黄瓜子叶原生质体培养获得体细胞胚胎发生和再生植株

从6个黄瓜栽培品种、3个雌性系和2个F,杂种的子叶游离原生质体,培养后均获得持续的细胞分裂和愈伤组织。其中37—1G×78－50F₁;代杂种的原生质体来源的愈伤组织,在IAAO．2、KTStmg／l或不加生长索、仅加BA2mg／l的培养基上,产生出大量的体细胞胚,胚状体在转到MS大量元素减半、不加任何外源激素的培养基上后,形成了有根、芽的小植株。     

美味猕猴桃原生质体再生植株细胞遗传学研究 Ⅰ．体细胞染色体数目的变化

研究了美味猕猴桃叶愈伤组织原生质体再生植株和母株（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｄｅｌｉｃｉｏｓａｌｉｎｅＮｏ．２６）茎尖体细胞染色体数目。结果表明：母株２ｎ＝６ｘ＝１７４。所测２９株再生植株的茎尖体细胞染色体数目差异显著,多为非整倍体类型,占所测植株的７２．４％左右;体细胞染色体数目介于１４２－３１０条之间,其中２ｎ＝６ｘ＝１７４约占２０．７％,少于１７４条染色体的植株约占３１．０％,超过１７４条染色体的植株则占４８．３％左右。个别单株部分茎尖体细胞在有丝分裂后期出现染色体桥、断片和落后染色体等异常现象。并对以上现象进行了扼要的讨论。     

美味猕猴桃原生质体再生植株细胞遗传学研究 Ⅰ．体细胞染色体数目的变化

研究了美味猕猴桃叶愈伤组织原生质体再生植株和母株（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａ ｌｉｎｅＮｏ．２６）茎尖体细胞染色体数目。结果表明：母株２ｎ＝６ｘ＝１７４．所测２９株再生植株的茎尖体细胞染色体数目差异显著。多为非整位体类型,占所测植株的７２．４％左右;体细胞染色体数目介于１４２－３１０条之间,其中２ｎ＝６ｘ＝１７４约占２０．７％,少于１７４条染色体的植株约占３１．０％,超过１７４条染色体     

由小-簇麦杂种悬浮细胞和原生质体再生植株

１９８８年以来,小麦原生质体培养取得了重要进展［１—７］,但成功还仅限于少数基因型,因此,为了建立和不断完善小麦及其他禾谷类植物原生质体培养的技术体系,还有待在更多的基因型中进行探索。在小麦远缘杂种系统中,１９９０年王铁邦等［８］培养小－偃麦原生质体获得成功。本文报道由普通小麦－簇毛麦杂种悬浮细胞和原生质体再生植株的结果。材料和方法起始材料取自本实验室继代保存近２年的小－簇麦杂种（２ｎ＝４ｘ＝２８）愈伤组织。该愈伤组织是由小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．,品种：“农大１４６”）×簇毛麦…     

小麦体细胞杂交研究进展

小麦细胞融合的研究开展较晚,但近年来,由于小麦原生质体培养及植株再生技术的突破,已成功获得小麦与４种近缘间禾草不对称体细胞杂种再生植株及多个物种的杂种细胞系。     

结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜（Brassica campestris ssp．pekinensis）的原生质体培养由于基因型依赖性强,细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材,研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素,探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明,试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化;KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基,能显著减轻细胞的褐化;液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程,并有利于星状细胞团的形成;基因型Asko中,愈伤组织形成体细胞胚的结构,其发生的频率约为5％,该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜(Brassica campestris ssp. pekinensis)的原生质体培养由于基因型依赖性强, 细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材, 研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素, 探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明, 试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化; KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基, 能显著减轻细胞的褐化; 液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程, 并有利于星状细胞团的形成; 基因型Asko中, 愈伤组织形成体细胞胚的结构, 其发生的频率约为5%, 该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

沙打旺与苜蓿属间体细胞杂交

以豆科牧草沙打旺为一亲本,碘乙酰胺处理的紫花苜蓿发根农杆菌A4菌株转化系为另一亲本,通过PEG-高pH,高钙法诱导原生质体融合。在不加外源激素的DPD培养基上有效地筛选了杂种细胞。经培养首次得到沙打旺( )紫花苜蓿的属间体细胞杂种。尽管双亲原生质体均已丧失分化植株的能力,但杂种细胞系R1仍得到苗的分化。杂种R1细胞的染色体数检查、冠瘿碱检测、同工酶和RAPD分析结果,都证实了其杂种特性。     

沙打旺与苜蓿属间体细胞杂交

以豆科牧草沙打旺为一亲本,碘乙酰胺处理的紫花苜蓿发根农杆菌A_4菌株转化系为另一亲本,通过PEG-高pH,高钙法诱导原生质体融合。在不加外源激素的DPD 培养基上有效地筛选了杂种细胞。经培养首次得到沙打旺( )紫花苜蓿的属间体细胞杂种。尽管双亲原生质体均已丧失分化植株的能力,但杂种细胞系R_1仍得到苗的分化。杂种R_1细胞的染色体数检查、冠瘿碱检测、同工酶和RAPD 分析结果,都证实了其杂种特性。     

小偃麦原生质体培养及植株再生

硬粒小麦(Triticum durum Desf.AABB)和中间偃麦革[Elytrigia intermedium(Host)Nevski BBEEFF]的杂种 F_1——小偃麦的幼穗诱导的胚性愈伤组织继代培养近两年后,转入修改的 MS 液体培养基建成胚性细胞悬浮系。从此悬浮系分离的原生质体在修改的 KM_(8p)培养基中培养48小时后出现第一次分裂。15天后,在液体浅层培养条件下的细胞分裂频率为2%;而用1.2%琼脂糖固化进行固体平板培养时,细胞的分裂频率则为12.14%。20—30天后,添加渗透压降低的原生质体培养液。当从原生质体再生的愈伤组织长至2—4mm 大小时,逐步转至生长及分化培养基上再生出完整植株。     

草木樨状黄芪和木本霸王的科间体细胞杂交

在成功培养原生质体的基础上, 用改进的PEG-高pH高钙法诱导草木樨状黄芪(Astragalus melilotoides)和木本霸王(Zygophyllum xanthoxylum)原生质体融合, 得到了科间体细胞杂种融合细胞。采用罗丹明-6G预处理草木樨状黄芪原生质体以及UV-B辐照霸王原生质体, 使双亲原生质体及其同源融合产物均不能持续分裂而死亡, 融合后的杂种细胞由于生理互补可恢复持续分裂能力而被筛选出来。融合产物经培养分裂获得了2个杂种细胞系, 其中1个分化出芽。染色体计数和分子鉴定证明了杂种的真实性。初步比较了杂种细胞系及亲本对盐分和水分胁迫的耐受性, 结果表明杂种细胞系对盐分和水分胁迫的耐受性介于两个亲本之间。     

花椰菜与黑芥种间体细胞杂种的获得和鉴定

利用非对称体细胞杂交技术, 获得芸薹属花椰菜(Brassica oleracea var. botrytis)与黑芥(B. nigra)的种间杂种, 实现了野生种质抗病基因向甘蓝类蔬菜作物的渗透。以具有良好再生能力的花椰菜下胚轴原生质体作为融合受体, 具有抗黑腐、黑胫和根肿病优良性状的黑芥叶肉原生质体作为融合供体, 用不同强度的UV射线处理后, 利用PEG方法诱导供、受体原生质体融合。培养后获得170棵再生植株, 选取来自40个不同愈伤组织的40棵单株进行形态学观察及RAPD和SRAP分子标记检测, 结果表明其中30棵为体细胞杂种。染色体计数显示, 约23%杂种植株的染色体数目小于供、受体染色体数之和。用流式细胞仪测定DNA含量显示, 杂种植株DNA含量是受体的2-4倍, 20%杂种植株DNA含量小于供、受体之和。     

草木樨状黄芪和木本霸王的科间体细胞杂交

在成功培养原生质体的基础上,用改进的PEG-高pH高钙法诱导草木樨状黄（Astragalus melilotoides）和木本霸王（Zygophyllum xanthoxylum）原生质体融合,得到了科间体细胞杂种融合细胞。采用罗丹明-6G预处理草木樨状黄芪原生质体以及UV-B辐照霸王原生质体,使双亲原生质体及其同源融合产物均不能持续分裂而死亡,融合后的杂种细胞由于生理互补可恢复持续分裂能力而被筛选出来。融合产物经培养分裂获得了2个杂种细胞系,其中1个分化出芽。染色体计数和分子鉴定证明了杂种的真实性。初步比较了杂种细胞系及亲本对盐分和水分胁迫的耐受性,结果表明杂种细胞系对盐分和水分胁迫的耐受性介于两个亲本之间。     

小麦与多年生黑麦草原生质体的电融合及杂种愈伤组织的形成

多年生黑麦草(Lolium perenne L.)悬浮培养细胞来源的原生质体和小麦(Triticumaestivum L.)含叶绿体的悬浮培养细胞来源的原生质体间,用直流方波脉冲进行电融合,获得了体细胞杂种愈伤组织。小麦的原生质体经过碘乙酰胺失活。愈伤组织的形态和颜色被用作识别预期杂种的标记。为了对杂种愈伤组织进行同工酶分析,观察了亲本的9种同工酶谱,其中3种在亲本间表现出差异(ADH、GOT 和 SDH)。酒精脱氢酶(ADH)的分析结果表明,有6个细胞系表现出杂种带。这些细胞系经过其他两种同工酶分析和 rDNA 探针杂交试验表明,一个细胞系表现出基本完全的亲本基因组间的组合,其余5个细胞系是部分杂种。     

烟草和枸杞属间原生质体电融合再生杂种植株

烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）叶肉原生质体和枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）悬浮细胞原生质体在适宜电场条件下能以４％ —５％ 的频率发生异质融合。用过氧化物酶和超氧歧化酶同工酶方法对随机选取的１００ 个细胞系进行分析,发现杂种愈伤组织形成频率为９％ 。其中５个杂种细胞系具有分化能力,再生出大量丛生小苗。这些小苗多数在形态上兼有双亲特征并难以生根和长大。叶片酯酶同工酶分析表明,其中２ 个杂种细胞系（ＮＬ４ 和ＮＬ８）再生苗含有一条双亲没有的重组酶带。对亲本和杂种细胞系ＮＬ４ 的细胞学观察结果表明,杂种细胞系的染色体数目为２ｎ＝ ５５—８０,明显高于亲本。对亲本及ＮＬ４ 和ＮＬ８ 愈伤组织的基因组ＤＮＡ 进行ｒＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交发现,ＮＬ８ 含有双亲的全部谱带,且在３．０ ｋｂ 处出现１ 条新带;ＮＬ４ 没有枸杞的特征带,但在３．０ ｋｂ 和５．５ ｋｂ 处出现２ 条新带,说明这两个杂种中的双亲ｒＤＮＡ 可能已发生分子间重组。从ＮＬ４ 愈伤组织得到４ 株形态上近似烟草的完整植株,并移栽成活     

白Qian体细胞胚胎发生及其植株再生条件的优化研究

为建立白Qian体细胞胚胎发生及其植株再生的高频率实验系统,对聚乙二醇及干化处理的影响进行了系统研究。结果表明,在分化培养基中附加50g/L聚乙二醇可显著提高愈伤组织的分化频率和每块愈伤组织产生的体细胞胚个数,而干化处理又能使体细胞胚的萌发率大幅度上升。     

美味猕猴桃原生质体再生植株细胞遗传学研究 Ⅱ.性别性状变异和小孢子发生及其发育命运

对美味猕猴桃同一雌株叶原生质体再生植株进行了形态学、细胞学以及育性特性的比较研究,确认该体细胞无性系性别性状发生变异。其中６０％雄性再生植株退化的雌蕊仍保留不同程度的雌性化特征,但雌性全不育;小孢则能发育成有功能的雄配子体,但有一定的功能缺陷,再生雌株中Ｐ１组群性状特征与母株相似;Ｐ２线群花发育畸形,导致雌性不育或育性极差。细胞学研究表明,小孢子母细胞减数分裂时染色体异常行为对小孢子发生的影响不能     

原生质体培养在芸薹属蔬菜作物中的研究进展

原生质体是遗传转化的优良受体。在原生质体培养过程中会产生很多无性系变异,还可以产生体细胞杂种,这些都为蔬菜育种提供了新的途径。介绍了原生质体培养及原生质体融合方法的研究进展,综述了原生质体培养在芸薹属蔬菜育种中所取得的研究成果,并对今后研究的方向进行了展望。     

小麦与燕麦不对称体细胞杂交的研究

以小麦品种济南177的悬浮细胞系(长期继代培养已丧失分化能力)来源的原生质体混合同品种胚性愈伤组织(分化能力较强, 约70%)制备的原生质体为受体, 以经300 mW/cm²紫外线照射0.5, 1, 2, 3, 5 min的普通燕麦愈伤组织(分化频率很低, 约10%)原生质体作供体, 用PEG法诱导融合. 可高频率地获得体细胞杂种细胞系, 并分化获得绿色正常的再生植株, 经荧光原位杂交、 同工酶及5S rDNA间隔序列分析, 确认了它们为体细胞杂种. 单独使用小麦胚性悬浮系或愈伤组织为受体获得的杂种克隆均未能得到绿色植株.     

籼稻原生质体培养和植株再生

用籼稻IR52、IR8和IR45的幼花序和幼胚愈伤组织在LS培养基建立了稳定的悬浮培养物。悬浮系的建立经历三个阶段:褐变期,长根期,成熟期。建立了适合籼稻原生质体生长的Y8培养基,其植板率显著高于KPR和PCM培养基。悬浮细胞系间差异明显,只有部份系可以提供有分裂能力的原生质体或具看护活性。以上三个品种的原生质体均分裂良好,但只有IR52和IR8分化出苗,其中IR52分化率1.25%,得再生植株50余株,移至田间生长结实正常。