乙醇激活对小鼠透明带糖蛋白的生化修饰

为研究乙醇激活对小鼠卵透明带的修饰,用SDS-PAGE和HPLC分析未受精卵和乙醇激活卵的透明带糖蛋白。SDS-PAGE结果显示,未受精卵和乙醇激活卵的透明带糖蛋白成分的电泳带型相似。只是在还原电泳时,乙醇激活卵透明带样品中分离出一条约20kD的特异条带。未受精卵和乙醇激活卵的ZP3成分没有明显差异。HPLC结果显示：乙醇激活卵透明带有3个O-连单糖的洗脱峰,与未受精卵透明带的3个O-连单糖洗脱峰很相似;但是,乙醇激活卵透明带有另外两个O-连寡糖洗脱峰,RT值分别为12.09和8.89,未受精卵样品只有一个RT值为9.14的洗脱峰,他们代表一些O-连寡糖或寡糖混合物。可见,乙醇激活对ZP3多肽链和O-连单糖没有明显的影响。主要的修饰作用在O-连寡糖上。     

大鼠脑线粒体体外蛋白翻译体系的建立及蛋白产物的鉴定

目的 :建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定。方法 :分离大鼠脑组织线粒体 ,用3 H 亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件 ,3 5S 蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行分子量鉴定。结果 :分离的线粒体氧化磷酸化偶联程度高 ,呼吸控制率(RCR)在 3.5～ 5 .5之间 ;体外3 H 亮氨酸的掺入活性在 6 0min内近似线性增长 ,而后维持在一相对稳定水平 ;3 H 亮氨酸的掺入活性随线粒体蛋白浓度而增加 ,而单位线粒体蛋白的掺入活性在 1mg/ml时最高 ;3 5S 蛋氨酸掺入SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳后可观察到清晰的 8条自显影带 ,分子量分别为 (单位Kda) 86、6 6、5 6、43、33、2 9、2 5、18。结论 :用此方法建立的脑线粒体离体翻译反应体系具有高活性和翻译忠实性等特点 ,是研究脑mtDNA在翻译水平的表达及调控的有效方法     

六种疫霉菌体可溶性蛋白质和酯酶的聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究

本文对槐生疫霉、掘氏疫霉、樟疫霉、烟草疫霉、棕榈疫霉及辣椒疫霉等６种疫霉８１株菌菌体可溶性蛋白质和酯酶进行了聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究。结果指出,种间蛋白质图谱差异明显,种内菌株间基本一致。就酯酶图谱来说,种内菌株间存在一定差异,但种间差异更为显著。因此,本试验进一步支持槐生疫霉新种的建立。同时表明,菌体可溶性蛋白质电泳图谱在疫霉种的鉴定和分类上具有重要意义,而酯酶电泳图谱在一定程度上也有助于疫霉     

SDS电泳技术的实验考虑及最新进展

水平薄层SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是测定分子量的好方法。本文简述了方法的原理,技术的实验考虑和最新进展。提供了制胶的方法。指出了配制SDS电泳样品的关键。同时介绍了新的银染色方法和不使用缓冲液和滤纸桥,而使用缓冲液凝胶条作电极的最新进展。     

鬼针草属六种植物的同工酶电泳实验研究

目的:建立鬼针草6个品种过氧化物酶同工酶(POD)电泳指纹图谱,探讨鬼针草种内变异规律.方法:聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.结果:鬼针草6个品种过氧化物酶同工酶PAGE指纹图谱差异显著.结论:聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳图谱可用于鉴别鬼针草6个种质.     

基于电泳温度提升建立大鼠肝快速透明化模型

目的:探索一种基于CLARITY技术的快速肝组织透明化手段,为该技术在肝脏上的应用提供研究基础。方法:水凝胶灌注大鼠,取出肝脏待水凝胶凝固后切为1mm薄片。切片随机分为两组,对照组采用常规被动脂质清除法处理,实验组置于特制电泳装置中,在外加电场条件下洗涤脂质,通过提高电泳温度并量化组织透明度,探索最优肝透明化条件。结果:实验组在12V电压下37℃电泳48h时肝切片相对透明度达到最高并保持至96h,随后相对透明度开始下降,而在48h电泳清除脂质后提高温度继续电泳48h,肝组织切片相对透明度可进一步提高且对照组脂质清除速率明显低于实验组。结论:在12V电压下肝组织切片37℃电泳48h再辅以52℃电泳48h可以实现较快速的脂质清除。     

大熊猫尸体组织LDH同工酶盘电泳观察

大熊猫是冰川时期残存至今的古老、稀有的珍贵动物,有“活化石”之称。对大熊猫的研究除野外调查(王朗自然保护区大熊猫调查组,1974)、形态解剖(张鹤宇等,1959;冯文和等,1984)、人工饲养繁殖(北京动物园,1974;冯文和等,1983;1984)等外,尚有生化技术和免疫学等研究方法(Sarich,1973;潘文石等,1982;罗昌容等,1984)。     

疫霉蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

对北京,河北、青海、山东、湖北、广东等地不周寄主上收集的,属于 Phytophthoracapsici,P．Colocasiae,P．Heveac,P．Infestans, P．Melonis P．Nicotianac var. nicotianae 和 P．Nicotianae var. parasitica 7个种和变种的17株菌的蛋白质,进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析和比较,经多批次试验,7个种和变种各自恒定地呈现典型的蚤白质图谱,显示出种间的差异。其中 P. infestans 占11株,它们虽采自不同地区和寄主,又分属5个生理小种,经多次电泳,电泳图谱基本相同,但不同菌株存在一些差异。同一株菌,培养条件对电泳图谱影响不大,不论是培养在含苹果酸的培养基上,还是培养在延胡索酸培养基上,电泳图谱基本一致,只是电泳材料必须新鲜。     

疫毒蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

对北京、河北、青海、山东、湖北、广东等地不同寄主上收集的,属于Phytophthora capsici, P. colocasiae, P. heveae, P. infestans, P. melonis P. nicotianae var. nicotianae和P.nicotianae var.parasitica 7个种和变种的17株菌的蛋白质,进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析和比较,经多批次试验,7个种和变种各自恒定地呈现典型的蛋白质图谱,显示出种间的差异。其中P.infestans占11株,它们虽采自不同地区和寄主,又分属5个生理小种,经多次电泳,电泳图谱基本相同,但不同菌株存在一些差异。同一株菌,培养条件对电泳图谱影响不大,不论是培养在含苹果酸盼培养基上,还是培养在延胡索酸培养基上,电泳图谱基本一致,只是电泳材料必须新鲜。     

山野菜过氧化物酶(pod)同工酶的测定

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法,对东北五种常见食用山野菜不同器官pod同工酶进行了测定分析,结果表明:五种山野菜根部pod同工酶活性较强.为山野菜的进一步开发利用提供相关参考依据.     

一步法电泳分析肌联蛋白亚型和肌球蛋白重链

目的为研究超大分子量肌小节蛋白肌联蛋白(titin)的生理病理功能,在一次电泳过程中同时分离titin各亚型和中分子量肌小节蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)。方法使用16cm×18cm垂直电泳系统,在电泳板下1/3灌注10g/L SDS-PAGE胶,上2/3灌注60g/L SDS-琼脂糖(SDS-VAGE)胶。低温8℃下持续电泳5h,在电泳板上层以SDS-VAGE胶电泳分离titin亚型,下层以SDS-PAGE胶电泳分离MHC。电泳后VAGE胶使用银染法标记titin各亚型,PAGE胶使用考马斯亮蓝染色法标记MHC。结果 titin各亚型得到有效的分离,目标蛋白条带显示清晰,与其分子量大小一一对应,分离效果明确。结论一步法垂直电泳系统可应用于超大分子量蛋白的电泳,同时可分离多个分子量差距大的蛋白,提高蛋白电泳实验效率。     

Electrophoresis in the presence of Coomassie brilliant blue R-250 stains polyacrylamide gels during protein fractionation

A method of staining polyacrylamide gels in which the dye is electrophoresed together with the sample is proposed. The method cuts short and simplifies the conventional electrophoresis procedure by eliminating the separate poststaining step. In the gels run in the presence of sodium dodecyl sulfate, the method produces protein staining patterns which are quantitatively identical to the ones obtained by conventional staining procedure. Additional advantages of the method are easy control over the degree of staining and homogenous staining independent of the gel thickness and concentration of the dye.     

应激心肌细胞蛋白质组双向凝胶电泳分析

采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助的图像分析方法 ,对去甲肾上腺素诱导的应激心肌细胞与正常心肌细胞蛋白质进行分离和比较分析 .正常心肌细胞可分离 12 32± 5 6个蛋白点 ,蛋白点匹配率为 83 3%± 1 0 %.有 11种蛋白质在NE应激后发生了明显和稳定的质和量的改变 (P <0 0 5 ) ,其中 6种 (Mr pI :4 9 7kD 7 8,38 3kD 5 9,37 1kD 6 6 ,2 9 3kD 7 4 ,18 7kD 6 1,18 5kD 7 7)在应激后表达降低 ,4种 (Mr pI:4 7 6kD 5 5 ,31 9kD 4 4 ,2 6 6kD 4 6 ,33 2kD 8 1)在应激后表达增高 ,1种 (Mr pI:19 4kD 6 9)只在应激后发生表达 .这些差异表达的蛋白质可能参与了心血管应激反应乃至应激损伤发生的过程 .     

Molecular weights of subunits of acetyl CoA carboxylase in rat liver cytoplasm

Monomeric [14C] methyl avidin was shown to bind to sodium dodecyl sulfate-denatured biotinyl proteins and remain bound through polyacrylamide gel electrophoresis which allowed their detection by fluorography. This method was used to show that purified rat liver acetyl CoA carboxylase contained two high molecular weight forms of the enzyme (MR = 241,000 and 252,000) while rapidly prepared, crude rat liver cytoplasm contained two larger molecular weight (MR = 257,000 and 270,000) forms. Thus, the enzyme had undergone substantial proteolysis during purification. The crude enzyme preparation also contained a smaller biotinyl protein (MR = 141,000) which is likely a proteolytic product of the larger forms of acetyl CoA carboxylase.     

SDS-PAGE分析肝癌细胞和正常肝细胞膜蛋白

目的:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法获得肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株L-02蛋白质表达谱,期待找到与肝癌细胞相关的差异蛋白。方法:体外培养肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L-02,分离提取细胞膜蛋白,用SDS-PAGE分析细胞膜蛋白。结果:2种细胞膜蛋白的疏水相和亲水相蛋白区带位置基本相同,但肝癌细胞株HepG2膜蛋白在相对分子质量66×103处有较清晰的异常蛋白区带。结论:肝癌细胞HepG2除了具有与正常肝细胞相同的组成物质外,还有自己独特的蛋白质表达谱,这一实验可为癌症的研究提供一定的参考。     

枸杞花药蛋白质组双向电泳体系的建立及应用

采用改良TCA丙酮沉淀结合Tris-HCl法提取枸杞花药蛋白质,对蛋白质裂解液成分、IPG胶条的pH范围、上样量及染色方法进行了探索.结果表明:(1)采用17 cm胶条、400 μg的上样量、含有2 mol/L硫脲的裂解液,硝酸银染色,可得到重复性好、质量高的枸杞花药蛋白2-DE图谱,枸杞花药蛋白主要集中在pH 4～7范围.(2)采用该体系分析了‘宁杞1号’和‘宁杞5号’四分体时期花药蛋白,并利用PDQuest 8.0软件在pH 4～7的2DE图谱上检测到500多个蛋白点,其中差异表达量大于2倍的蛋白有25个.     

一种分析叶绿体类囊体膜色素蛋白复合物的蓝绿温和胶电泳系统

采用蓝绿温和胶电泳系统可以非常有效地分离叶绿体蛋白质复合物,包括PSⅠ, PSⅡ, ATP合酶,细胞色素b₆f复合物,捕光色素复合物和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶.还结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的50多种蛋白质分开,利用免疫印迹对蛋白质复合物进行了初步鉴定,同时还应用蓝色温和胶电泳分析基质、基粒类囊体复合物的组成.     

Radiometric assays of N-acetylglucosaminylphosphotransferase and alpha-N-acetylglucosaminyl phosphodiesterase with substrates labeled in the glucosamine moiety

The assay of fibroblast and leukocyte-N-acetylglucosaminylphosphotransferase with alpha-methylmannoside acceptor and commercially available UDP-[3H or 14C]N-acetylglucosamine donor was modified to yield low background and consequently high sensitivity and reliability comparable to those obtained with the synthetically made [beta-32P]UDP-N-acetylglucosamine donor. This was achieved by an additional elution step that removed free [3H or 14C]N-acetylglucosamine which appeared to be the breakdown product responsible for the high background. In addition, the [3H or 14C]N-acetylglucosamine-1-phospho-6-alpha-methylmannoside product of the transfer reaction was then isolated and, following desalting, could serve as a substrate for the assay of alpha-N-acetylglucosaminyl phosphodiesterase. Cell preparations of patients with I-cell disease and pseudo-Hurler polydystrophy demonstrated severe to moderate deficiency of transferase activity and normal phosphodiesterase activity toward the respective substrates labeled with 3H or 14C in the glucosamine moiety.     

一种改进的蛋白质超薄凝胶电泳方法

介绍了一种将聚丙烯酰胺凝胶固定在电泳夹板上的蛋白质电泳方法.通过此方法蛋白质电泳可以在0.4 mm厚的聚丙烯酰胺凝胶上进行.实验证明,经此方法处理的玻板结合凝胶非常牢固,在电泳后的所有处理步骤中都不会发生凝胶脱落现象.     

Functional interaction of plant ribosomes with animal microsomal membranes.

Translation of mRNA for the light chain of murine immunoglobulin in a wheat germ cell-free system in the presence of stripped microsomal membranes from canine pancreas resulted in co-translational proteolytic conversion of the precursor of the light chain, reducing it to the size of the authentic light chain of immunoglobulin, and in co-translational segregation of the processed chains in a proteolysis resistant space of the heterologous microsomal vesicles.