气相色谱在食品微生物鉴定中的研究应用

磷脂脂肪酸作为细菌细胞膜的主要成分,因其生物特异性用于细菌鉴定实验。本文简明介绍了气相色谱微生物鉴定技术的原理及在食品微生物鉴定中的应用,同时与其他鉴定方法进行了比较,探究了其在食品优势腐败菌鉴定中的优缺点,并对其研究前景进行了展望。     

奇异变形杆菌的L-氨基酸脱氢酶在大肠杆菌中的异源表达和鉴定

本研究在大肠杆菌中表达了奇异变形杆菌的L-氨基酸脱氢酶, 并对产物苯丙酮酸进行了鉴定。奇异变形杆菌的L-氨基酸脱氢酶在大肠杆菌中得到了很好的表达, 具有酶活性, 并且发现其活性与细胞膜相关。L-氨基酸脱氢酶与细胞膜的密切相关性, 对酶活来说可能是必不可少的。     

小鼠抗人胰岛素受体单克隆抗体的制备、纯化及鉴定

 M11D杂交瘤细胞株是由人胎盘细胞膜纯化所得胰岛素受体免疫BALB/C小鼠后,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞株NS-1细胞融合所得。该杂交瘤细胞分泌的抗体经ELISA及放射免疫沉淀法证实为胰岛素受体特异的单克隆抗体。该抗体经Protein A-Sepharose亲和层析分离、纯化,SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳鉴定得分子量分别为53000及23000的两条区带,免疫双扩证明为IgGl。该抗体特异地沉淀125Ⅰ-人胎盘细胞膜胰岛素受体,沉淀经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影得分子量为135000的特异显影带,与胰岛素受体α亚基分子量相同,说明M11D为抗胰岛素受体α亚基的单克隆抗体。     

人肝癌细胞胚胎性膜抗原的研究

在人肝癌细胞膜中发现了一个新的癌胚抗原,并且进行了部分纯化。从部分肝切除术取人肝癌组织,用蔗糖密度梯度超离心法分离细胞膜,以此细胞膜制备的抗血清,经患者本人正常肝粉吸收,吸收后的抗血清与肝癌细胞膜溶解物作双向免疫扩散和对流免疫电泳均呈阳性反应,而与正常肝细胞膜则均呈阴性。用免疫萤光法鉴定,证明该血清能特异性地作用于肝癌细胞膜和7402人肝癌细胞培养株的细胞膜。因此,我们认为:人肝癌细胞膜具有不存在于正常肝细胞的抗原。进一步研究证明,这种抗原也存在于3～4个月人胚胎肝细胞膜中,显示这是一种癌胚抗原。我们取人胚胎肝组织,用免疫亲和层析法尝试了这种膜抗原的纯化工作,从亲和层析柱流下的蛋白质,其沉降系数为0.33～0.45,并对上述吸收后的抗血清显示特异性的亲和力。     

抗人表皮生长因子受体单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

 用人上皮癌细胞系A 431细胞作为抗原免疫BalB/c小鼠,制备七株抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体的杂交瘤,这些杂交瘤经三次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。对其中四株杂交瘤分泌的单克隆抗体进行了鉴定。免疫沉淀放射自显影结果示单克隆抗体3、101和176均可识别A 431细胞膜抗原MW为170000的蛋白质即EGF受体。单克隆抗体59可以识别低分化鼻咽癌细胞膜上EGF受体。单抗3、176和59等可抑制EGF与受体的特异结合,而101和94则不能抑制EGF与受体的结合。 用Protein-A Sepharose CL4B纯化了单抗,纯化的单抗主要为IgG_1亚类。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化的单抗进行了纯度测定。     

肾性贫血红细胞膜蛋白巯基结合位置性质的ESR研究

用四种不同链长的马来酰亚胺氮氧自由基标记物研究了慢性肾衰竭(CRF)贫血病人红细胞膜蛋白巯基结合位置的性质。从所得的ESR波谱计算了弱、强固定化成分之比(W/S)。结果表明,由M(Ⅰ)、M(Ⅱ)和M(Ⅲ)标记病人红细胞膜所得的W/S值都比标记正常人红细胞膜得到的W/S位高(P<0.05),这说明慢性肾衰竭贫血病人红细胞膜蛋白的巯基结合位置的构象发生了变化;用M(Ⅳ)标记正常人红细胞和病人红细胞所得到的ESR波谱都只含有弱固定化波谱,没有强固定化波谱。得出的这个结果将为探讨CRF贫血的发病机理提供理论证据。     

用自旋标记研究抗癌药物对中国地鼠肺正常细胞V_(79)和癌变细胞V_(79)-B_1膜流动性的影响

本文用脂肪酸自旋标记Ⅲ(10,3)在ESR波谱仪上研究了作用于不同环节的抗癌药物硫杂脯氨酸、阿糖胞苷、放线菌素D和5-氟-2′脱氧尿嘧啶对中国地鼠肺正常细胞V_(79)和癌变细胞V_(79)-B_1膜流动性的影响。从所得的ESR波谱计算了抗癌药物处理前后细胞膜脂肪酸链的序参数、平均涨落角度、旋转相关时间和微观粘度的变化。发现用抗癌药物处理以后,V_(79)和V_(79)-B_1细胞膜脂肪酸链的序参数增加,平均涨落角度变小,旋转相关时间和微观粘度增大,细胞膜流动性变小。这四种药物对细胞膜的疏水脂肪酸链作用类似,而硫杂脯氨酸对细胞膜表面作用最大,阿糖胞苷,放线菌素D和5-氟-2′脱氧尿嘧啶依次减小。做了序参数随药物处理时间的动力学曲线。发现除放线菌素D外,V_(79)-B_1细胞膜序参数对其他三种药物的反映比V_(79)细胞膜快。     

竹节蓼石油醚部位抗肿瘤活性组分的筛选

对竹节蓼石油醚部位分离所得组分进行了体外抗肿瘤活性筛选。MTT法研究硅胶吸附层析分离所得组分对肿瘤细胞株PC-3、A549增殖的影响,相差显微镜观察细胞形态变化,DAPI染色法检测细胞凋亡形态学,薄层色谱结合理化性质分析有效组分中的成分,波谱数据鉴定结构。结果显示分离所得的5种组分中,C_(6-8)对PC-3有增殖抑制作用;C21-24、C_(25-28)对PC-3、A549有较强的增殖抑制作用,且呈量效关系,作用后细胞形态发生了明显改变,DAPI染色结果显示二者都促进了肿瘤细胞的凋亡;薄层色谱分析出有效组分中共含5种化合物,其中单体C7鉴定为羽扇豆醇;C_(21-24)、C_(25-28)组分初步鉴定为甾体和三萜类化合物。     

莱茵衣藻BBS8蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

为制备一支高特异性的莱茵衣藻BBS8兔源多克隆抗体, 研究首先在大肠杆菌中表达N-端6×His标签标记的BBS8融合蛋白(6×His::BBS8)并对其进行镍柱纯化, 而后将纯化所得6×His::BBS8蛋白免疫新西兰大白兔。免疫3次后采集少量抗血清, 利用间接ELISA法测定其效价为1﹕102400。然后, 利用protein A纯化珠对所得BBS8抗血清进行IgG亚型抗体富集, 接着利用大肠杆菌表达和纯化所得N-端MBP标签标记的BBS8(MBP::BBS8)对IgG抗血清进行抗原抗体亲和纯化。利用纯化后的anti-BBS8多克隆抗体对莱茵衣藻野生型CC-125和bbs8突变体藻种的全细胞蛋白提取物进行免疫印迹鉴定, 所得anti-BBS8多克隆抗体特异性较高, 适合用于后续莱茵衣藻BBS8蛋白功能的研究。     

高温胁迫下华南茄子的耐热性表现及其鉴定指标的筛选

以6份茄子为材料研究了高温胁迫对幼苗热害指数、细胞膜相对电导率、脯氨酸含量的影响及其与田间自然鉴定结果的对应关系,结果表明,分段高温处理的热害指数和连续高温处理下的细胞膜电导率可以有效区分不同茄子材料幼苗的耐热性,且两者鉴定结果与田间鉴定结果基本一致,可作为茄子苗期室内快速鉴定的首选指标;脯氨酸含量变化没有规律,较难反映不同茄子幼苗间的耐热性差异;此外,对青枯病的抗性可以作为南方茄子耐热性综合评价的辅助指标.春季和秋季茄子开花、结果的比较研究表明,高温胁迫下坐果率、商品果率、果长、单果重和商品果产量有较大幅度下降,但不一定造成茄子正常花率的降低,果周径所受影响也较小.     

条斑紫菜藻胆蛋白提纯方法优化探索

采用溶胀法与组织捣碎法相结合的紫菜叶状体细胞破碎方法.研究了不同物液比、缓冲液浸泡时间和硫酸氨盐析次数对藻胆蛋白纯度和产率的影响,对比了各种羟基磷灰石的层析效果,并对所得藻红蛋白和藻蓝蛋白做了吸收光谱、荧光发射光谱和SDS-PAGE鉴定.结果表明,在物液比为1:5,浸泡时间为36h时,紫菜综合破碎效果最佳;经过4次硫酸氨盐析后,藻红蛋白和藻蓝蛋白的纯度最高,分别达到1.71和0.98,采用Siegelman的方法制备的羟基磷灰石一次层析所得藻红蛋白和藻蓝蛋白的纯度最高,分别达到4.73和4.42,产率分别为0.144%和0.042%,且光谱和电泳鉴定结果均达到商品化要求.     

新疆哈萨克族2型糖尿病患者粪便中韦荣球菌的分离鉴定

目的从新疆哈萨克族2型糖尿病患者粪便中分离培养并鉴定韦荣球菌。方法收集新鲜哈萨克族2型糖尿病患者的粪便样本,用韦荣球菌专属培养基进行分离培养,微量生化反应管进行初步鉴定;提取所得菌株的DNA,使用韦荣球菌属引物对此DNA进行特异性扩增,结合全自动细菌鉴定仪对菌株进行鉴定。结果 (1)所得到的菌株经微量生化反应管初步鉴定为韦荣球菌;(2)使用韦荣球菌属引物对此菌株DNA进行特异性扩增获得预期产物;(3)经全自动细菌鉴定仪最终确定所得菌株为韦荣球菌。结论从新疆哈萨克族2型糖尿病患者粪便中分离培养得到韦荣球菌。     

病毒单糖的研究 Ⅰ.颗粒体病毒(GV)单糖的气相色谱分析

本文介绍了颗粒体病毒中单糖的气相色谱分析法,对所得病毒单糖色谱图中的主要组分进行了分析鉴定,证明组成病毒的单糖成分有:鼠李糖、核糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖。并用相应单糖峰高比值,区分了它们间的异同。病毒单糖分析结果。能与血清学和裂解气相色谱法分析鉴定病毒的结果相符。     

多药抗药性形成的分子生物学机理

肿瘤细胞多药抗药性的形成机理除了与细胞膜Ｐ－糖蛋白过度表达,ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ－含量与活性改变有关外,同时还涉及细胞内谷胱甘肽,蛋白激酶Ｃ等变化。本综述了近年来研究所得的一些新进展。     

棉铃虫幼虫中肠细胞脂筏的制备及鉴定

脂筏是细胞膜上富含胆固醇、鞘脂类和糖基磷脂酰肌醇锚着蛋白的去垢剂不溶性微结构域,被认为是多种细胞膜孔毒素在细胞表面形成寡聚体的平台。为研究脂筏与Bt毒素在细胞膜上形成寡聚体膜孔的关系,本文对棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫中肠脂筏的制备与鉴定方法进行了研究。根据脂筏在低温（4℃）下不溶于去垢剂的特性,采用Triton X-100处理棉铃虫幼虫中肠刷状缘膜囊泡,溶解非脂质筏成分,以OptiPrep为介质进行密度梯度离心,分离去垢剂不溶组分,成功地得到了棉铃虫幼虫中肠上皮细胞的脂筏。再以脂筏的特有化学成分神经节苷脂GM1作为脂筏的标志分子,利用霍乱毒素β亚基能与GM1特异性结合的特性,以辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素β亚基用点印迹法化学发光检测神经节苷脂的分布,从而对脂筏进行定性鉴定。结果表明我们建立的脂筏制备方法简便、易行,比传统的蔗糖梯度离心法大大缩短了制备所需时间。     

僵蚕药材蛋白质分级指纹图谱建立及产地鉴定相关分子研究

建立云南与四川僵蚕药材的总蛋白质指纹图谱及分级指纹图谱,对比分析以发现其中的差异表达蛋白质分子并进行鉴定及生物信息学分析,探索其用于产地鉴定的可行性。提取两种僵蚕的酸溶、碱溶、水溶及醇溶性总蛋白质,对其进行丙酮分级沉淀,对所得样品进行SDS-PAGE指纹图谱对比分析,对所得差异条带进行LC-MS/MS分析,数据库检索后进行生物信息学分析。两种僵蚕的总蛋白质指纹图谱相似度很高,难以据此进行产地鉴定;两种僵蚕的分级指纹图谱则有较显著差异,有望用于产地鉴定;依据分级指纹图谱差异共鉴定出β-葡萄糖苷酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗胰蛋白酶、含脂肪酶结构域蛋白等273种蛋白质。云南与四川僵蚕的蛋白质组成及其分级指纹图谱存在显著差异,有望用作产地鉴定的分子依据;醇溶蛋白质构建分级指纹图谱可以提供更加丰富的信息及更好的分辨率;分级指纹图谱技术具有简便易行、分辨率较高的优点,为其他中药材的产地鉴定研究提供了方法学思路。     

胰岛素受体抗体的产生及其初步鉴定

六年前Kahn等报道了在严重抗胰岛素型的特殊的糖尿病患者(称B型)的血清中,存在有胰岛素受体的抗体。这种抗体可以抑制胰岛素与其受体的结合,并且有类似胰岛素的生物活性,如促进葡萄糖的氧化、抑制脂肪的分解等。这一发现,对于糖尿病的临床和胰岛素受体的研究都是很重要的。从那以后,人们尝试通过免疫动物的方法获得胰岛素受体的抗体。但迄今,无论是用含胰岛素受体的细胞膜或用纯化的胰岛素受体免疫动物,所获得的胰岛素受体的抗体,都只能模仿胰岛素的生物活性,而不能象从糖尿病患者(B型)中获得的胰岛素受体的抗体那样抑制胰岛素与其受体的结合。人胎盘细胞膜含有比胰岛素典型靶细胞更丰富的胰岛素受体。本文用人胎盘细胞膜免疫家兔获得了人胎盘细胞膜蛋白的抗体,并对其中的胰岛素受体的抗体进行了初步鉴定。     

青叶胆中齐墩果酸的制备工艺及其纯度测定

研究青叶胆中齐墩果酸的提取工艺及其结构鉴定。用体积分数95%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,减压回收乙醇后用水洗涤得沉降物。用YCXY-2号除杂剂处理后,加活性炭脱色30 min 2次,经凝析分离、纯化精制得齐墩果酸产品。采用理化常数测定和薄层色谱、红外光谱、质谱及核磁共振光谱鉴定试样的化学结构,确定实验所得产品为齐墩果酸,而齐墩果酸为青叶胆的主要化学成分。     

细胞脂肪酸气相色谱图鉴别细菌的研究

本文介绍了细胞脂肪酸毛细管柱气相色谱图的绘制方法,对所得细菌细胞脂肪酸气相色谱图中的某些组分用气相色谱一质谱一计算机联用技术进行了分析鉴定,并借助电子计算机对细菌脂肪酸模式进行了聚类分析。用上述方法分别对24株(5种)芽孢杆菌、14株(3种)无芽孢杆菌、3种弧菌和2株临床分离的类霍乱弧菌进行鉴别,均得到满意结果。为微生物的分类鉴定、生理生化研究提供了一种现代分析方法。     

多不饱和脂肪酸对细胞膜功能影响的研究进展

多不饱和脂肪酸是细胞膜磷脂的重要组成成份,影响细胞膜的稳定性.它具有广泛的生物学功能,包括细胞内信号传导通路、基因表达和细胞凋亡的调控等.主要从细胞膜脂质的组成,细胞膜的流动性及膜脂质过氧化等方面对多不饱和脂肪酸对细胞膜功能的影响进行了综述.