛋白表达量在涡虫再生4 d和7 d时随PFOS浓度显著上升,其它组变化不明显,PFOS对mRNA和蛋白表达量趋势影响不一致,可能少量PFOS能抑制HSP70蛋白翻译,药物在涡虫体内积累量增加,蛋白高表达抵御毒性伤害。     

环境中无机盐对三角涡虫再生的影响

用解剖镜观察,以眼点的出现为完成再生的标志,在恒温10℃条件下研究了钠、钾、钙离子对日本三角涡虫头部再生速度的影响。结果表明：跟对照组相比,低浓度氯化钠对涡虫再生速度影响不大,高浓度氯化钠引起涡虫解体;氯化钾对再生涡虫的毒性较大;0.1％和0．3％氯化钙可以提高涡虫的再生速度。由于Ca^2＋可以活化蛋白激酶和起始DNA合成,因此,培养液中适宜的Ca^2＋可以提高涡虫再生的速度。     

双酚A暴露对东亚三角涡虫急性毒性及神经酶的影响

旨在探讨双酚A (BPA)对东亚三角涡虫的急性毒性及神经系统相关酶活性的影响。采用不同浓度的BPA处理涡虫24 h、48 h、72 h,求出半致死浓度,以此为基础,采用不同浓度的BPA处理涡虫24 h、72 h、144 h,测定AchE、ChAT及Na+~K+^-ATP酶活性。BPA对三角涡虫的24 h、48 h、72 h,LC50分别为12.18 mg/L、8.49 mg/L、6.43 mg/L。ChE、ChAT、Na+~K+^-ATP酶活性对BPA反应敏感,具有较好的规律性。24 h处理组,AChE酶活力随BPA浓度的升高而升高,72 h和144 h处理组则呈现先上升后下降的趋势,除0.643 mgBPA/L以外,其它处理组均表现出了时间-效应关系;在BPA胁迫下,ChAT酶活力均呈现降低趋势,在BPA浓度为0.643 mg/L、1.286 mg/L时,表现出了时间-效应关系;24 h、72 h处理组Na+~K+^-ATP酶活力随BPA浓度升高呈现先上升后下降的趋势,144 h处理组则呈现下降趋势,Na+~K+^-ATP酶活力随BPA胁迫时间的延长呈现先升高后下降的趋势。BPA对涡虫具有较强的生态毒性,AchE、ChAT、Na+~K+^-ATP酶活性可与其他敏感指标一起作为水体BPA污染的早期监测指标。     

草甘膦、乙草胺对日本三角涡虫摄食与再生的影响

研究了草甘膦和乙草胺对日本三角涡虫的急性毒性及其摄食与再生的影响.结果表明,草甘膦和乙草胺对日本三角涡虫的24和48 h LC₅₀分别为41.78和12.22 mg·L^-1、35.48和8.41 mg·L^-1.≥6.20 mg·L^-1的草甘膦和≥1.00 mg·L^-1的乙草胺对涡虫的再生影响显著（P<0.05）,且其影响均随处理时间的延长而逐渐减小;术后84 h,除1.40和2.00 mg·L^-1乙草胺处理外,其余浓度乙草胺和各浓度草甘膦处理的涡虫均完成再生.表明乙草胺对日本三角涡虫的急性毒性及其摄食与再生的影响均大于草甘膦.表明日本三角涡虫可作为监测草甘膦和乙草胺污染的指示生物.     

东亚三角头涡虫的全年采集与培养

东亚三角头涡虫(Dugesia japonica)隶属涡虫纲(Class Turbellaria)三肠门(Order Tricladida)、三角头涡虫科(Dugesiidae),主要分布于东亚各国,是教学、科研的重要材料,但由于生态环境不断遭到破坏,许多产地的涡虫濒临绝灭,采集越来越难。1 采集笔者常在重庆缙云山的溪水及北碚城边附近的小溪沟采得东亚三角头涡虫。首先应准确的找到涡虫可能存在的流水或积水小坑环境,据观察有涡虫的环境,往往同时也有蜉     

东亚三角涡虫Djtraf3基因的时空表达模式

肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)作为TRAF家族的成员之一,通过介导TLRs信号通路,参与动物的免疫反应。通过构建东亚三角涡虫Djtraf3的cDNA文库获得Djtraf3基因并分析基因结构。结果发现,该最大开放阅读框为564bp,编码的蛋白质含187个氨基酸,含有1个TRAF结构域。进化分析表明,DjTRAF3和果蝇的TRAF3聚群,位于进化树的基部;整体原位杂交结果显示,在涡虫成体及不同再生阶段,Djtraf3在整个肠部表达。这些结果为进一步探究其功能提供了依据和方向。     

鲁中山区东亚三角头涡虫有性生殖过程研究初报

于2005年3-5月、9～11月对生活于鲁中山区的东亚三角头涡虫（Dugesia japonica）的有性生殖过程进行了研究,发现鲁中山区东亚三角头涡虫1年只有1次有性生殖过程。卵囊产出的高峰在4月,卵囊孵化与种群密度最高峰在5月,其有性生殖过程与温度、食物、虫体大小密切相关。经实验观察1个卵囊最多能孵出涡虫幼体10条,最少3条。     

东亚三角涡虫RhoA基因的原核表达及组织定位

为了表达东亚三角涡虫RhoA蛋白,采用温控表达载体pBV220-IL1,构建了原核表达重组质粒pBV220-IL1-RhoA,转化到E.coli DH5α中,利用42℃热激诱导表达,并进行了分离纯化和Western杂交鉴定,利用荧光免疫组织化学技术检测了在涡虫体内的分布。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白约为18 kDa,Western杂交结果显示是目的蛋白,荧光免疫组织化学结果表明RhoA蛋白在东亚三角涡虫神经系统处表达。     

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。     

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析, 发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响, 文章构建了原核表达重组质粒pET-28a- Djtry, 转化到E.coli BL21中, 利用IPTG诱导表达, 对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting鉴定, 获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品, 胰蛋白酶特异性底物BAEE, 检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体, 分子量约为26 kDa, Western blotting结果显示为目的蛋白, 对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现, 突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质, 但是催化活性相对较弱。     

Effects of Calpain on Antioxidant Enzyme Activities

The activities of superoxide dismutase, catalase and glutathione reductase were not affected by in vitro incubation with the intracellular proteinase calpain, suggesting that these enzymes are not in vivo substrates of calpain. In contrast, the activity of another important antioxidant enzyme, glutathione peroxidase, is stimulated in vitro by calpain. This may explain the correlation between elevations in glutathione peroxidase activity and calpain activity which occur in aging, exercised and dystrophic muscle. Calpain treatment in vitro caused a large decrease in the activity of carnosine synthetase which is involved in the synthesis of the putative antioxidant carnosine. This may be the reason for the in vivo correlation between elevated calpain and diminished carnosine levels in aging, hypertensive, denervated and dystrophic muscles.     

Effects of Cadmium on Antioxidant Enzyme Activities in Sugar Cane

Sugar cane (Saccharum officinarum L. cv. Copersucar SP80-3280) seedlings were grown in nutrient solution with varying concentrations (0, 2 and 5 mM) of cadmium chloride for 96 h. Leaves were analysed for catalase (CAT), glutathione reductase (GR) and superoxide dismutase (SOD) activities. Although a clear effect of CdCl₂ on plant growth was observed, the activity of SOD was not altered significantly. However, the CAT activity decreased as the concentration of CdCl₂ increased. GR exhibits a significant increase in activity at 2 and 5 mM CdCl₂. CAT and SOD isoenzymes were further characterised by analysis in non-denaturing PAGE. Activity staining for SOD revealed up to seven isoenzymes in untreated control and 2 mM CdCl₂ treated plants, corresponding to Cu/Zn-SOD isoenzymes. At 5 mM CdCl₂, only six Cu/Zn-SOD isoenzymes were observed. No Fe-SOD and Mn-SOD isoenzymes were detected. For CAT, one band of activity was observed.     

淡水三角涡虫不同发育时期三种抗氧化酶的研究

以鲁中山地区的淡水三角涡虫卵囊、幼虫、成虫为材料,研究了涡虫在不同发育过程中3种抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化.结果 表明,SOD在发育初期活性增长迅速,在幼虫孵出后活性略减,最后趋于稳定;CAT活性在卵囊阶段活性较低,从幼虫孵出后活性增长很快,并在成体中保持较高的活性;GSH-Px活性在卵囊时期活性较高,从幼虫孵出后活性降低,在成体中活性较低.     

15种直饮水对涡虫再生的影响

通过切割57条日本三角涡虫(Dugesia japonica),每条切割为四段,观察和比较了228个涡虫体段眼、头、尾和咽在15种市售直饮水中的再生过程。结果显示:(1)切割后的涡虫体段在矿泉水中,无解体现象的比例为66.6%;而在纯净水中为12.5%。(2)解体体段占涡虫体段总数的19.74%。(3)头部解体占解体总数的55.55%。头部解体大于50%的现象分布在纯净水,其中3种纯净水中的头段全部解体。本实验结果提示,长期饮用能使涡虫正常再生的市售矿泉水比较适宜。     

恒定磁场对日本三角涡虫无性横裂生殖及2种抗氧化酶活力的影响

目的:探讨恒定磁场对日本三角涡虫(Dugesia japonica)无性横裂生殖及抗氧化酶活力的影响.方法:应用种群累积培养法,观察了恒定磁场对日本三角涡虫的种群增长、无性横裂生殖及涡虫体内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力的影响.结果:场强大小在200mT-500mT范围的恒定磁场能促进涡虫的无性横裂生殖,但恒定磁场显著抑制涡虫的SOD及CAT活力.结论:日本三角涡虫对恒定磁场的生理学响应较为敏感,可作为生物磁学研究适宜的实验材料.     

低氧胁迫对黄瓜幼苗根系无氧呼吸酶和抗氧化酶活性的影响

对两个抗低氧胁迫能力不同的黄瓜品种进行营养液水培,研究了低氧胁迫下植株根系中无氧呼吸酶和抗氧化酶活性的变化。结果表明,低氧胁迫下,黄瓜植株生长受到抑制,鲜重和干重显著降低,根系中蛋白质含量降低,而根系中乳酸脱氢酶（LDH）、丙酮酸脱羧酶（PDC）、乙醇脱氢酶（ADH）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性在低氧胁迫下显著提高,且提高的幅度与品种抗低氧胁迫能力的强弱有关,与“中农8号”相比,抗低氧性胁迫能力较强的“绿霸春四号”根系内LDH活性增幅较小,而ADH、PDC、SOD、POD和CAT活性增幅较大。说明较高的ADH、PDC、SOD、POD、CAT活性和较低的LDH活性有利于增强幼苗植株抗低氧胁迫的能力。     

NaCl 胁迫对甘草生长及抗氧化酶活性的影响

目的:通过分析不同浓度NaCl胁迫下甘草生长和抗氧化酶活性的变化探讨甘草对盐分胁迫的适应性机理;方法:采用不同浓度的NaCl溶液(配成Hoagland液)处理盆栽一年生甘草,分别于35d、70d和105d取样,测定甘草株高、地上部分鲜、干重、根鲜、干重及甘草叶片SOD、POD、CAT活性,分析各生长指标与抗氧化酶活性的相关性;结果:NaCl胁迫70d和105d,0.6%和0.9%处理组的株高、地上部分鲜、干重及根鲜、干重均显著低于CK,SOD、POD及CAT活性均显著高于CK,经相关性分析得知,SOD、POD及CAT活性与各生长指标均负相关,其中POD活性与各生长指标极显著负相关;结论:甘草对NaCl胁迫的响应有胁迫时间和浓度的依赖性,在遭遇胁迫时,通过改变自身的生长和提高抗氧化酶活性,来提高机体的抗盐能力。     

N,N-二甲基乙酰胺对东亚三角涡虫(Dugesia japonica)毒性效应的研究

N,N-二甲基乙酰胺(DMA)的大量应用导致其越来越多的进入环境.然而水环境中的DMA对水生生物的毒性尚不明确.通过急毒性、再生、抗氧化酶活力及彗星电泳试验.探讨DMA对东亚三角涡虫(Dugesia japonica)的毒性作用.研究发现,DMA处理涡虫24、48、72、96 h的半致死浓度(LC50)分别为27.7、18.4、10.7、6.7 g/L;浓度大于0.9 g/L的DMA会损伤再生组织,延缓涡虫完成再生;处理48 h后,DMA浓度为0～5 g/L时,涡虫体内过氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力呈上升趋势,大于5 g/L时酶活力开始下降,而过氧化氢酶(CAT)活力在DMA浓度小于1 g/L时呈下降趋势,大于1 g/L后呈现上升趋势;DMA对涡虫DNA的损伤作用不明显,浓度达到10 g/L后才表现出遗传毒性(P<0.05).结果表明DMA对涡虫有明显的生物毒性,同时涡虫对DMA毒性的反应灵敏,可用于监测水环境DMA污染.     

短波紫外线对日本三角涡虫的损伤及六种酶活力的影响

用短波紫外线(UV-C)照射处理日本三角涡虫,观察了涡虫的损伤状况,探讨了紫外线辐射对涡虫乳酸脱氢酶(LDH)、Na -K -ATP酶、Ca2 -Mg2 -ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧比物酶(GSH-PX)活力的影响。结果表明,短波紫外线辐射对涡虫的损伤明显,照射的时间越长,涡虫在照射后出现死亡解体现象的时间就越短。随着紫外线照射时间的延长,LDH活力呈下降趋势;Na -K -ATP酶活力呈上升趋势而Ca2 -Mg2 -ATP酶活力呈下降趋势;SOD活力有明显的增加;CAT活力有增加趋势;GSH-PX活力波动较大,但总体仍呈增加趋势。不论是从紫外线对日本三角涡虫的损伤情况、还是对其六种酶活力的影响来看,日本三角涡虫是一种对紫外线辐射非常敏感的动物,在检测紫外线辐射及筛选抗紫外线辐射防护剂等方面具有潜在价值和应用前景。