粉防已碱与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

粉防已碱Tet是一种新的钙调蛋白(CaM)拮抗剂,它抑制CaM活化的Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c。利用丹磺酰钙调蛋白(D—CaM)可方便地鉴测Tet与CaM的相互作用,直接证明了在CaM与Tet之间生成复合物CaM—Tet 我们制备的D—CaM,每个蛋白分子含1.3个丹磺酰基团,活化红细胞膜Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c的生物活性与天然CaM基本相同。 当Ca~(2 )与D—CaM结合时,丹磺酰基团环境疏水性增加,该荧光团产生较高的量子产率(增加1.6倍),最大发射兰移(从512移兰至495nm)。存在Ca~(2 )时,Tet使D—CaM的荧光强度进一步增加,谱线继续兰移,表明Ca~(2 )及Tet诱导蛋白构象变化,改变了丹磺酰基团的微环境。 荧光滴定实验证明CaM与Tet结合的解离常数为1.8μM,两者的结合是绝对依赖Ca~(2 )的。 药物Tet与CaM的结合可增强结合在CaM上的荧光探剂NPN的荧光,提示CaM不同疏水结合位之间存在变构相互作用。     

硒与红细胞血影收缩蛋白(Spectrin)作用导致构象变化

从人红细胞膜提取血影收缩蛋白(Spectrin),研究不同浓度Na_2SeO_3与其作用后的构象变化.用N—[3—芘]—马来酰胺(N-[3-P]M)作荧光探针标记Spectrin,经SDS处理后,其荧光强度随硒的浓度增加而逐步降低.但未经SDS处理的样品,加入0.2—1.0ppm的Na_2SeO_3后反而使荧光强度有所增加.Spectrin经硒作用与未经作用相比较在色氨酸内源荧光、丹磺酰氯(DNS-Cl)标记后(DNS-Spectrin)的荧光光谱以及色氨酸残基与DNS基团间的能量转移实验结果均有明显的差别.这反映Spectrin的巯基经与硒作用后会导致构象的变化.     

稀土荧光探针在生物大分子研究中的应用

钙(Ⅱ)、镁(Ⅱ)离子是生物体内最重要的闭壳层无机阳离子。引入具有适当光性质的、与钙(Ⅱ)等离子成键性质相近的铽(Ⅲ)或铕(Ⅲ),利用荧光光谱技术,是研究一些与钙(Ⅱ)有关的生物大分子在水溶液中构象的一条有效途径。本文综述了稀土荧光探针技术的研究进展。     

光系统Ⅱ反应中心D_1-D_2-Cyt b_(559)的光破坏作用研究

从高等植物叶绿体中分离得到的光系统Ⅱ(PSⅡ)反应中心D_1-D_2-Cytb(559)复合物很不稳定,极易受到光照的破坏。光照导致D_1-D_2-Cytb_(559)在红区(Qy带)的吸收光谱发生很大的变化,在最初光照45秒时间内,吸光度值升高,继续光照则吸光度值下降,而且680nm处的下降速度最大,吸收峰发生兰移,光照也导致荧光强度增大,发射峰兰移。所有这些结果表明,光破坏至少存在两个不同的过程,而且主要受到破坏的是原初电子供体P680。     

盐酸己烷基双胍对肌酸激酶的活力及构象的影响

测定了盐酸己烷基双胍(C_6H_(13)C_2N_5H_(?)HCl;记为HBGC)对肌酸激酶(Creatine Kinase;记为CK)的活力的影响;同时利用荧光光谱,紫外差光谱.付里叶红外光谱等手段测定了HBGC对CK构象的影响,结果表明.HBGC为0.07mol时就使CK完全失活、而且在高浓度的HBGC中变性后的CK.稀释时即可完全复活;CK的活力丧失明显先于构象的变化,与溴化+烷基三甲铵不同,HBGC可以破坏CK的二级结构,使之完全无序化.     

3-磷酸甘油醛脱氢酶的胍变性——全位与半位修饰酶的比较

酵母3-磷酸甘油醛脱氢酶在盐酸胍溶液中内源荧光及NAD荧光衍生物的410nm特征荧光发射光谱的变化结果提示,全位及半位修饰羧甲基酶活性部位与NAD共价连接的荧光衍生物的形成,明显受到盐酸胍的干扰,并且前者比后者更为显著.全位及半位修饰光照酶的特征荧光在低胍浓度下较内源荧光降低更为显著,同时伴有最大发射峰先红移后兰移的现象.NAD荧光衍生物的特征荧光在胍溶液中减弱的动力学过程分为快相和慢相,快相一级动力学常数比慢相的大两个数量级,全位及半位修饰酶的特征荧光的减弱快慢相速度常数分别属于同一个数量级.以上结果提示:酶活性部位的构象较整个分子来说更易被变性剂扰乱,柔性强于整个分子;NAD荧光衍生物的形成需要活性部位具有正确的空间几何结构.     

酸枣仁皂甙A与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

文中报导了本实验室最近发现的一种新型钙调蛋白(CaM)天然拮抗剂——酸枣仁皂甙A,它能显著地抑制CaM活化PDE的活力.为研究它与CaM间的相互作用,本实验还制备了与天然CaM具有相同激活PDE能力的丹磺酰钙调蛋白(D-CaM).D-CaM的荧光光谱研究表明,酸枣仁甙A的加入诱导CaM分子的疏水位点更加暴露,从而增强丹磺酰基团的荧光发射量子产率.桔抗剂与CaM间的结合是绝对依赖Ca~(2 )的.荧光滴定的结果证明此结合的解离常数为2.8μM.酸枣仁皂甙A能进一步加强三氟啦嗪(TFP)所诱导的D-CaM荧光增强.这结果暗示,它不与TFP竞l争CaM上相同的结合位点.     

丹磺酰肽的荧光定量分析法研究

丹磺酰氯和肽反应,得丹磺酰肽(DNS-肽),它具有很强的荧光,对酸水解十分稳定,目前广泛地应用于肽和蛋白质的N-末端氨基酸分析,也用于组织中氨基酸含量的超微量定量分析.近几年,将此法试用于脑脊液和脑组织中小肽含量的测定,不但灵敏度高,荧光强度稳定,而且线性关系良好,重复性也很好.现将我们试用结果介绍如后.     

0．23T稳恒磁场对不同温度离体过氧化氢酶的磁效应研究

研究了 0 .2 3T稳恒磁场对不同温度下的离体牛肝过氧化氢酶 (CAT)构象及活力的影响 ,并从分子水平讨论了磁场对不同温度的过氧化氢酶产生不同生物学效应的可能机制。将不同温度的天然酶液置于磁感应强度为0 .2 3T的磁场中分别处理一定的时间 ,处理过程中保持环境温度与酶液温度一致 ,撤离磁场后立即在相同实验条件下对其进行光谱分析及量热分析 ,并用Beers&Sizers法 (改良型 )测定酶活力。结果表明 ,磁场使 2 5℃过氧化氢酶的构象发生明显变化 ,表现为荧光偏振度增加、出现明显的差示扫描量热曲线、产生λ2 10nm～ 310nm的紫外差光谱以及λ330nm荧光发射峰的荧光强度改变 (荧光发射峰的峰位未移动 ) ,构象变化的同时酶活力增加 ;15℃过氧化氢酶的构象及活力变化规律与 2 5℃过氧化氢酶类似 ,但强度均弱于 2 5℃酶 ;而 4℃过氧化氢酶的构象及活力没有发生变化 ,表现出未受磁场处理的影响。相同实验条件下 ,磁场对不同温度的酶分子影响不同 ,随温度的增加 ,影响效应趋于显著。由于不同温度的酶分子之间的差异在于构象状态的不同 ,这表明酶分子自身的构象状态对磁场处理效果有极其重要的影响。不同温度的过氧化氢酶磁效应差异显著可能是由磁致酶构象变化的特殊机制所引起。磁场对酶分子构象的影响可能是通     

甲醇对胰蛋白酶催化活性影响的机理研究

为了探索甲醇影响胰蛋白酶催化活性的作用机理,将胰蛋白酶纯化到电泳纯的水平,用纯酶进行了催化动力学研究;测定了酶分子的紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化.试验结果表明:胰蛋白酶经7%甲醇处理时,其比活力比对照提高了17.97%.经甲醇处理后的胰蛋白酶,其动力学参数Km值及Vmax值均得到提高,且Vmax提高幅度比较大.甲醇处理后,酶的紫外吸收光谱基本没有变化,其差示光谱出现明显的正峰和负峰,而其荧光发射光谱也基本不变,只是荧光强度有所增加.实验结果证明,在7%甲醇存在下,胰蛋白酶分子构型不变,酶活性的变化是甲醇引起酶分子构象改变的结果.     

沙门菌CWDMs脂代谢检测

采用毛地黄皂苷敏感试验和菌细胞胆固醇、甘油三脂及胆碱酯酶定性与定量分析法,检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌经L 型变异后形成的细胞壁缺陷突变株(CW DM )的脂类代谢活性,了解这些CW DM 变异的性质和探讨细菌细胞壁缺陷突变与细菌演变的关系。结果表明,沙门菌CW DM s 具有显著的胆固醇和甘油三脂代谢活性、对毛地黄皂苷高度敏感并且还具有与白色念珠菌相似的胆固醇和甘油三脂的含量,但未能检出胆碱酯酶活性。CW DM s返祖菌丧失了脂类代谢酶类和胞浆膜不含胆固醇,恢复了与其亲代细菌型相似的代谢特征。提示在沙门菌天然即存在有与脂类及胆固醇代谢相关的基因,细胞壁的缺陷导致这些脂类及胆固醇代谢基因活化,以致 CW DM s 能够表达固醇和甘油三脂代谢活性和胞浆膜含有胆固醇     

沙门菌CWDMs氨基酸代谢的检测

采用氨基氨利用生长试验和谷丙转氨酶（ＧＰＴ）、谷草转酶（ＧＯＴ）、乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）、α－闳丁酸脱氢酶（α－ＨＢＤ）、γ－谷志肽酶（γ－ＧＴ）,酸性磷酸酶（ＡＣＰ）定性与定量分析法,检测伤ＣＷＤＭｓ变异的特点及其机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ在仅含蛋氨酸或脯氨     

沙门菌CWDMs乳酸脱氢酶同功酶的观察

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的ＣＷＤＭｓ及其宁代细菌型和伤寒杆菌粗糙型的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同功酶,以了解沙门菌ＣＷＤＭｓ生物氧化的特点和机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质。结果表明,伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的细菌型及伤寒杆粗糙型在聚丙烯酰胺凝胶电泳后显示出相同的４种具有不同泳动速率的ＬＤＨ同功酶,但ＣＷＤＭｓ仅显示２种ＬＤＨ。ＣＷＤＭｓ的２种ＬＤＨ同功酶与其亲代细菌型及伤寒杆     

两种蚤的幼虫形态

关于蚤类幼虫形态的研究,进展比较缓慢,我国王敦清1956年首次描述7种蚤的幼虫形态以后,由柳支英,虞以新(1957),孙昌秀(1965),叶瑞玉(1982,1986),费荣中(1986)等学者先后共描述过约29种蚤的幼虫形态。到目前为止,我国已知蚤类幼虫形态约36种,隶属6科19属。本文描述未见报道的无棘鬃额蚤Frontopsylla aspiniformis Liu etWu(1960)和青海双蚤Amphipsylla qinghaiensis Ren et Ji(1979)两种蚤山幼虫形态。     

光照对蕨类植物配子体假根向重力性的影响

对８种蕨类植物配子体假根向重力性反应的研究结果表明,除卷柏Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ ｔａｍａｒｉｓｃｉｎａ Ｓｐｒｉｎｇ配子体假根无向重力性反应并且其生长方向与光照方向无关外,其它７种的配子体假根均有向重力性反应,并且假根的向重力性反应在配子体发育初期,因光照的方向不同而异,表现为负向光性。随着配子体发育至片状体阶段,光对其向重力性反应的影响逐渐减弱,而重力的影响增强。在蕨类植物配子体发育初期,光对     

中国鳐类脑颅的研究

作者解剖观察了33种,隶于4目、7亚目、15科、19属的中国鳐类脑颅的形态。研究结果认为:锯鳐目和鳐目是原始类群,它们均具吻软骨,其中圆犂头鳐科和团扇鳐科是特化类群。电鳐目亦具吻软骨,它们是特化和退化类群。在较高等的鲼目则无吻软骨。依据鳐类不同的分类阶元,其脑颅亦各具有不同的式型。