蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究 Ⅱ.组蛋白

从蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞分离纯化了总组蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定证明在正常或贫血的蟾蜍红细胞内都具有细胞特异的组蛋白H_(50)。在蟾蜍贫血后,网织红细胞内的组蛋白H_1有显著增加。用Bi0-gel P60将总组蛋白进一步柱层分离,并对组蛋白H_1与H_5含量的比值作了分析,证明蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞内组蛋白H_1与H_5在量的比例上有明显的变化。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究Ⅲ·HMG蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)与鸡红细胞核内分离纯化了HMG蛋白(Highmobility group proteins),经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,证明两者的电泳图谱不完全相同,在蟾蜍的红细胞内也能观察到与鸡HMG_(17)相对应位置上的蛋白质区带,但在鸡HMG_(14)相对应的位置上,却能观察到两条显著的蛋白质区带(A及B带)。此外,我们已把蟾蜍成熟红细胞与苯肼诱发后的网织红细胞内的HMG蛋白进行比较,证明两者有显著的差异。网织红细胞内HMG_A和HMG_B蛋白在含量上起了变化,却与成熟的红细胞相反。另外还出现了二条新的蛋白区带(C与D带)。初步的结果暗示了,HMG蛋白类似于非组蛋白、染色质蛋白,在量上的变化将会引起功能上的变化。     

小鼠网织红细胞微观流变学特性的研究

按Bishop方法,在小鼠血液里诱导生成大量网织红细胞,然后提取网织红细胞,对其电泳率、渗透脆性、膜的流动性、细胞的变形能力和取向性进行了系统研究。研究结果表明网织红细胞在转变为成熟红细胞的短短时间内,其微观流变学特性发生了明显的变化：电泳率变小、渗透脆性变好、膜的流动性变大、细胞的变形能力变强、取向性变好,最终发育成具有全面功能的成熟红细胞。     

网织红细胞在消化道肿瘤化疗前后的变化及临床意义

目的:探讨采用网织红细胞监测消化道肿瘤患者化疗前、后骨髓造血功能恢复的临床价值。方法:采用SysmexXE2100全自动细胞分析仪对60例消化道恶性肿瘤患者化疗过程中白细胞数(WBC)、血小板(PLT)、网织红细胞百分率(RET%)、未成熟网织红细胞指数(IRF)进行动态监测。结果:化疗后骨髓造血功能受到抑制,RET%和IRF从化疗后第3天开始出现明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),在化疗后第14天开始出现回升,其中IRF值较第7天显著升高,两者间差异具有统计学意义(P<0.01);WBC和PLT则于化疗后第7天出现明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),化疗后第21天开始出现回升。结论:未成熟网织红细胞指数是预测化疗后骨髓造血恢复的较敏感指标。     

网织红细胞成熟过程中膜剪切弹性模量及表面粘度的改变

用鸡抗兔血清的抗体使兔造成急性溶血性贫血的方法,诱发兔体内同步生长的新生网织红细胞,用文宗曜等提出的一种测量红细胞膜剪切弹性模量及表面粘度的新方法——新型激光衍射法,连续72h监测经过不同发育阶段的网织红细胞的小变形指数和变形恢复过程(即松弛过程)中变形恢复到最大值一半的时间(即变形恢复半时间,t0.5),将测得的结果分别代入红细胞膜的剪切弹性模量公式和表面粘度公式。计算出不同发育阶段的网织红细胞的膜剪切弹性模量和表面粘度,发现网织红细胞在转变为成熟红细胞的过程中,其膜剪切弹性模量和表面粘度有明显改变。这对研究由于贫血等原因造成的网织红细胞增多情况下全血的微观流变学特性有重要的-临床意义,同时对新生网织红细胞在转化过程中膜的剪切弹性模量和表面粘度的变化规律加以系统研究,具有重要的基础理论研究价值。     

在体网织红细胞微观流变学特性

用苯肼使动物造成急性溶血性贫血的方法,诱发动物体内新生网织红细胞大量增多,通过对新生网织红细胞的变形、取向及电泳率等指标的连续72h的测量,发现网织红细胞在转变为成熟红细胞的过程中,其流变学特性有明显改变.这对研究由于贫血等原因造成的网织红细胞增多情况下全血的微观流变学特性有重要的临床意义,同时也对新生网织红细胞的微观流变学特性进行了系统研究.     

网织红细胞在消化道肿瘤化疗前后的变化及临床意义

目的：探讨采用网织红细胞监测消化道肿瘤患者化疗前、后骨髓造血功能恢复的临床价值。方法：采用Sysmex XE2100全自动细胞分析仪对60例消化道恶性肿瘤患者化疗过程中白细胞数（WBC）、血小板（PLT）、网织红细胞百分率（RET％）、未成熟网织红细胞指数（IRF）进行动态监测。结果：化疗后骨髓造血功能受到抑制,RET％和IRF从化疗后第3天开始出现明显下降,差异有统计学意义（P〈0．01）,在化疗后第14天开始出现回升,其中IRF值较第7天显著升高,两者间差异具有统计学意义（P〈0．01）;WBC和PLT则于化疗后第7天出现明显下降,差异具有统计学意义（P〈0．01）,化疗后第21天开始出现回升。结论：未成熟网织红细胞指数是预测化疗后骨髓造血恢复的较敏感指标。     

网织红细胞参数在贫血疾病中的临床应用概况

<正>网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段,略大于成熟红细胞,其胞质中残存的嗜碱性物质核糖核酸(RNA)源自于有核红细胞RNA是嗜碱性物质,经碱性染料(如天青B、煌焦油蓝或新亚甲蓝等)活体染色后,形成蓝色的点粒状或丝网状结构沉淀物,故名网织红细胞[1]。一个多世纪以来网织红细胞的测定在贫血的诊断、疗效评估、鉴别诊断等方面起到重要的作用。近年来随着全自动血     

关于成熟红细胞代谢的几个特点

红细胞产生于红骨髓。由造血干细胞依次分化为原始红细胞、幼红细胞、网织红细胞,最后形成为成熟红细胞,进入血循环。在红细胞的生成过程中,红细胞的形态和代谢依其成熟的程度而不同,最后形成的成熟红细胞除细胞膜外缺乏细胞核及全部细胞器,不能进行核酸和蛋白质的生物合成。成熟红细胞的代谢特点可从三个方面说明:能量代谢、2,3一二磷酸甘油酸支路、氧化还原系统。     

应用流式细胞仪检测网织红细胞

网织红细胞内含有比成熟红细胞更多的RNA。它可与荧光染料派若宁γ特异性结合发出荧光。应用流式细胞仪进行荧光强度的测定,可得出网织红细胞在人体末梢血中占红细胞的百分率。本实验与常规的煌焦油蓝法比较、重复性好,变异程度小,且与常规法呈高度相关。     

核糖体单链失活蛋白在无细胞体系中的活性

核糖体单链失活蛋白是一类广泛分布于植物中的蛋白质,它能使真核细胞核糖体60S亚基失活。本文报道了一些核糖体单链失活蛋白的制备、纯化以及在兔网织红细胞裂解液中对蛋白质生物合成的抑制活性及它们对完整细胞的毒性。其中多数的核糖体单链失活蛋白是首次被分离纯化并对其毒性进行研究的。     

黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞膜上的表达及其在铁摄取中的作用

目的：研究黑素转铁蛋白（p97）在家兔网织红细胞膜上的表达及其在非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。方法：聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS＝PAGE）和放射性同位素法（^59Fe）。结果：①网织红细胞孵育液浓缩后,经SDS－PAGE测定,在分子量97kD位置上可见一条明显的蛋白带;用磷脂酚肌醇磷脂酶C（PI－PLC）300mu/ml预处理网织红细胞后,孵育液浓缩再经SDS－PAGE测定,在分子量97kD处仍有一条明显的蛋白带,且其平均OD值高于未经处理的网织红细胞;而成熟的红细胞在此处却没有明显的蛋白带。②单纯用PI－PLC作用于网织红细胞,其铁摄取无明显变化（P＞0.05）。③去除内源性转铁蛋白后,再用PI－PLC作用网织红细胞,则胸浆内铁及整合到血红素中的铁均较未经处理的网织红细胞明显降低（P＜0.05）。结论：p97可能存在于家兔网织红细胞膜上,且在摄取非转铁蛋白结合铁的过程中可能发挥作用。     

对tRNA和mRNA双依赖的兔网织红细胞无细胞蛋白合成体系的制备

本文在Gilbert和Anderson及Pel-ham和Jackson方法的基础上加以改进,制备了一个对tRNA和二RNA双依赖的兔网织红细胞无细胞蛋白合成体系。在有TMV RNA存在的情况下,加入兔网织红细胞总tRNA,氨基酸参入比不加tRNA的对照高40倍以上。在有兔网织红细胞总七RNA存在的情况下,加入TMVNA或Poly(rU),氨基酸参入分别比不加外源mRNA的对照高10倍和7倍以上。这个双依赖的无细胞蛋白合成体系是检测单一tRNA和mRNA生物活性的有用工具。     

人胚肝发育过程中染色质组份的变化

从14-,17-,21-,27-,34-,及38-周令的人胚肝细胞核分离出柒色质,分别对其中的RNA、DNA、组蛋白(HP)及非组蛋白(NHP)进行测定。在胚胎发育过程中肝柒色质HP/DNA比值变化不大。但是,NHP/DNA与NHP/HP比值发生显著改变。人胚肝NHP量的变化一直保持在整个胚胎发育过程中,NHP量的高峰位于21-及34-周。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶板电泳分析处于不同发育阶段的人胚肝总染色质蛋白。电泳图谱显示出染色质NHP组分在质与量上有所改变。     

湖北地区健康成人网织红细胞相关参数参考区间的建立

目的:建立湖北地区健康成人网织红细胞相关参数的参考区间,以便更准确为临床提供服务。方法:选取我院体检中心751例健康体检者进行空腹静脉采血,采用迈瑞BC-6800血液分析仪进行网织红细胞相关参数检测,建立网织红细胞百分比(RET%)、网织红细胞绝对值(RET#)、低荧光网织红细胞百分比(LFR%)、中荧光网织红细胞百分比(MFR%)、高荧光网织红细胞百分比(HFR%)和幼稚网织红细胞百分比(IFR%)的参考区间。结果:RET%、RET#、LFR%、MFR%、HFR%和IFR%均呈非正态分布,建立的参考区间分别为:RET%:0.54～1.80;RET#:男0.029～0.098、女0.024～0.093;LFR%:男89.9～98.7、女92.4～98.8;MFR%:男1.3～9.6、女1.2～7.3;HFR%:男0～0.5、女0～0.1;IFR%:男1.3～10.3、女1.2～7.4。健康成人男性LFR%、MFR%、IFR%结果存在年龄组间显著性差异,女性未发现年龄组间存在差异性。结论:湖北地区健康成人网织红细胞6项相关参数的参考区间存在地区特异性、性别差异性以及年龄差异性。不同地区实验室应根据当地调查情况,适当的调整网织红细胞相关参数的参考区间,以便更准确的为临床提供判断标准。     

重组促红细胞生成素(rHu-EPO)及其应用

19世纪,法国生理学家 Paul Verte 发现低氧可以刺激血红细胞生长。1950年美国 Reissman 证实了体内存在一种能刺激血红细胞的物质,称为红细胞生成素(EPO)。1985年,美国的 Fritsch 等成功地从成百上千的基因中发现了能产生 EPO 的一种,运用遗传工程,得以从动物细胞中产生对人类 EPO 负责的基因,从而使大量生产 rHuEPO 成为可能。EPO 是由肾脏分泌的一种重要激素,它具有促进骨髓中红细胞系列的增殖、分化、成熟和释放作用,以及维持血中细胞数和血红蛋白量的稳定状态慢性肾功能衰竭(CRF)的贫血与许多因素有关,这些因素包括:促红细胞生成素(EPO)生成减少、血中存在红细胞生成抑制因子(Inhibitors of Erythropoicsis,IE)、红细胞寿命缩     

兔网织红细胞与K_(562)细胞胞质杂交体(K-RRneo)核基质-中间纤维体系的研究

本文利用脂质体转基因技术与细胞融合相结合的方法所建立的杂交细胞为研究对象,采用选择性多步抽提配合整装电镜及Western 印迹分析等技术,系统观察了兔网织红细胞、人红白血病K_(562)细胞及两者融合形成的胞质杂交体K-RRneo 细胞的核基质-中间纤维体系结构,着重分析比较了它们之间的胞质波形蛋白纤维成分的变化。实验结果表明:K_(562)细胞的中间纤维为放射状分布,核纤层为网层状,兔网织红细胞胞质中间纤维为细网格状,其间存有不规则的致密物。胞质体杂交细胞(K-RRneo)的核纤层结构稀薄,核基质较亲代K_(562)细胞致密,中间纤维构型呈现与网织红细胞相似的网格状。中间纤维蛋白电泳及Western 印迹结果亦显示K-RRneo 细胞与网织红细胞的带型类似,即缺乏聚合型波形蛋白及聚合前体物波形蛋白单体,仅检测到解聚前、后而与细胞其它组分结合的波形蛋白复合物。这一生化和超微结构特征提示,红细胞排核可能与波形蛋白纤维的解聚及Vimentin 基因关闭有关。实验结果为排核前细胞内原已装配好的Vimentin 趋于解聚,引起中间纤维瓦解,造成核偏位、固缩而最终排出细胞外的排核机制提供了证据。     

网织红细胞膜剪切弹性模量和表面粘度的研究

用苯肼使动物造成急性溶血性贫血的方法,诱发动物体内同步生长的新生网织红细胞,用一种测量红细胞膜剪切弹性模量及表面粘度的新方法——新型激光衍射法,连续72 h监测经过不同发育阶段的网织红细胞的小变形指数（DI）_d和变形恢复过程（即松弛过程）中变形恢复到最大值（DI）_max一半的时间t_0.5（即变形恢复半时间）,将测得的结果分别代入红细胞膜的剪切弹性模量（E）公式和表面粘度（μ_m）公式.计算出不同发育阶段的网织红细胞的膜剪切弹性模量和表面粘度,发现网织红细胞在转变为成熟红细胞的过程中,其膜剪切弹性模量和表面粘度有明显改变.这对研究由于贫血等原因造成的网织红细胞增多情况下,全血的微观流变学特性有重要的临床意义,同时对新生网织红细胞在转化过程中膜的剪切弹性模量和表面粘度的变化规律加以系统研究,填补了网织红细胞研究方面的空白,具有重要的基础理论研究价值.     

鸡珠旦白cDNA在细菌质体中的克隆

自苯肼处理过的鸡网织红细胞所分离出的mRNA,制备成鸡珠旦白cDNA,并使之在pMB9质体的抗四环素基因中克隆。限制性酶的分析结果表明,至少分离到两类克隆。从核苷酸序列的资料证明,这些分离的克隆相当于鸡的α和β-血红旦白基因。     

网织红细胞铁摄取机制的研究进展

从细胞及分子水平重点讨论了有关网织红细胞铁代谢的两个问题. a.网织红细胞如何摄取载铁蛋白结合铁？分七个主要步骤总结了这一摄取过程的研究新进展. b.在内吞小体内,铁从载铁蛋白释放后如何穿越内吞小体膜进入细胞质？ 论述了有关的机制,包括铁通道假说,铁载体,H^＋-ATP酶介导的铁转位,自由基和过氧化物的作用. 结语部分概述了目前这一领域中需要进一步研究的一些问题.