用考玛斯亮兰G—250迅速,灵敏地测定蛋白质浓度

蛋白质浓度测定法是生物化学实验室最常用的方法,目前用得比较多的有双缩脲法、Folin酚法。对混有核酸的蛋白质则用260nm和280nm的紫外光吸收测定法。如果利用肽键在远紫外区(205 nm附近)的光吸收,受氨基酸组成分的影响较小,则可更精确地测定蛋白质浓度。比较这些方法的优劣时我们发现:双缩脲法灵敏度低;Folin酚法需要较多的试剂,过程比较复杂,不准确;280nm和260nm的光吸收测定法精度不高,对不含核酸的蛋白质的测定有局限性;远紫外光吸收测定精度高,但芳香族和蛋白质二级结构如α-螺旋、β     

一种快速微量蛋白测定法

以往报道Lowry法的呈色反应通常须30min。本文介绍一种利用人工还原剂促使该反应迅速完成的改良法。笔者对这一方法进行了实验评价,初步探讨了二硫苏糖醇还原Folin试剂所形成的吸收光谱以及选用650um波长的机理。实验结果证明本法与对照法相关良好。     

透明质酸钠中蛋白质含量测定方法的比较

福林酚蛋白质测定法因为其测定的灵敏性,曾经一度成为应用最广泛的一种方法,但是由于其试剂的配制比较困难,因此后期逐渐被考马斯蓝法所代替,本文就用于测定透明质酸钠中作为杂质的蛋白质含量过程中,两种测定方法及其测定结果的不同之处进行分析对比。     

自动分光光度计测定蛋白质

<正>用Coomassie兰方法快速、灵敏地测定定蛋白质浓度正成为许多生化实验室的常规方法。但是,当大量的样品要测定蛋白质时,例如,在层析柱洗脱液的常规分析中,光密度的分别测定可能耗时冗长。而且,蛋白质-染料复合物结合到比色杯,还有从反应容器转移试剂混合物都可能造成误差。 本文报导了通过在塑料微孔板中完成反应和在同一容器中完成分光光度测定,克服了这些问题。自动分光光度计结果测定需时大为减少,且从96孔板上1分钟内读出并打印出结果。     

定量测定生物材料中少量蛋白质的一种简便方法

Lowry 等人通常使用定量测定蛋白质的方法需要操作40分钟左右,并且需要三种试剂。经 Miller 改进的这种技术,测定时间缩短约20分钟。通过以下方法可以缩短测定时间:用升高温度(50℃)以缩短显色时间和改用两种试剂,即用较小体积、较浓的碱性铜试剂和较多量、较稀的酚试剂。     

酸性蛋白酶的测定方法及缓冲液和底物的选择

酸性蛋白酶的测定方法 福林—酚试剂显色反应法的原理是:福林试剂(磷钨酸和磷钼酸的混合物),在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原,因而呈蓝色反应(钨蓝和钼蓝的混合物)。由于蛋白质分子中含有带酚基的氨基酸,利用蛋白酶分解蛋白质(底物),生成含酚基的氨基酸,与福林试剂作用,因而也呈蓝色反应。显色程度与底物在酶作用下产生的水解产物数量成正比,因此可推算出     

天然麝香抗炎蛋白质的研究Ⅰ.Mu-a-1的分离纯化及其部分性质的鉴定

天然麝香粉(Musk)经乙醚,乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Sephadex G-25,Sephadex G-50,和Sephadex G-100等柱层析,得到抗炎有效部分Mu-a,将此部分再通过DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-150等柱层析,得到一抗炎有效蛋白质,命名为Mu-a-1。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及超薄等电聚焦电泳,以高碘酸-schiff试剂及Coomassie R250染色和分子筛层析,均显示一条区带和一均匀吸收峰。以蒽酮试剂法测定Mu-a-1含糖量在40％左右。经氨基酸自动分析仪测定Mu-a-1是由16种氨基酸组成,其中Glu,Asp等酸性氨基酸居多,等电点(PI=3-4),为酸性糖蛋白。最小蛋白质碎片含374个氨基酸残基。用凝胶过滤法估测其分子量在20万左右。药理实验表明Mu-a-1对巴豆油引起小鼠耳部炎症具有明显的抗炎作用,平均7.5mg/kg剂量下,对炎症抑制率为72.3％,P<0.001。     

用4,4′-二羧酸-2,2′-二喹啉测定红细胞膜蛋白

细胞膜蛋白质的测定在生物物理、生物化学及医学等领域的研究中起重要作用,许多细胞膜上酶、离子、脂类、基团及功能的测定均与膜蛋白的水平有关,需测定膜蛋白量。目前膜蛋白的测定大多采用酚试剂法,该法灵敏度高,但酚试剂在碱性溶液中不稳定,干扰因素多,特异性差,在有非离子型表面活性剂存在下易形成难溶性沉淀,不能用于自动分析仪器。     

几种常用中草药抗氧化活性研究(英文)

当归、黄芪、银杏叶、益母草、野甘草是中国传统中药材,几千年来一直为中国人民所认可,在中国和世界都具有重要的科研和药用价值。本研究采用HO&#183;清除及对肝微粒体和亚油酸脂质过氧化抑制的方法,测定五种草药精油和水煮提取物的抗氧化活性;采用Folin—Ciocalteu试剂法测定它们的总酚含量;用肝细胞体外培养法测定它们的细胞毒性并对它们的作用机制进行分析。结果发现五种草药提取物都具有一定的抗氧化活性,尤其是益母草、野甘草、银杏叶的水煮提取物活性较强,其抗氧化活性与总酚含量存在较好的线形关系。此外,本论文还为研究这些草药的一些抗病机制提供参考依据。     

棉花植株中的单宁测定方法研究

通过 3种方法测定棉花组织中单宁含量比较表明,Folin酚还原法测定的 4个品种不同组织和不同生育期顶叶的含量显著高于正丁醇盐酸法 (即花色素反应,专门用于缩合单宁的测定)近 2倍,说明这种方法测定出的是相对总酚含量,用于表达棉花缩合单宁的含量是不合适的,而香草醛法测定结果与正丁醇盐酸法差异不显著,可用于棉花组织单宁含量的测定.在棉花各个组织中,花萼、铃皮和叶片缩合单宁含量较高,陆地棉中一般达 5%～10%;花瓣、花柱子房和铃心中含量较低 (2%左右).顶端嫩叶缩合单宁含量从苗期 (1%以下)起不断增加,至吐絮期达最高 (10%左右),表明缩合单宁含量与植物组织成熟衰老和木质化程度密切相关.     

几种微量测定蛋白质新方法的比较

蛋白质的微量定量测定法至今最广为使用的是Lowry改进的Folin酚法。但是Lowry法的操作较为麻烦,灵敏度有时也达不到要求,因此在最近的十年,许多研究者仍在继续寻找更为合用的新方法。我们在参考国外文献的基础上,有选择地建立了几种微量测定蛋白的新方法,并对它们的优缺点和适用范围加以比较。现将主要结果介绍如下。材料和方法一、Lowry法配制含有下列成分的混合溶液。(A)Na_2Wo_4·2H_2O 100克、NaMo_4·2H_2O 25克,加     

荧光胺的合成和应用

近几年来,在蛋白质化学研究中,分析微量化的重要方面之一是使用荧光方法。在氨基酸、多肽、蛋白质测定中,荧光胺(Fluorescamine)可与游离的氨基反应,产生荧光的物质,借此测定的灵敏度可提高达10~(-12) 克分子。荧光胺在柱层析、薄层层析中都可用来测定氨基酸和多肽;也有用作抗体荧光标记的荧光试剂。此试剂已有Hoffman-La Roche公司生产出售,由于此试剂价格昂贵,因而很多实验室都不能普遍使用。本实验室使用国内的现有试剂,参照了有关的方法尝试合成该试剂,现已初步合成。合成的试剂与进口的Hoffman-La Roche公司的产品作了比较,基本符合。并且就此试剂在溶液     

2002年生物奥赛冬令营实验试题（续）

(二)生物化学部分一、蛋白质含量测定蛋白质含量测定有许多方法,考马斯亮蓝(G-250)比色测定是最灵敏的方法之一。考马斯亮蓝可与蛋白质通过氢键结合生成复合物,结合符合比尔定律。结合前颜料为红色,结合后为蓝色,最大光吸收由465nm转变成595nm。通过测定595nm处最大光吸收的增加,可知结合蛋白质的量。蛋白质和染料结合是一个快速的过程,两分钟内即可完成,并可稳定1小时,测定范围在10—100μg/ml蛋白质之间为线性范围,去污剂有颜色干扰,可影响比色结果。本实验是利用考马斯亮蓝与不同量蛋白质的标准曲线来目测未知蛋白质溶液的蛋白质含量,并…     

用化学方法降解肽链N-末端被封闭的残基及其鉴定

在测定蛋白质或多肽的一级结构时,常会遇到N-末端被封闭的情况,使Edman降解试剂失去作用,无法用正常的降解程序进行蛋白质或多肽的一级结构的测定。N-末端受封闭的种类很多,其中主要是乙(甲)酰化和焦谷氨酰环化。它们大量存在于自然界的蛋白质或活性多肽中,也有部分是在处理过程中通过化学反应形成的。目前对N-末端酰化的肽链结构除了用质谱法等物化方法测定外,几乎没有别的更好的方法,至于焦谷氨酰残基环化的肽     

蛋白含量检测的抗干扰新方法

为提高蛋白质含量检测方法的抗干扰能力,从福林酚试剂法入手,以牛血清白蛋白为标准样品,重新设计制定实验试剂组成与配比等,获得蛋白质含量检测新方法,然后探讨新方法的适用检测波长范围和稳定性,并利用细胞全蛋白裂解液分析它对多种常见干扰物质的包容性。实验发现,新方法不仅能准确检测蛋白质含量,对蛋白质测定液中表面活性剂的耐受浓度,如十二烷基硫酸钠(SDS)、NP-40和TritonX-100分别达到10%、2%和1%;螯合剂乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)和Ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid(EGTA)则分别达25 mmol/L和1 mmol/L;对还原剂二硫苏糖醇(DTT)和β-ME的包容浓度均为1 mmol/L;而含氮化合物硫酸铵与尿素则分别为0.5 mol/L和4 mol/L。与原方法相比较,对常见干扰物质的耐受性有显著提高,说明新方法适用含多种干扰物质的蛋白质溶液,在生命科学研究领域具有广泛应用前景。     

用化学方法降解肽链N-末端被封闭的残基及其鉴定

在测定蛋白质或多肽的一级结构时,常会遇到N-末端被封闭的情况,使Edman降解试剂失去作用,无法用正常的降解程序进行蛋白质或多肽的一级结构的测定.N-末端受封闭的种类很多,其中主要是乙(甲)酰化和焦谷氨酰环化.它们大量存在于自然界的蛋白质或活性多肽中,也有部分是在处理过程中通过化学反应形成的.目前对N-末端酰化的肽链结构除了用质谱法等物化方法测定外,几乎没有别的更好的方法,至于焦谷氨酰残基环化的肽     

植物叶片蛋白质双向电泳技术的改进与优化

通过对传统的双向电泳方法进行改进与优化,得到了一种适合于分析植物叶 片蛋白质的双向电泳新方法。用改进后的方法对水稻不同时期成熟叶片蛋白质进行双向电泳分离,结果显示其稳定性和重复性好,分辨率较高,经考马斯亮蓝染色后可分辨出300多个蛋白质(肽)点。它们的等电点和分子量主要分布于pI4.1-8.2和10-100kDa之间。本文还就实验过程中出现的一些技术问题进行了讨论。 Abstract:Base on the method of O farrell,an improved procedure for the two-dimensional gel electrophoresis of leaf proteins is presented.The two-dimensional separation of proteins from the mature leaves of different developmental stages of rice provides distinct and steady results.The detected protein(peptide)spots stained by Coomassie brilliant blue R-250 are more than 300,with isoelectric points(pI)ranging from 4.1 to 8.2 and molecular weights(MW)from 10 kDa to 100 kDa.     

鸡冠花种子蛋白质的提纯及分析

鸡冠花种子干燥后用石油醚脱酯,用凯氏定氮法测定蛋白质含量。按Osbern系统分别提取白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白;用Folin一酚试剂法测定各自相对含量,并用单向和双向SDS—PAGE方法分析种子总蛋白和4类不同溶性蛋白质的组成成分及这些组份的热稳定性。实验发现:鸡冠花种子蛋白质含量达26.04％,白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白的相对含量分别为11.5％、72％、4.6％、12％。SDS—PAGE表明;其种子蛋白中20KD球蛋白成份含量最高,其它一些次要组分为63KD、61KD、15KD、13KD白蛋白成份,58KD、37KD、23KD球蛋白成份,39KD、34KD、25KD谷蛋白成份及26KD醇溶蛋白成份,其中58KD由37KD和20KD两亚基经二硫键连接而成,39KD组份由24.5KD和18KD两亚基通过二硫键连接而成,23KD球蛋白组份遇热沉淀。     

考马斯亮蓝—银染色法——一种更灵敏的凝胶蛋白质染色法

我们曾报道一种重复性好而灵敏的电泳凝胶蛋白质染色法。其后发现银染色法虽然灵敏,但有一定的选择性,某些蛋白不易被银染色着色。若将考马斯亮蓝染色与银染色相结合,则可弥补彼此弱点,而且可提高灵敏度,是一种较为理想的凝胶蛋白质染色法。一、材料与方法(一)试剂丙烯酰胺、双丙烯酰胺、SDS 为国产品,均重结晶后使用;考马斯亮蓝 G—250及戊二醛(Fluka 产品);硝酸银 GR 级(西安化学试剂厂产品);Ampholine(LKB 产品);尿素     

酚-次氯酸钠显色法测定大鼠脑中游离氨-N含量

本文介绍一种用酚-次氯酸钠试剂直接测定动物组织样品中游离氨-N含量的方法,此法简便、灵敏、省时,最小检测量为0.05微克氨-N。酚-亚硝基铁氰化钠试剂:取酚0.6克、亚硝基铁氰化钠5毫克、加水至50毫升,放置24—48小时后使用。次氯酸钠试剂:Na_2HPO_4·12H_2O 1.79克、Na_3PO_4·12H_2O 1.9克、氢氧化钠0.5克、次氯酸钠原液1毫升,加水至50毫升,贮于棕色瓶内。硫酸铵标准液(1毫升=0.05