北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型的分离及鉴定

了解北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)毒株特点,为猫疱疹病毒Ⅰ型的进一步研究及对猫的感染预防控制奠定基础。经特异性PCR检测为FHV-1阳性临床猫眼鼻拭子,经过处理,接种CRFK细胞,通过细胞培养分离病毒。通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察、病毒毒力测定及基因序列分析等对分离株进行鉴定。PCR检测FHV-1阳性的14只猫眼鼻拭子接种CRFK细胞,有6只猫样本能使CRFK细胞发生圆缩、拉网集聚等病变;6个样本接种的CRFK病变细胞滴片进行免疫荧光试验,均产生绿色荧光反应;经传代培养,有5株分离株能够稳定传代,其中有2株弱毒,3株强毒;电镜下5株分离株均可见直径100~160nm的球型病毒粒子;5株分离株与FHV-1标准株C-27及2个不同公司来源疫苗株gB、gD基因核苷酸比较同源性均为99%以上。实验室成功分离保存5株能稳定传代的FHV-1毒株,5株分离株与FHV-1标准株及2个疫苗株亲缘关系很近。     

猫疱疹病毒1型的分离鉴定及生物学特性分析

为了丰富对猫疱疹病毒1型（Feline herpesvirus-1,FHV-1）基因组变异情况的研究,并为疫苗研发提供候选毒株,本研究对250份猫眼鼻拭子和肺组织样品进行PCR检测,对FHV-1阳性样品进行氨基酸变异和系统发育分析,并进行毒株的分离鉴定及动物回归试验。结果显示,250份临床样品中FHV-1型阳性率为20.8%(52/250)。测序得到10个毒株的8个囊膜蛋白基因序列,氨基酸序列分析显示9个毒株的gI基因发生非同义突变（M165T）,QN-1毒株gD基因发生非同义突变（A342T）。系统发育分析表明毒株间变异小、进化距离短。病原分离鉴定获得1株FHV-1毒株（命名为FHV/BJ-1）,病毒滴度为106.65 TCID50/0.1 mL。动物回归试验结果显示,接毒组家猫在8 d内全部死亡,剖检及HE染色发现肺部病变严重,有淤血及炎性细胞浸润,气管缺少上皮细胞,且鼻组织、气管和肺组织的病毒载量最高。上述结果表明,FHV-1流行毒株基因保守性好,各毒株之间主要囊膜蛋白变异程度低。分离株FHV/BJ-1毒株为强毒株,是疫苗评价的理想毒株,为疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。     

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

本文调查了猫科动物一种以倦怠、厌食、呕吐、下痢、血便、体温升高和白细胞数减少为特征的烈性传染病的发病规律和流行情况。利用猫肾细胞培养,从自然病例中分离出我国第一株猫泛白细胞减少症病毒——FNF8毒株。从而证实了我国有猫泛白细胞减少症的存在。     

犬科、猫科动物细小病毒血清抗体调查

肉食兽细小病毒属于细小病毒科、细小病毒属中的一类病毒,能够感染多种动物,导致犬的出血性肠炎、幼龄犬的心肌炎、猫的白细胞减少、出血性肠炎、幼龄猫的共济失调症以及水貂的肠炎等多种疾病.血清学调查发现,由肉食兽细小病毒引起的疾病存在于世界各地.在我国,无论是家养还是野生动物均有细小病毒相关疫病的流行,对我国犬科和猫科动物的生存和健康构成巨大威胁(许树林等,1996;宋桂强等,2007).     

猫疱疹病毒I型环介导等温扩增检测方法的建立

建立一种环介导等温扩增(LAMP)检测方法,实现对猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的快速、准确、简便检测。根据Gen Bank中FHV-1的TK基因设计引物,优化反应条件,通过琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ染色观察分析扩增效果。该方法特异性好,敏感性检测实验表明该检测方法最低能够检测到的模版是101copies/μL,是PCR检测方法灵敏度的10倍。金属浴、烘箱、恒温水浴锅与PCR仪四种不同的扩增反应仪器均可达到LAMP的要求,扩增出梯形条带。建立了针对FHV-1的LAMP检测方法,该种检测方法具有高特异性的扩增引物,对检测的仪器、反应条件及检测人员技术要求比较宽松,从扩增开始到通过SYBR GreenⅠ实现的结果可视化解读所用时间不到1 h,实现了快速、准确、简便检测FHV-1的目的。     

猫疱疹病毒Ⅰ型环介导等温扩增检测方法的建立

建立一种环介导等温扩增(LAMP)检测方法,实现对猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的快速、准确、简便检测。根据Gen Bank中FHV-1的TK基因设计引物,优化反应条件,通过琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ染色观察分析扩增效果。该方法特异性好,敏感性检测实验表明该检测方法最低能够检测到的模版是101copies/μL,是PCR检测方法灵敏度的10倍。金属浴、烘箱、恒温水浴锅与PCR仪四种不同的扩增反应仪器均可达到LAMP的要求,扩增出梯形条带。建立了针对FHV-1的LAMP检测方法,该种检测方法具有高特异性的扩增引物,对检测的仪器、反应条件及检测人员技术要求比较宽松,从扩增开始到通过SYBR GreenⅠ实现的结果可视化解读所用时间不到1 h,实现了快速、准确、简便检测FHV-1的目的。     

猫科动物的分类——分子系统学框架和化石证据

猫科动物的演化关系传统上一直是富有争议的,这很大程度上造成了猫科在属一级的分类众说纷纭。新兴的分子生物学技术为我们理解猫科动物的系统发育提供了新的视角,本文回顾了近些年来的猫科分子系统学研究,以Johnson等（2006）和李钢等（2016）的研究结果为核心,同时结合确切的化石记录进行佐证,推断了猫科的演化历史。我们发现,分子系统学提出的现代猫科动物于晚中新世开始适应辐射、先后分化出了8个支系等观点,与化石证据基本吻合;但是分子系统学对部分支系起源的推断与化石证据存在差异。结合化石记录的分析,我们认为现代猫科8个支系中除狞猫支系和虎猫支系以外,其余均最有可能起源于亚洲,现代猫科动物在演化过程中至少经历了30次洲际迁徙。结合演化历史和形态学研究,我们遵循邱占祥等（2004）的观点,将现存的猫科动物全部归于猫亚科（Felinae）,并将现代猫亚科动物划分为15个属40个物种。     

从云豹分离的一株猫泛白细胞减少症病毒的特性

从病死的云豹体内分离到1株猫泛白细胞减少症病毒,进行了鉴定,研究了它的血凝特性和对猫与水貂的致病力,分析了它与猫泛白细胞减少症病毒参考毒株(FNF-8)抗原的相关性。 用中国兽药监察所提供的猫肾传代细胞(FK)进行病毒的分离鉴定。同步接种和异步接种测得病毒的TCID50均为4.8/ml。病毒经乙醚、酸(pH3.0)、热(56℃1小时)     

虎剑齿虎及其进化

虎剑齿虎及其进化邱占祥虎在动物分类学上属哺乳动物纲有胎盘亚纲肉食目猫科。现生的猫科动物,按照体形和叫声可以大致地划分为两类：即小型的“喵”叫的猫类,和大型的“吼”叫的虎类（包括狮、虎、豹等）。所有这些猫科动物,不管它们在体形大小和皮毛花色上有多大的差...     

荒漠猫的演化遗传、分类和保护研究进展

荒漠猫(Felis bieti)是中国特有的野生猫科动物, 也是世界上最鲜为人知的猫科动物之一, 在IUCN濒危物种红色名录中列为易危(Vulnerable, VU), 在我国被列为国家一级重点保护野生动物。本文对荒漠猫的野外分布现状、分类学地位、遗传多样性、演化史以及致危因素等近期研究进展进行了综述和展望, 以期为荒漠猫的保护提供科学依据。荒漠猫定名于1892年, 其分类学地位长期存在争议。形态学证据支持其独立物种的划分, 但分子遗传学研究则表明荒漠猫与亚洲野猫(Felis silvestris ornata)等野猫亚种之间的演化距离相当, 建议将其归为野猫亚种(F. s. bieti)。然而研究也表明包括荒漠猫在内的各野猫支系之间的分歧时间已有100万年以上, 因此解决野猫类群分类学争议的另一种可能是将所有野猫亚种提升为物种水平, 从而维持荒漠猫的独立物种地位, 不过这需要对所有野猫类群在全基因组层面深入全面地分析。最新的基因组学研究揭示荒漠猫与亚洲野猫(F. s. ornata)存在着古老的基因交流, 与青藏高原同域家猫之间存在近期且广泛的基因渗透。该遗传杂交信号以荒漠猫到家猫为主并局限于荒漠猫分布区, 时间尺度对应于20世纪中叶, 可能与藏区社会经济的发展以及家猫种群在当地的增长有关。该发现也意味着青藏高原增长的家猫种群对于同域分布的野猫产生的遗传影响将是亟需关注的问题。IUCN最新评估结果显示, 荒漠猫明确分布区域仅限于青藏高原东部, 包括青海东部、四川西北部、甘肃西南部以及紧邻青海的西藏东南部局部区域。荒漠猫当前面临着包括鼠药施用造成的二次毒害、毛皮贸易、开发建设造成的栖息地的丧失和碎片化、路撞以及与同域家猫杂交等在内的直接或潜在威胁。对荒漠猫开展更全面的调查和深入的研究以及评估并制定有效的保护管理措施, 是保护我国唯一的特有猫科动物的重要举措。     

从12S rRNA和Cyt b基因部分序列研究13种猫科动物的分子系统关系

为探讨中国猫科动物(Felidae)的系统发生关系,本文对中国产13种猫科动物的12SrRNA基因(约371bp)和细胞色素b基因(Cytb)部分序列(约355bp)进行了分析,并采用“最大简约法”和“最大似然法”构建了分子系统树。结果表明:在Cytb基因序列中,有113个位点存在变异(约为总位点数的31.8%),高于12SrRNA基因序列的44个变异位点(约为总位点数的11.9%);构建的分子系统树显示,猞猁(Lynxlynx)可能是中国最早起源的猫科动物,与其它猫科动物之间的亲缘关系较远,支持将其立为猞猁属(Lynx)的观点;草原斑猫(Felislibyca)、丛林猫(Felischaus)、兔狲(Otocolobusmanul)和荒漠猫(Felisbieti)具有较近的亲缘关系,支持将兔狲划归于猫属(Felis)的观点;金猫(Caopumatemminckii)、云猫(Pardofelismarmorata)具有较近的亲缘关系,但它们与猫属物种之间的亲缘关系可能较远,不支持将它们划归于猫属;豹猫(Ponailurusribengalensis)、渔猫(Prionailurusviverrinus)具有较近的亲缘关系,支持将它们同归于豹猫属(Ponailurus);云豹(Neofelisnebulosa)、豹(Pantherapardus)、雪豹(Unciauncia)、虎(Pantheratigris)具有较近的亲缘关系,支持将它们同归于豹属(Panthera)的观点     

家猫及其他猫科动物的生殖工程研究

在脊椎动物中,猫科动物是一类比较特殊的动物类群,共有37种动物,除家猫外,其余均为珍稀或临近灭绝的濒危动物,因而了解家猫的生殖习性和生殖规律,尤其是了解家猫胚胎工程领域,如猫卵母细胞的体外成熟（in vitro maturation IVM),体外受精（in vitro fertilization,IVF),显微受精等,对于利用现代生殖技术研究和探讨非家猫猫科动物的繁殖和保护具有极为重要的借鉴意义。     

重组虎源H5N1流感病毒HA基因犬2型腺病毒的构建与实验免疫研究

H5N1流感病毒可以对虎和猫产生致死性感染,为研制可用于预防猫科动物流感的新型疫苗,构建了重组虎源H5N1流感病毒HA基因的犬2型腺病毒。将A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)的HA基因克隆入pVAX1载体中,然后将含有HA基因的表达盒(CMV HA PolyA)克隆入pVAXΔE3的SSPⅠ酶切缺失处,获得含有HA表达盒的穿梭载体pΔEHA。用SalⅠ NruⅠ分别对pΔEHA和pPoly-2-CAV2进行双酶切,将含有HA表达盒的SalⅠ NruⅠ片段克隆入pPoly2-CAV2,获得了在E3区缺失处插入HA表达盒的重组质粒pCAV-2/HA。释放CAV-2/HA重组基因组转染MDCK细胞,获得了重组活病毒CAV2/HA,经Western blot分析表明重组表达产物可被流感病毒HA单克隆抗体3A13所识别。使用该重组病毒免疫猫可以产生效价为1∶8~1∶16的抗H5亚型流感病毒血凝抑制抗体。     

虎源猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定

利用细胞培养方法从中国某虎园送检的腹泻虎肠内容物中分离出1 株细小病毒(TPV/ HT - 69),经系统的形态学、理化学、血清学试验、人工感染试验、PCR 扩增和VP2 基因序列分析,符合猫泛白细胞减少症病毒特征,证明该毒株为猫泛白细胞减少症病毒强毒。     

疫苗

881180感染性重组病毒,含有所述猫白血病病毒疫苗及其生产方法〔专,英〕/Nunbe-rg,J .H.…1 European Patent Appl.EP 0216564.Pub.01 .04 .87.Appl.US.774040,filed 09.09.86〔译自CBA,1957, (6),2576〕 含有一个嵌合猫白血病病毒(FeLV)外壳基因的感染性重组病毒可用作猫白血病疫苗。用病毒DNA和一个插人性载体转染易感的哺乳动物细胞来制备病毒。该载体带有由在细胞内具活性的启动子、翻译起始密码子和为FeLV病毒外壳蛋白编码的一个DNA片段组成的嵌合基因。编码蛋白的DNA受控干启动子。用这种感染性重组病毒和一个衍生载体或…     

猫家有个小不点

正"世界上最小的猫科动物是谁?"糖妹思索几秒后,一本正经地回答:"Hello Kitty!"……哈哈,别生气,糖妹只是和各位开个玩笑活跃一下气氛。本社独家神秘宝典《小哥白尼·野生动物档案》中明确记录,这个问题真正的答案是——锈斑豹猫。接下来,我们就来详细了解一下这位动物"小朋友"吧!世界上最小的猫锈斑豹猫是世界上现存最小的猫科动物,主要生活在印度及斯里兰卡的落叶林以及灌木丛地带。     

评估荒漠猫的日活动节律: 基于红外相机与卫星颈圈数据的对比

对于活动隐秘、难以直接观察的野生猫科动物, 红外相机与卫星追踪颈圈是目前研究其日活动节律的两种主要采样工具。日活动节律基于对动物活跃状态(即活跃或不活跃)的判断, 由于获取数据的机制不同, 两种方法所获得的动物日活动节律模式之间可能存在差异, 但缺乏基于野外实地调查的系统对比评估和分析。荒漠猫(Felis bieti)分布于青藏高原东部, 是唯一的中国特有猫科动物, 被列为国家I级重点保护野生动物。本研究以荒漠猫为例, 使用红外相机和卫星追踪颈圈两种工具, 于2020年6月至2021年12月对青海祁连山地区的荒漠猫进行调查, 分别基于放置在荒漠猫洞口(相机位点2个, 独立有效探测173次)、兽径(相机位点23个, 独立有效探测423次)两种红外相机布设方式和卫星追踪颈圈(追踪个体10只, 总有效定位点62,942个)所得的数据, 评估了该物种的日活动节律, 并对不同途径所得的活动节律模式间的差异进行了对比。结果显示, 荒漠猫全天都有活动, 在黄昏17:00-19:00时段存在一个活动高峰。全部红外相机探测数据与颈圈活动量数据获得的活动曲线重叠系数最高, 为0.89。与卫星追踪颈圈方法相比, 红外相机数据反映出16:00-21:00的活动水平更高; 这一时间段较高的活动主要来自洞口位点的红外相机探测数据。荒漠猫行为谱的对比分析结果显示, 不同方法所判断的动物“活跃”状态所对应的行为类型不同: 安装在洞口处的红外相机记录以繁殖、育幼相关的社会行为为主; 安装在兽径处的红外相机记录以移动、觅食等行为为主; 而卫星追踪颈圈只能相对粗略地区分荒漠猫的移动和静止。本研究的结果表明, 不同方法所获得的野生猫科动物的“活动节律”之间存在差异; 在不同方法记录到的数据中, 二元化的“活跃”或“不活跃”分类背后所反映的动物行为类别和含义是不同的。在对比不同方法获得的活动节律时需要谨慎, 应在对动物的行为模式和规律深入全面了解的基础上, 对数据做出恰当、准确的解读。     

Norden公司销售由Symbiotics公司开发的诊断猫白血病的诊断药

美国Norden Laboratories公司(NL,内布拉斯中州林肯市)最近出售醮棒型的猫白血病病毒(FeLV)检查药“Virastat/FeLV”。此种检查药是Symbiotic公司(加利福尼亚州San Piego)开发的,用的是对猫白血病病毒的单克隆抗体,检查猫的唾液。据NL公司经理Daniel B.Hannah说:“通过销售这种药盒,有可能为兽医提供一套猫白血病病毒     

前病毒插入诱变与白血病发生的研究进展

慢性白血病病毒包括禽白血病增生症病毒、猫白血病病毒、牛白血病病毒、长臂猿白血病病毒和小鼠白血病病毒等,它们的基因组结构完整,具有病毒复制能力,但是序列内不含有癌基因,这是此类病毒的共同特点,其中以小鼠白血病病毒最具代表性。小鼠白血病病毒感染动物后可产生不同类型白血病,潜伏期较长（3－4个月）。小鼠白血病病毒诱发白血病机制较复杂,是一个由多因子参加、多阶段发展的过程。本文就小鼠白血病病毒前病毒插入诱发的淋巴细胞白血病和粒细胞白血病中,原癌基因激活及其作用机制进行综述。     

H5N1亚型HPAIV人工感染家猫和小鼠的初步研究

WHO已经确认,H5N1亚型高致病性禽流感病毒HPAIV已经跨越种间屏障,可以使人类感染发病甚至死亡。为给人类该病毒感染建立动物模型,本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源HPAIVA/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7·36/0·1ml。分别经气管和鼻腔接种家猫和小鼠,进行该病毒的家猫和小鼠的初步人工感染实验。实验于BSLⅢ动物实验室中进行,观察期为21天。实验结果如下:1、家猫人工感染实验:选取对该病毒HI抗体小于1∶2的3月龄健康家猫6只,随机分为A、B两组,每组3只。A组为实验组,每猫气管内注射该病毒的稀释液1m…