正常人及不育者精子核DNA的定量研究

用流式细胞术,Feulgen显微分光光度法,荧光显微分光光度法测定正常人精子核DNA相对含量:结果表明,上述方法所测得的精子核DNA相对含量稳定,变化范围小。同时用Feulgen显微分光光度法测定不育者精子核DNA相对含量。显示不育者精子核DNA相对含量高于正常人,提示精子核DNA核蛋白复合物异常可能是某些男性不育症的原因。此项研究为诊断男性不育症提供了新方法,在男性学精子核分子研究方面提供了依据。     

七星瓢虫成虫脂肪体细胞核的多倍性现象

为要了解七星瓢虫(Coccinella septempunctata)成虫不同发育时间及不同发育部位脂肪体细胞核DNA合成的情况及激素对DNA合成的调节,我们以扫描显微分光光度法测定了脂肪体细胞核DNA的相对含量,并以该虫精细胞核作为单倍体参考标准,从而计算出脂肪体细胞核的倍体值。本文对雄成虫及不同发育阶段的雌成虫脂肪体细胞核DNA含量进行了测定,结果表明有多倍化现象发生;而且随着生殖腺的成熟,DNA 分布趋向于较高倍体。用ZR-512处理雌虫,经72小时后与对照相比脂肪体细胞核DNA合成较多,而且脏壁层脂肪体较体壁层脂肪体出现更为复杂的倍性变化,表明 ZR-512对DNA合成有促进作用。     

稻胚发育过程中细胞核内DNA增殖的特点

应用显微分光光度技术测定的稻胚发育过程中核DNA含量的结果表明,球形胚中细胞核DNA含量较高,多倍性明显,C值较集中在6－12C,个别的最高达238或439C,它们可能为胚柄细胞;DNA含量差异明显可能与它们的分化潜能有关。分化初期、中期及成熟胚细胞核DNA合量一般不及球形胚高,不同倍性的频率分布亦较球形胚分散,但多倍性仍明显;胚分化完全后胚细胞核DNA含量较多变动在20－56C范围内,但盾状体细胞核DNA含量明显高于胚芽、胚根原基。说明胚器官原基间核DNA的增殖或复制特点不同。核DNA含量高和不同器官原基间差异复制的不同可能是胚分化的前兆和基础。     

激光显微照射结合细胞化学分析研究微核仁形成的机理

用氩离子激光显微照射雄性长鼻鼷肾脏上皮细胞株(PTK_2)间期细胞的核仁后,分别对核仁内RNA和DNA进行特异染色,并使用显微分光光度计对核仁内DNA的相对含量进行测量。结果表明,激光照射能够破坏核仁内的DNA和RNA,进一步证明了“候补”核仁组织区的存在是可靠的。激光照射核仁后银染的结果是“候补”核仁组织区存在的较直接证据。实验结果进一步证明,微核仁的形成是由“候补”核仁组织区所决定的。     

显微扫描分光光度法在昆虫研究中的应用

<正> 自从1936年Casprson氏利用显微分光光度法对核酸在紫外光区的吸收作先驱性的研究以来,此法就成为细胞学分析的一种主要工具和定量研究细咆內化学物质的重要方法。我们曾用显微扫描分光光度法对七星瓢虫、蓖麻蚕、柞蚕等昆虫脂肪体细胞核中DNA含量进行了测定,对单个细胞的成分进行了分析。 原理 按Lambert-beer定律,平行的单色光透过均匀的吸收层时,光的透射与吸收关系如下:     

用显微分光光度术测定水稻根尖细胞核中DNA含量的分析

用显微分光光度术测定粳稻很尖组织细胞核中Feulgen－DNA含量,C值为0．322－2．651pg,较多集中在0.904－2．068pg,平均为1．469pg。说明报关组织中有不同倍性或多线性细胞,根组织分化过程中细胞核基因组复制特点不同。经秋水仙素处理不同时间后,核DNA含量相应增加,但核之间的含量差异仍然存在。根据核DNA含量的增加值,计算很尖细胞分裂周期平均为11．54h.     

烟草雌、雄配子DNA含量变化

采用显微分光光度法测定了烟草（Nieotiana tabacum）精细胞和卵细胞的DNA含量。烟草是二胞花粉,花粉萌发后生殖细胞在花粉管中分裂形成精细胞。授粉后45h花粉管到达子房,在花粉管内的精细胞DNA含量为1C。当花粉管在退化助细胞中破裂,释放出的两个精细胞开始合成DNA。在与卵细胞融合前,两个精细胞DNA含量接近2C。随着精细胞的到达及合成DNA,卵细胞也开始合成DNA,融合前的卵细胞DNA含量也接近2C。精、卵细胞融合后,合子DNA含量为4C。烟草雌、雄配子是在细胞周期的G2期发生融合,属于G2型。     

一种测量细胞面积的显微光度方法

细胞生物学研究中广泛应用显微分光光度计测定单个细胞中特定物质的含量。通常在测含量的同时还要求获得单个细胞内此种物质分布的面积。对形状规则的被测物质,一般常用目镜测微尺测出长度,再算出面积。但这种方法不仅费时,费力,而且不适于测量形状不规则的单个细胞。我们在采用双区法,在测量物质含量的同时,可以很方便地测出不规则形状细胞内被测物质所占的面积。显微分光光度计测量物质含量的方法中常用的有两种——双区法和双波法。在公式推导中有一项被测物面积:B(1—F),其中(1—F)是测量光阑面积中含有被测物部份所占的百分数,B是测量光阑面积。     

大鼠肺内表皮生长因子(EGF)之分布及缺氧对其含量的影响

本文用免疫体金银法对大白鼠肺内表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)进行了定位研究,并观察缺氧时肺内 EGF 含量的变化。结果显示正常大鼠肺泡细胞、支气管粘膜及肺内血管壁上均含有 EGF 免疫阳性反应物质;缺氧时,肺内 EGF 含量增加。这提示 EGF 不仅对肺具有一定的生理学影响,而且可能参与缺氧时肺的某些病理学过程。     

烟草雌、雄配子DNA 含量变化

采用显微分光光度法测定了烟草( Nicotiana tabacum) 精细胞和卵细胞的DNA 含量。烟草是二胞花粉, 花粉萌发后生殖细胞在花粉管中分裂形成精细胞。授粉后45 h 花粉管到达子房, 在花粉管内的精细胞DNA 含量为1C。当花粉管在退化助细胞中破裂, 释放出的两个精细胞开始合成DNA。在与卵细胞融合前,两个精细胞DNA 含量接近2C。随着精细胞的到达及合成DNA, 卵细胞也开始合成DNA, 融合前的卵细胞DNA 含量也接近2C。精、卵细胞融合后, 合子DNA 含量为4C。烟草雌、雄配子是在细胞周期的G2 期发生融合, 属于G2 型。     

何氏奥库线虫在生长过程中肠细胞核内DNA含量变化的细胞光度法分析

1.何氏奥库线虫生长过程中,肠细胞核平均数目逐渐增多,但未观察到有丝分裂,只出现近似无丝分裂的图象。该线虫肠细胞核数目和核体积形成相反的变化。2.为了阐明线虫肠细胞的遗传信息含量的变化,应用细胞光度法测定核内DNA 含量。结果表明,在相近体长的雌虫中,肠细胞核数目和每核平均DNA 含量成相反关系。凡细胞核较多的肠道,每核平均DNA 含量较低;反之亦然。如果选取肠细胞核数目相近的雌虫进行比较,随着虫体的长大,每核平均DNA 含量有所增高。3.这种线虫肠细胞核为多倍体,每核平均甚至高达3000C,但各核DNA 含量的分布曲线的高峰并不严格形成2~n 比例,显示这是由部分的双倍体DNA 不完全复制而成。4.尽管各线虫的肠细胞核数目和核体积相差悬殊,但是在相近长度的雌虫中,整个肠道的DNA 总量经常保持在一定数值范围内。随着虫体的增大,肠道DNA总量逐渐提高。5.这种雌虫的生殖过程连续交叉,不分成明显阶段,肠道DNA 总量反映虫体维持全身营养代谢的需要。显示代谢DMA 和仆基因的存在和变化,为深入阐明细胞分化原则提供依据。     

灵芝线粒体及其对菌丝生长、主要活性成分影响的分析

线粒体是为细胞提供能量（ATP）的细胞器,携带着自己的DNA——mtDNA,已有多种灵芝属菌株的线粒体基因组相继报道,但对于种内的线粒体基因组的分析较少,对核相同、线粒体不同的菌株间差异的研究也鲜有报道。本研究对两株灵芝线粒体基因组进行组装注释,根据差异片段构建分子标记进行种间分类。结果显示：两株灵芝线粒体基因组大小分别为49 233bp、61 563bp的闭环结构,含有15个常见蛋白编码基因,rRNA大小亚基基因及26个携带氨基酸的tRNA基因,其差异区段主要为内含子序列、大亚基及基因间区。根据cob、cox2基因序列能够进行灵芝种间区分,用于灵芝种间鉴定。本研究还根据灵芝119、灵芝无孢的单核菌株构建同核异质体（TY-119、TY-W）,分析线粒体对菌落形态、菌丝生长速度及多糖、三萜成分的影响,结果显示：同核异质体TY-W与TY-119菌落形态上有一定差异,同核异质体TY-W菌丝生长速度为4.77mm/d,是TY-119菌丝生长速度4.50mm/d的1.06倍,同核异质体TY-119菌丝、子实体阶段多糖含量分别为4.45mg/g、12.14mg/g是TY-W菌丝体多糖含量（3.23mg/g）的1.38倍、子实体多糖含量（10.24mg/g）的1.19倍;同核异质体TY-W菌丝、子实体阶段的三萜含量分别为6.82mg/g、11.45mg/g是同核异质体TY-119菌丝体三萜含量（9.26mg/g）的0.74倍,子实体三萜含量（9.10mg/g）的1.26倍。利用高效液相色谱分析同核异质体中灵芝酸含量显示同核异质体TY-W灵芝酸A、灵芝酸E、灵芝酸F含量分别为3.77μg/mL、14.29μg/mL、12.91μg/mL;是TY-119灵芝酸A含量（2.59μg/mL）的1.46倍、灵芝酸E含量（13.65μg/mL）的1.17倍、灵芝酸F含量（12.72μg/mL）的1.06倍。对同核异质体菌丝、子实体阶段多糖、三萜合成通路关键基因（pgm、ugp、gls、hmgs、hmgr、mvd、fps、sqs）表达量进行检测,显示两菌株间多数基因具有显著性差异。结果表明线粒体的不同会影响灵芝菌落形态、菌丝生长速度及多糖、三萜的含量,有助于我们进一步研究线粒体基因组。     

5—羟色胺、吗啡样物质和针刺镇痛

在171只大白鼠的实验中,分析脑内5-羟色胺(5-HT)、吗啡样物质(MLF)和针刺镇痛效果(针效)三者之间的关系。用辐射热甩尾法观察电针镇痛效应,用荧光分光光度法测脑内5-HT 含量,用放射受体分析法测脑内吗啡样活性。主要结果如下:一、MLF——针效 25只正常大鼠,测定脑内 MLF 活性(受体结合抑制率)为28.6±1.4(均值±标准误,下同)。20只大鼠给予电针30分钟,痛阈平均增长72%,脑     

冠突伪尾柱虫（Pseudourostyla cristata）实验再生研究

冠突伪尾柱虫(Pseudvurostyla cristata) 含约70枚大核。我们用显微手术横切G1期细胞,得前后两块相等断片;分别培养。60小时后,断片再生完成。在再生过程中,随细胞体积增大,大核数目也增加。大核的数目和细胞体积存在着一定的均衡关系。在细胞无性分裂过程中,许多大核改组后,融合成一个融合大核。这个融合大核具两个仔虫的大核数目和DNA量。我们用显微手术得到含融合大核的后断片。在后断片再生后恢复的虫体内,我们发现本应分配到两个仔虫中去的大核数目,被限制在一个虫体的大核数目上。这说明了细胞质可以影响和调节大核的数目。并还证明了这种虫体大核DNA量较正常虫的大核DNA量约多一倍。其中大部分虫体分裂时,大核不经改组就开始融合和分裂;从而使DNA量回复正常。同讨还发现小部分虫体通过排出大核多余核物质方式来调节大核DNA量。这些现象说明了细胞核质之间存在着一种调节相对平衡和相互协调的机制。     

淡色库蚊幼虫在发育过程中唾液腺细胞核DNA变化的细胞化学研究

(1)应用DNA—孚尔根细胞光度术与。~3H-TdR放射自显术相结合的方法分析每一细胞,发现在库蚊幼虫早期发育中,唾液腺细胞核DNA含量基本上呈2~n倍数增加。但在各龄期中均有一定比例的U细胞,其DNA含量虽偏离2~n倍数,但并非正在合成DNA;四龄后期此种细胞可达60%以上,并相应地在染色体上不同区域观察到DNA的不同积累,表明在库蚊幼虫唾液腺细胞核内DNA存在不均等复制。(2)用细胞光度法测定了库蚊精原细胞,脑神经节细胞分裂中期染色体和精子DNA含量,算得每单倍体DNA含量0.568微微克。以此为确定倍数值的基数,显示一龄幼虫唾液腺细胞核DNA含量主要为16C,二龄居于16C—32C之间,三龄64C,四龄居于128C—256C之间,最高倍数值860C。(3)放射自显术显示,连续复制居于S期的前期和中期,合成染色体大部分DNA;不连续复制居于S期的后期,合成的DNA所占比例较低。     

快速测定染色体损伤的微核测定法 Ⅰ.电离辐射对哺乳动物血液中淋巴细胞微核率的影响

本文介绍了用明胶-离心法分离和浓缩血液中淋巴细胞而后制片观察分析其微核出现率,并以此来测定染色体损伤的新方法。应用这种方法测定了大鼠受Co~(60)-r射线照射的剂量-效应和时间-效应;还对受265拉特照射后活存狗的远期效应进行观察。结果表明,与骨髓有核细胞微核测定以及染色体畸变分析的结果是一致的。本文还对其应用价值作了初步的讨论。     

应用显微放射自显影技术对辐射诱发的微核合成DNA研究——Ⅰ.不同照射量的效应

本试验用放射性比度为5μCi/ml的~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)标记经不同照射量辐照的蚕豆根尖细胞,应用显微放射自显影技术,研究微核的DNA合成。试验结果表明,不同照射量的γ射线对细胞及微核合成DNA的影响是明显的。微核细胞及微核的标记率随着照射量的增大而减少,呈线性递减关系。本文还根据微核细胞的标记类型,对微核在细胞遗传工程研究方面的应用价值进行了探讨。     

正丁酸钠对人胃腺癌细胞染色体数目和DNA含量的影响

培养的人胃腺癌MGc 80-3细胞经过正丁酸钠处理7天后,生长抑制率达50.7%,约有90%的细胞形态发生分化,其超微结构亦有显著改变。而且,在染色体数目上,超二倍体细胞由对照组的78%增加到实验组的96%,超三倍体和超四倍体细胞则分别从6%和14%下降至2%。同时应用~3H-TdR放射自显影和福尔根细胞光度法测定未标记细胞(G_1期)DNA含量,结果显示实验组比对照组降低了。而且在实验组的同一制片中,未分化细胞DNA含量平均为超六倍体值(DI=3.67和3.56),其中90%的细胞超过6C;分化细胞DNA含量则平均为近四倍体值(DI=2.03和1.99),其中近60%的细胞少于4C。两者差异统计显著,表明形态分化的人胃腺癌细胞的遗传物质含量明显减少,但这些细胞并非就是正常二倍体细胞。     

细菌基因在哺乳动物细胞中的表达

纯系繁殖的编码黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶的大肠杆菌(E.coli)基因,同一系列的由SV40DNA衍生的不同载体构成重组体DNA。用这样的重组体DNA转染培养的猴肾细胞,结果产生的转化体能合成大量的易于测定的大肠杆菌黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶。而且,把这种细菌基因引进到嘌呤核苷酸合成特性缺陷的人莱许—奈恩(Lesch-Nyhan)细胞,这些细胞的此种生理缺陷便得到了纠正。     

梨实生树不同发育区的叶片细胞学研究

采用显微分光光度计和显微图像分析仪比较研究了8年生梨实生树(Pyrus pyrifliaNakai)童区和成年区叶片细胞核 DNA含量、RNA含量和细胞、细胞核面积大小的差异。梨实生树从童区向成年区转变后,叶片内细胞核DNA含量上升,细胞内RNA合成加强,细胞和细胞核面积增大;同时,叶肉组织结构分化程度提高,叶面积增大,叶片加厚。